脱氧核糖核酸定量的潜在基准方法研究进展

脱氧核糖核酸定量分析是食品安全检验、医疗诊断、转基因检测与病原微生物鉴定等相关领域的基础。常见的定量方法种类繁多,如紫外分光光度法、荧光染料法和实时荧光定量PCR法等等,各有所长,但测量结果缺乏可靠性、可比性和一致性。随着研究的深入与应用要求的提高,基准方法成为了核酸分析以及核酸测量能力评估的关键。本文综述了近年来三种成为潜在脱氧核糖核酸定量基准方法的研究发展,评述了各种方法的技术优势、不足与应用潜力,以期为其相关研究和利用提供参考。

山茱萸叶脱氧核糖核酸(DNA)提取方法的研究

目的 :研究山茱萸叶总DNA的提取方法。方法 :在传统CTAB提取法基础上 ,设计了几种山茱萸叶总DNA提取方案。结果 :采用优化改良的总DNA提取方法 ,从山茱萸叶片中提取的总DNA杂质少、质量好 ,RAPD扩增效果良好。结论 :该法可作其他含有多糖及多酚杂质的药用植物组织提取DNA的参考方法。

碱性品红荧光法测定脱氧核糖核酸及其机理的研究

以三苯甲烷类阳离子染料碱性品红 (RL)为荧光探针建立脱氧核糖核酸 (DNA)的定量分析方法。在近中性范围内碱性品红与DNA有较强的结合 ,生成复合物的荧光强度与DNA的量呈线性上升关系 ;线性响应范围为 0 .0 5～ 33.0mg/L(r =0 .990 4 ) ,检出限 39μg/L。方法用于样品中DNA含量的测定 ,取得满意的结果 ;对作用机理进行了探讨 ,认为RL与DNA相互作用存在插入结合形式。

硫酸喹啉荧光猝灭法测定脱氧核糖核酸

基于DNA在pH 2～ 4的范围内对硫酸喹啉的荧光具有较强的猝灭作用 ,建立了一种测定DNA的新方法。当DNA的浓度为 1 0～ 70 0 μg L时 ,荧光猝灭程度与DNA浓度呈线性关系 ,其线性回归方程为 :ΔIF =1 5 2 1 1 8+0 .1 1 0 3 8C(μg L) ;相关系数r=0 .9985 ;检出限为 5 .9μg L。本方法用于大肠杆菌提取的质粒DNA的测定 ,获得满意结果。

光谱法研究氧氟沙星-铽络合物与脱氧核糖核酸的相互作用

以氧氟沙星 铽 (Tb3+ )作为荧光探针 ,利用荧光光谱、吸收光谱研究了氧氟沙星 铽 (Tb3+ )络合物与脱氧核糖核酸 (DNA)的相互作用。研究表明 :在实验条件下 ,脱氧核糖核酸能显著增强氧氟沙星 Tb3+ 体系的荧光 ,据此建立了脱氧核糖核酸的测定方法 ,线性范围为 5 .0× 1 0 - 6 ～ 1 .0× 1 0 - 4mol L ;检出限为 1 .7× 1 0 - 6mol L,通过人血清中DNA测定的回收率实验 ,结果令人满意。实验还表明 :氧氟沙星 Tb3+ 探针与DNA分子之间主要是沟槽式结合。

香菇多糖对淋巴细胞脱氧核糖核酸蛋白体转录活性的影响

目的探讨香菇多糖对淋巴细胞脱氧核糖核酸蛋白体转录活性的影响。方法应用KL型免疫图像分析系统,对体外培养的T细胞核仁组成区相关蛋白(Ag-NORs)进行分析。结果培养液内含香菇多糖的T细胞Ag-NORs含量显著升高(P<0.05)。结论香菇多糖能促进T细胞增殖。

发酵法生产D-核糖技术的研究(Ⅱ)——D-核糖的生产方法

D-核糖是一种极为重要的戊糖，是生物体内遗传物质核糖核酸（RNA）、脱氧核糖核酸（DNA）及若干辅酶和维生素的组成成份，也是生物体内合成组氨酸、腺嘌呤、鸟嘌呤等重要物质的前体物质，在生物体内具有重要的生理、生化功能，广泛应用于食品、医药、化妆品和饲料工业等领域。在发酵法生产D-核糖技术的研究（Ⅰ）中主要介绍了D-核糖的性质和应用，本文主要论述D-核糖的生产方法。

茶树基因组DNA的高效提取方法

为了从富含多酚和多糖等多种次生代谢物质的茶树叶片中分离出高质量的基因组 DNA,对 4种植物 DNA提取方法进行改良后 ,以茶树春梢为材料 ,对提取效果进行了比较 ,并首次采用 CTAB区室法提取茶树基因组DNA.结果表明 ,用该 4种方法提取的 DNA,其 OD2 6 0 / OD2 80 都在 1.8以上 ,相对分子质量均大于 2 1kb,能完全被Eco R 酶切消化 ,也能获得清晰的 PCR扩增图谱 .因此 ,只要操作合理 ,4种方法均能提取出高质量的 DNA.

葡萄总DNA提取方法的比较研究

以葡萄幼叶为材料,分别采用溴化十六烷基三甲基铵(CTAB)法、高盐低pH法、简易法、高盐沉淀法和改良十二烷基硫酸钠(SDS)法5种方法提取总DNA,通过A260/A280值、琼脂糖凝胶电泳和RAPD对5种方法所得DNA溶液进行定量、定性分析和综合比较。结果显示高盐低pH法、高盐沉淀法综合效果较好,改良SDS法所得DNA纯度最佳。因此,在实际工作中还应根据实验目的选取最适合的方法。

DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳三种银染方法比较

目的 探讨DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)三种银染方法的特点及其适用性。方法 采用非变性PAGE垂直板对不同稀释度的 pBR 32 2MspⅠ分子量标准进行电泳分离 ,利用二种硝酸银染色法和一种银氨染色法染色 ,分析其灵敏度和噪声。结果 分子量Marker的所有条带都能染出灵敏度均为 2 5ng。在至少一个条带能染出的灵敏度方面 ,银氨染色法 ( 6 .2 5ng)低于其他两种方法。结论 时间方面Carlos等所建立的银染方法最快 ,仅需 2 0min。银氨法的噪声最低 ,结果易于保存。

介绍一种简便的蚤类DNA分离制备方法

基因分析的方法已被广泛应用于媒介昆虫的分类鉴定、抗性机理及杀虫机制等方面的研究。制备高纯度、未降解的DNA是进行基因分析研究的先决条件。

5种尿液BK病毒DNA提取方法效果比较

目的探讨尿液BK病毒DNA的最佳提取方法。方法分别采用高速离心沉淀法、SDS煮沸裂解法、NaOH煮沸裂解法、PEG沉淀法和Tris饱和酚抽提法提取尿中BK病毒DNA进行PCR扩增,对不同方法BK病毒检出率结果进行比较。结果高速离心沉淀法、SDS煮沸裂解法、NaOH煮沸裂解法、PEG沉淀法和Tris饱和酚抽提法BK病毒检出率依次为78%(31/40)、100%(40/40)、83%(33/40)、95%(38/40)、100%(40/40)。结论在对BK病毒DNA的提取操作中,SDS煮沸裂解法灵敏度和安全性较高。

对影响HBV-DNA PCR-ELISA定量方法测量精密度相关因素的探究

目的探讨影响HBV-DNA PCR-ELISA定量方法测量精密度的相关因素,以便优化各因素,从而提高测量的精密度.方法通过优化操作的时间、温度、特别是保证加液后的混匀、确保酶联后酶柱高度的精确、一致,以提高测量精密度.结果用优化操作方案与随意操作分别对HBV-DNA浓度值分别是5*104、5*105、5*106标样各测30次,得精密度(CV)分别是27.5%、21.6%、33.8%与78.5%、81.2%、116.7%.对30次测量结果进行配对t检验,P＜0.01则优化操作的测量精密度显著高于随意操作法.结论对于HBV-DNA的PCR-EISIA定量方法,规范操作非常重要,若按本文建立的优化方案操作,可将方法测量CV值控制在一个较小范围内.

共价闭合环状DNA检测方法的研究进展

对共价闭合环状脱氧核糖核酸的检测已成为乙型肝炎患者的临床药物试验研究及病理诊断的重要检验方法。目前,普遍采用三种对共价闭合环状脱氧核糖核酸定量检测的方法:选择性聚合酶链反应法,侵入者探针法和嵌合引物荧光聚合酶链反应法。每种方法均有各自的原理和优缺点,同时对提高检测的特异性,避免假阳性发生等方法学上的内容有共同点。由于目前尚未标准化,临床需根据实际选择合适的方法,使检查在操作,结果和价格上达到最大的优化。

月季总DNA提取方法的比较研究

以月季的幼叶为材料,分别采用CTAB法、SDS法、高盐低pH法、氯仿—异戊醇法对DNA的提取方法进行研究,结果表明:CTAB法适合叶片DNA的提取,所得DNA纯度较高。