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法医学中脱氧核糖核酸片段长度多态性的毛细管电泳分析
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作者 张海军 沈月华 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期625-625,共1页
关键词 法医学 脱氧核糖核酸 长度多态性 毛细管电泳分析 亲缘关系 鉴定
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脱氧核糖核酸在硬脂酸铝离子膜上固定杂交及BAR基因片段检测 被引量:4
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作者 焦奎 任勇 +1 位作者 徐桂云 张旭志 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2005年第10期1381-1384,共4页
将石墨粉、固体石蜡和硬脂酸按一定比例混合制得表面富含羧基的碳糊电极,然后在电极表面组装荷正电的铝离子膜。在硬脂酸铝离子膜上进行DNA探针的固定和与目标基因的杂交。以亚甲蓝为杂交指示剂,用循环伏安法优化了DNA的固定和杂交条件... 将石墨粉、固体石蜡和硬脂酸按一定比例混合制得表面富含羧基的碳糊电极,然后在电极表面组装荷正电的铝离子膜。在硬脂酸铝离子膜上进行DNA探针的固定和与目标基因的杂交。以亚甲蓝为杂交指示剂,用循环伏安法优化了DNA的固定和杂交条件。应用该电化学生物传感器以微分脉冲伏安法对转基因玉米外源BAR基因片段进行了检测,结果令人满意。 展开更多
关键词 脱氧核糖核酸 电化学生物传感器 铝离子 伏安法 BAR基因 硬脂酸铝 基因片段 离子膜 杂交 检测
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动力学涂层毛细管电泳分离双链脱氧核糖核酸片段 被引量:4
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作者 任吉存 方正法 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2002年第1期6-8,共3页
以异丙醇为聚合反应链转移试剂,水相法合成了短链聚N,N-二甲基丙烯酰胺(PDMA)。研究表明该聚合物能在毛细管内壁形成稳定的动力学涂层,从而有效地抑制电渗流和毛细管内壁与DNA的作用。这种介质被成功地应用于DNA片段... 以异丙醇为聚合反应链转移试剂,水相法合成了短链聚N,N-二甲基丙烯酰胺(PDMA)。研究表明该聚合物能在毛细管内壁形成稳定的动力学涂层,从而有效地抑制电渗流和毛细管内壁与DNA的作用。这种介质被成功地应用于DNA片段的高效分离。 展开更多
关键词 毛细管电泳 脱氧核糖核酸片段 动力学涂层 分离 DNA
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毛细管电泳快速分离脱氧核糖核酸的新方法 被引量:2
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作者 项小兰 何萍 +1 位作者 李小戈 何金兰 《分析试验室》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期13-16,共4页
在非离子表面活性剂胶束和0.075%羟乙基纤维素和一定量的甘露醇体系中,完成了脱氧核糖核酸(DNA)片段的快速分离。研究了DNA片段在不同胶束体系中的分离特点,指出在非离子表面活性剂胶束体系中,DNA片段的分离依据应该是胶束分配理论,而... 在非离子表面活性剂胶束和0.075%羟乙基纤维素和一定量的甘露醇体系中,完成了脱氧核糖核酸(DNA)片段的快速分离。研究了DNA片段在不同胶束体系中的分离特点,指出在非离子表面活性剂胶束体系中,DNA片段的分离依据应该是胶束分配理论,而且胶束分子量的大小决定DNA片段的分离选择性。 展开更多
关键词 非离子表面活性剂 胶束电动毛细管色谱 脱氧核糖核酸片段
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铂电极表面生物素-亲和素固载单链脱氧核糖核酸的电化学传感器 被引量:8
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作者 王保珍 杜晓燕 +1 位作者 郑晶 金滨锋 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2005年第6期789-792,共4页
通过直接吸附将亲和素固定在Pt电极表面,联于生物素标记的脱氧核糖核酸(DNA)探针,制备了电化学基因传感器,建立了Pt电极表面修饰单链脱氧核糖核酸(ssDNA)的方法。修饰电极与待测溶液中人工合成的转基因食品中常有的花椰菜花叶病毒35S启... 通过直接吸附将亲和素固定在Pt电极表面,联于生物素标记的脱氧核糖核酸(DNA)探针,制备了电化学基因传感器,建立了Pt电极表面修饰单链脱氧核糖核酸(ssDNA)的方法。修饰电极与待测溶液中人工合成的转基因食品中常有的花椰菜花叶病毒35S启动子(CaMV35S)或根癌农杆菌终止子(NOS)DNA片段进行杂交,以邻菲罗林钴络合物[Co(phen)3+3]为杂交指示剂,循环伏安法测量,通过杂交前后指示剂峰电流的变化检测DNA杂交的量。研究了电极修饰、杂交反应及测量的适宜条件,在优化实验条件下,峰电流的差值与DNA杂交量之间有良好的线性关系,相关系数r=0.9996。杂交后的电极经热变性再生,可重复使用多次。 展开更多
关键词 脱氧核糖核酸 电极表面 电化学传感器 亲和素 单链 花椰菜花叶病毒 DNA杂交 固载 35S启动子 生物素标记 基因传感器 DNA片段 根癌农杆菌 转基因食品 循环伏安法 可重复使用 表面修饰 PT电极 人工合成 修饰电极 钴络合物
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小麦禾谷胞囊线虫(Heterodera avenae)的核糖体基因(rDNA)限制性片段长度多态性研究 被引量:46
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作者 彭德良 S.Subbotin M.Moens 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期323-329,共7页
采用PCR技术扩增出中国和摩洛哥禾谷胞囊线虫群体的核糖体基因 (rDNA)的内转录间隔区 (ITS)片段的长度约为 10 6 0bp。用 11种限制性内切酶 (RE)酶切禾谷胞囊线虫ITS扩增产物 ,共产生 2 7个酶切片段。用AluI和RsaI酶切ITS扩增产物证明... 采用PCR技术扩增出中国和摩洛哥禾谷胞囊线虫群体的核糖体基因 (rDNA)的内转录间隔区 (ITS)片段的长度约为 10 6 0bp。用 11种限制性内切酶 (RE)酶切禾谷胞囊线虫ITS扩增产物 ,共产生 2 7个酶切片段。用AluI和RsaI酶切ITS扩增产物证明中国禾谷胞囊线虫ITS属于“B型” ,而摩洛哥禾谷胞囊线虫ITS属于“A型”。用HinfI酶切后 ,7个中国禾谷胞囊线虫群体产生 2个RFLP片段 (86 0和 2 0 0bp) ,而摩洛哥群体产生 3个RFLP片段 (5 2 0、340和 2 0 0bp) ,HinfI揭示出中国与摩洛哥禾谷胞囊线虫ITS之间存在差异。AvaI和HindIII不能酶切禾谷胞囊线虫ITS。用CfoI、Bsh12 36I、MsrFI、ScrFI、HaeIII和MvaI 6种RE酶切中国和摩洛哥禾谷胞囊线虫群体的rDNA ITS ,均分别得到相同类型的RFLP分布型 ,因此这 6种RE不能揭示中国与摩洛哥群体的rDNA ITS的差异。 展开更多
关键词 小麦 禾谷胞囊线虫 Heterodera-avenae 核糖体基因 RDNA 限制性 片段长度 多态性
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萱草种质资源扩增片段长度多态性鉴别与分类的研究Ⅰ.萱草DNA模板的制备 被引量:19
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作者 于晓英 吴铁明 +3 位作者 彭尽晖 吕长平 张宏志 丁江南 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期41-43,共3页
为了获得萱草清晰的 AFL P指纹图谱并进一步进行萱草种质资源的鉴别与分类研究 ,以大花萱草为试材 ,用改进后的 SDS法和 CTAB法 ,从萱草的幼叶、成熟叶、新根等部位提取 DNA.结果表明 ,用这两种方法均可从萱草的幼叶、成熟叶、新根中获... 为了获得萱草清晰的 AFL P指纹图谱并进一步进行萱草种质资源的鉴别与分类研究 ,以大花萱草为试材 ,用改进后的 SDS法和 CTAB法 ,从萱草的幼叶、成熟叶、新根等部位提取 DNA.结果表明 ,用这两种方法均可从萱草的幼叶、成熟叶、新根中获得高分子量基因组 DNA和 AFL P指纹图谱 ,其中以幼叶的 DNA产量和品质最好 ,CTAB法提取的 展开更多
关键词 萱草 扩增片段长度多态性 脱氧核糖核酸 种质资源 DNA模板
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香蕉种质资源的扩增片段长度多态性鉴定与分类 被引量:17
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作者 于晓英 张秋明 +3 位作者 易干军 霍合强 谭卫萍 李典范 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期206-210,共5页
为了建立一个准确、完善、统一的香蕉鉴别分类标准 ,促进香蕉种质资源的合理利用及新品种的选育与推广 ,于 2 0 0 0年 2至 12月在广东省农科院果树研究所对广州国家种质香蕉圃的 35份香蕉种质材料进行了AFLP分子标记 .结果表明 :1)引物E... 为了建立一个准确、完善、统一的香蕉鉴别分类标准 ,促进香蕉种质资源的合理利用及新品种的选育与推广 ,于 2 0 0 0年 2至 12月在广东省农科院果树研究所对广州国家种质香蕉圃的 35份香蕉种质材料进行了AFLP分子标记 .结果表明 :1)引物EcoRⅠACC +MseⅠCAT和EcoRⅠACC +MseⅠCAG对 35个香蕉材料进行选择性扩增后 ,共得到扩增位点 10 7个 ,其中多态性位点 84个 ,多态性位点比例达到 78.5 % ,对 35个材料的区分率达到10 0 % .2 )在引物对EcoRⅠACC +MseⅠCAT和EcoRⅠACC +MseⅠCAG构建的香蕉AFLP指纹图谱中 ,供试的35个香蕉材料都有差异带或特异带 ,滑蕉 ,龙选 ,东S 1,海红 ,泰国蕉等品种的特征带尤为明显 .3)根据基因组指纹图谱聚类分析 ,当相似系数达到 0 .88的水平 ,可将供试的 35个香蕉材料分为 7类 .4)几内亚、苹果以及阳江矮 3份种质材料实际上为同一个品种 . 展开更多
关键词 香蕉 种质资源 鉴别 扩增片段长度多态性
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萱草种质资源扩增片段长度多态性鉴别与分类的研究 Ⅱ.5个萱草材料的AFLP分析 被引量:11
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作者 于晓英 吴铁明 +3 位作者 彭尽晖 吕长平 张宏志 丁江南 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期76-77,共2页
为了快速准确地进行萱草种质鉴定 ,从 6 4对AFLP引物中随机选出了 3对引物组合 (即EcoRⅠAAC MseⅠCAT ,EcoRⅠACC MseⅠCAT ,EcoRⅠACC MseⅠCAG) ,构建了 5个萱草种质的指纹图谱 .3对引物在 5个萱草材料中 2 0 5个位点上扩增出了条带 ... 为了快速准确地进行萱草种质鉴定 ,从 6 4对AFLP引物中随机选出了 3对引物组合 (即EcoRⅠAAC MseⅠCAT ,EcoRⅠACC MseⅠCAT ,EcoRⅠACC MseⅠCAG) ,构建了 5个萱草种质的指纹图谱 .3对引物在 5个萱草材料中 2 0 5个位点上扩增出了条带 ,其中多态性条带 12 8个 ,占扩增条带总数的 6 2 .9% ,5个萱草材料具有较高的遗传多样性 ,并初步认为其中野生重瓣萱草可能来自于萱草H . 展开更多
关键词 萱草 种质资源 扩增片段长度 多态性鉴别 鉴别分类
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用DNA限制性片段长度多态性鉴定中国旋毛虫3个分离株 被引量:22
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作者 诸欣平 刘明远 +2 位作者 王凤云 周蕾 宋铭忻 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 1998年第2期101-105,共5页
以旋毛虫国际标准虫株T.spiralis(Ts)、T.nativa(Tn)和T.nelsoni(Tne)作对照,利用限制性片段长度多态性(RFLP)差异对分离自我国黑龙江省3株旋毛虫进行虫种归属鉴定。5种内切酶实验结... 以旋毛虫国际标准虫株T.spiralis(Ts)、T.nativa(Tn)和T.nelsoni(Tne)作对照,利用限制性片段长度多态性(RFLP)差异对分离自我国黑龙江省3株旋毛虫进行虫种归属鉴定。5种内切酶实验结果显示:黑龙江猪株(HL)与Ts酶切图谱相同;犬株(WC)与Tn酶谱相同;猫株(SW)与Tn的DraⅠ,PstⅠ,HaeⅢ酶谱相近,而与Tne酶谱差异显著。提示:黑龙江猪株系Ts;犬株系Tn;猫株在分类归属上似乎与Tn靠近。 展开更多
关键词 旋毛虫 限制性片段长度 多态性 虫种鉴定
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毛细管电泳-限制性片段长度多态性快速检测胃癌组织中P53基因点突变的方法 被引量:11
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作者 陈巧云 王荣 +4 位作者 贾正平 王业秋 刘圆圆 谢华 马骏 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1305-1308,共4页
为建立毛细管电泳快速高效检测小于70bp双链DNA的方法。对毛细管电泳过程中的各参数进行了考察,最终得到最佳分离体系(筛分介质浓度8%,添加剂甘露醇浓度8%,pH6.5,温度15℃,电场强度275V/cm),并将该体系用于临床59例胃癌患者肿瘤组织基因... 为建立毛细管电泳快速高效检测小于70bp双链DNA的方法。对毛细管电泳过程中的各参数进行了考察,最终得到最佳分离体系(筛分介质浓度8%,添加剂甘露醇浓度8%,pH6.5,温度15℃,电场强度275V/cm),并将该体系用于临床59例胃癌患者肿瘤组织基因248位、249位密码子点突变情况的检测,30min之内同时检测了两个密码子位点的突变情况,实现了35bp和40bpDNA片段的基线分离,且分离度较高(1.642),初步建立了快速、高分辨诊断胃癌的方法。 展开更多
关键词 毛细管电泳 限制性片段长度多态性 基因突变
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大豆DNA扩增片段长度多态性(AFLP)研究 被引量:26
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作者 田清震 盖钧镒 +1 位作者 喻德跃 贾继增 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期210-217,共8页
本文研究 AFLP技术在大豆上的应用 ,在改进大豆种子 DNA提取方法的基础上 ,比较同位素与银染检测方法的效果 ,筛选适宜于大豆 AFLP分析的酶切和引物组合 ,从而建立了适用于大豆指纹图谱快速鉴定的 AFL P操作程序 ,并对我国野生大豆和栽... 本文研究 AFLP技术在大豆上的应用 ,在改进大豆种子 DNA提取方法的基础上 ,比较同位素与银染检测方法的效果 ,筛选适宜于大豆 AFLP分析的酶切和引物组合 ,从而建立了适用于大豆指纹图谱快速鉴定的 AFL P操作程序 ,并对我国野生大豆和栽培大豆代表性材料进行了 展开更多
关键词 大豆 DNA提取 扩增片段长度多态性(AFLP) 银染检测
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广东地区嗜肺军团菌的扩增片段长度多态性分析 被引量:13
13
作者 胡朝晖 屈平华 +1 位作者 刘元力 朱庆义 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1659-1665,共7页
【目的】了解广东部分地区2002~2007年环境水中嗜肺军团菌的基因型及遗传学关系。【方法】参考欧洲军团菌感染工作组(the European Working Group for Legionella Infections,EWGLI)制定的分型草案(1.2版),采用PstⅠ酶对我室保存的2株... 【目的】了解广东部分地区2002~2007年环境水中嗜肺军团菌的基因型及遗传学关系。【方法】参考欧洲军团菌感染工作组(the European Working Group for Legionella Infections,EWGLI)制定的分型草案(1.2版),采用PstⅠ酶对我室保存的2株标准菌株及41株不同时间、不同地点的嗜肺军团菌环境分离株进行扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphism,AFLP)分析,电泳图谱与EWGLI进行比对。【结果】AFLP分型结果稳定,重复性好;43株嗜肺军团菌,其不同来源菌株呈现多态性分布,经AFLP分析得到33个基因型,辨别力指数为99.79%,其中Kingmed AFLP 011为优势基因型。按Dice系数≥0.8,可分为18个群,Kingmed AFLPD群为优势群,占总菌株数的34.88%。由电泳图谱的相似性,初步推断存在EWGLI 001 Lugano型、002 Lugano、012 Rome、013 London、014 London型、015 Dresden型、021 Lyon等7个基因型,以及多个未报道的新基因型。【结论】广东地区嗜肺军团菌的基因型十分丰富,AFLP技术是其分子流行病学研究的有效手段。 展开更多
关键词 嗜肺军团菌 基因分型 扩增片段长度多态性
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山东产丹参遗传多样性的扩增片段长度多态性指纹分析 被引量:21
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作者 郝岗平 孙立彦 +2 位作者 史仁玖 高允生 王健美 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期51-53,共3页
目的研究山东产丹参的遗传多样性,初步探讨扩增片段长度多态性(AFLP)分子标记技术在丹参道地性鉴别上的应用。方法采用扩增片段长度多态性(AFLP)技术对山东产15个丹参样本进行DNA多态性分析。结果利用4对引物组合构建了15个丹参样本的DN... 目的研究山东产丹参的遗传多样性,初步探讨扩增片段长度多态性(AFLP)分子标记技术在丹参道地性鉴别上的应用。方法采用扩增片段长度多态性(AFLP)技术对山东产15个丹参样本进行DNA多态性分析。结果利用4对引物组合构建了15个丹参样本的DNA指纹图谱,通过相似性和聚类结果分析,丹参和白花丹参样本的遗传相似性较低,聚类结果也划分为两大类群,证明它们之间的亲缘关系较远,分化明显。临沂地区的野生和栽培丹参样本聚在一类,且栽培品种和野生品种之间具有一定的遗传差异。结论山东产丹参具有一定的遗传多样性,AFLP技术可用于丹参道地性鉴别。 展开更多
关键词 山东产丹参 遗传多样性 扩增片段长度多态性技术
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半滑舌鳎雌性特异扩增片段长度多态性标记的筛选与应用 被引量:12
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作者 李静 陈松林 +6 位作者 邓思平 田永胜 沙珍霞 王清印 庄志猛 徐建勇 温海深 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期591-597,共7页
半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Gtinther)为东北亚特有的名贵冷温性比目鱼类,为我国养殖业的新宠。半滑舌鳎雌鱼生长速度是雄性的2~3倍,若能实现单雌化养殖将大大提高养殖业的经济效益。本研究利用扩增片段长度多态性(AFLP)... 半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Gtinther)为东北亚特有的名贵冷温性比目鱼类,为我国养殖业的新宠。半滑舌鳎雌鱼生长速度是雄性的2~3倍,若能实现单雌化养殖将大大提高养殖业的经济效益。本研究利用扩增片段长度多态性(AFLP)技术,应用64个引物组合,检测了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Giinther)雌雄基因组DNA的多态性,筛选与半滑舌鳎性别相关的AFLP分子标记。实验经过3轮筛选和验证,4个引物组合扩增出7个雌性个体出现频率为100%的DNA片段,我们认为这7个标记是半滑舌鳎雌性特异的AFLP标记,分别命名为CseF382、CseF575、CseF783、CseF464、CseFl36、CseF618和CseF305。同时,将标记CseF382成功转化为SCAR标记,测定了该标记的DNA序列,建立了半滑舌鳎遗传性别鉴定的PCR技术,为半滑舌鳎性别决定机制的研究和性别控制奠定了重要基础。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 扩增片段长度多态性(AFLP) 性别 分子标记 雌性特异标记
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糖多孢红霉菌同源片段长度与染色体重组率关系的研究 被引量:7
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作者 张部昌 赵志虎 +3 位作者 王以光 于秀琴 刘传暄 马清钧 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期13-18,共6页
为了探索同源片段长度与糖多孢红霉菌染色体同源重组率的关系 ,化学合成或用重叠PCR合成带有突变位点、在突变位点两侧长度为 (2 6bp +2 7bp)、(5 0 0bp +5 76bp)和 (190 8bp +174 9bp)的同源序列 ,克隆于糖多孢红霉菌同源重组载体pWHM3... 为了探索同源片段长度与糖多孢红霉菌染色体同源重组率的关系 ,化学合成或用重叠PCR合成带有突变位点、在突变位点两侧长度为 (2 6bp +2 7bp)、(5 0 0bp +5 76bp)和 (190 8bp +174 9bp)的同源序列 ,克隆于糖多孢红霉菌同源重组载体pWHM3后 ,分别构建了pWHM1113、pWHM1116和pWHM1119质粒。以PEG介导转化糖多孢红霉菌A2 2 6原生质体 ,3个质粒分别获得每皿 30个、6 9个和 170个转化子 ,但pWHM1113质粒不能与染色体有效整合 ,pWHM1116质粒与染色体整合率为转化子的 2 % ,而pWHM1119质粒与染色体整合率达到转化子的 19%。pWHM1116和pWHM1119质粒均可进行有效的染色体二次重组 ,将突变位位点引入染色体。因此 ,同源片段长度为(5 0 0bp +5 76bp)或更长时 ,可与糖多孢红霉菌染色体进行有效的单重组和双重组。 展开更多
关键词 糖多孢红霉菌 同源片段长度 染色体重组率 关系
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中国栽培稻及其近缘野生种叶绿体DNA的限制性片段长度多态性分析 被引量:12
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作者 肖晗 应存山 黄大年 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 1996年第2期121-124,共4页
中国栽培稻及其近缘野生种叶绿体DNA的限制性片段长度多态性分析肖晗,应存山,黄大年(中国水稻研究所,杭州310006)关键词:叶绿体DNA;限制性片段长度多态性;栽培稻;野生种RFLPAnalysisofChloro... 中国栽培稻及其近缘野生种叶绿体DNA的限制性片段长度多态性分析肖晗,应存山,黄大年(中国水稻研究所,杭州310006)关键词:叶绿体DNA;限制性片段长度多态性;栽培稻;野生种RFLPAnalysisofChloroplastDNAfromChine... 展开更多
关键词 叶绿体DNA 限制性片段长度 栽培稻 野生种
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用PCR-限制性片段长度多态性分析法检测游泳池肉芽肿中海分枝杆菌 被引量:7
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作者 蔡林 陈雪 +2 位作者 赵亭 丁北川 张建中 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期71-73,共3页
目的:探讨用PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)分析法快速检测游泳池肉芽肿组织中海分枝杆菌。方法:对疑诊为游泳池肉芽肿患者5份皮损组织DNA进行PCR扩增,扩增产物分别用BstEⅡ和HaeⅢ两种限制性内切酶进行酶切,再用琼脂糖凝胶电泳进行RFL... 目的:探讨用PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)分析法快速检测游泳池肉芽肿组织中海分枝杆菌。方法:对疑诊为游泳池肉芽肿患者5份皮损组织DNA进行PCR扩增,扩增产物分别用BstEⅡ和HaeⅢ两种限制性内切酶进行酶切,再用琼脂糖凝胶电泳进行RFLP分析,并与培养结果进行比较。结果:5份标本中均检测出海分枝杆菌,与培养结果一致。经过3~7个月治疗,4例患者治愈,1例患者好转。结论:用PCR-RFLP可以快速鉴定海分枝杆菌,有利于该类疾病的早期诊断和及时治疗。 展开更多
关键词 海分枝杆菌 感染 皮肤 PCR-限制性片段长度多态性分析
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利用12S rRNA基因的限制性酶切末端片段长度多态性鉴定动物种类 被引量:9
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作者 汪琦 张昕 +3 位作者 赵大贺 马海萍 陈广全 张惠媛 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第2期214-219,共6页
目的:建立一种精确可靠的鉴定常见的10种动物(猪、狗、牛、山羊、绵羊、马、鸡、鼠、三文鱼和鹿)的方法。方法:利用12SrRNA基因的限制性酶切末端片段长度多态性(terminal restriction fragment length polymorphism,T-RFLP)鉴别动物种... 目的:建立一种精确可靠的鉴定常见的10种动物(猪、狗、牛、山羊、绵羊、马、鸡、鼠、三文鱼和鹿)的方法。方法:利用12SrRNA基因的限制性酶切末端片段长度多态性(terminal restriction fragment length polymorphism,T-RFLP)鉴别动物种类。将线粒体12S rRNA基因通过引物的5'端用FAM荧光标记,从基因组DNA中扩增450bp的目的片段。引物对1(下游引物FAM标记,上游引物不标记)扩增的PCR产物用限制性内切酶AluⅠ酶切。引物对2(上游引物FAM标记,下游引物不标记)扩增的PCR产物用限制性内切酶Tru9Ⅰ酶切。得到的酶切产物分别在遗传分析仪ABI3100上进行毛细管电泳,片段大小用Peak Scanner 1.0软件分析。结果:根据AluⅠ酶切图谱能够区分鸡、马、猪和三文鱼,而鹿和牛、山羊和绵羊、鼠和狗因酶切图谱相同无法分开。根据Tru9Ⅰ酶切图谱,能够进一步将鹿和牛、山羊和绵羊、鼠和狗分开。同一种动物不同个体的酶切图谱完全相同,结果具有可重复性。没有出现物种内多态的现象。大多数情况下,实际得到的末端片段长度与理论值非常接近,只存在2~5bp的差异。结论:该方法操作简单、结果精确,适用于鉴定动物种类。 展开更多
关键词 限制性酶切末端片段长度多态性T—RFLP 种类鉴定 12S RRNA
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新鉴定高抗TMV普通烟草枯斑资源的N导入片段长度多样性 被引量:3
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作者 刘勇 李梅云 +2 位作者 于海芹 黄昌军 李永平 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第6期94-98,共5页
为了解我国普通烟草(Nicotiana tabacum)资源对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的抗性基因状况,为烟草抗病育种的亲本选择提供信息,利用N基因特异分子标记鉴定出携带N基因的普通烟草资源,并采用N导入片段的特异分子标记鉴定了N... 为了解我国普通烟草(Nicotiana tabacum)资源对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的抗性基因状况,为烟草抗病育种的亲本选择提供信息,利用N基因特异分子标记鉴定出携带N基因的普通烟草资源,并采用N导入片段的特异分子标记鉴定了N导入片段的长度。结果表明,供试的63份接种TMV表现枯斑的普通烟草(简称普通烟草枯斑资源)可划分为3大类型,分别为Coker176类型:GL3.50和GL4.06标记阴性、TN4.39、TN5.226、TN5.51标记阳性;Samsun NN类型:GL3.50、GL4.06、TN4.39、TN5.226标记阳性,TN5.51阴性;Xanthi nc类型:GL3.50、GL4.06、TN4.39、TN5.226、TN5.51标记阳性。402等51份资源的N导入片段长度属于Coker176类型,Ky160等2份资源的N导入片段长度属于Samsun NN类型。Ky52等10份资源的N导入片段长度属于Xanthi nc类型。N导入片段较短的枯斑资源,推测其连锁累赘可能较小,育种利用潜力较大。本文较系统地鉴定了普通烟草抗TMV的枯斑资源的N导入片段长度,可为抗TMV种质资源的育种利用提供参考。 展开更多
关键词 普通烟草 N导入片段 长度
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