系统性红斑狼疮患者血清抗核小体抗体和脱氧核糖核酸酶Ⅰ活性的研究

目的探讨血清抗核小体抗体和血清脱氧核糖核酸酶Ⅰ(deoxyribonucleaseⅠ,DNaseⅠ)的活性与系统性红斑狼疮(SLE)病情的关系。方法采用间接ELISA法检测SLE患者血清抗核小体抗体浓度,DNA-甲基绿比色法测定其血清DNaseⅠ的活性。结果SLE患者血清抗核小体抗体浓度明显高于正常对照,且与SLE病情活动程度、肾脏损害、血管炎及补体下降相关;SLE患者组血清DNaseⅠ活性低于正常对照组,且与病情活动程度相关;血清抗核小体抗体浓度与DNaseⅠ的活性成负相关。结论抗核小体抗体是SLE的主要自身抗体之一,核小体刺激机体产生抗体的可能原因是DNaseⅠ的活性下降。

利用共振镜生物传感器研究牛胰脱氧核糖核酸酶Ⅰ与DNA的相互作用

利用IAsys共振镜生物传感器研究了牛胰脱氧核糖核酸酶Ⅰ(Bp DNase Ⅰ)与DNA的相互作用.求出了不同温度下,Bp DNase Ⅰ与DNA相互作用的结合和解离的动力学速率常数(Kass,Kdiss)和平衡常数(KA,KD),并且计算出了该过程的热力学参数(ΔH和TΔS).在298 K时该结合过程的KA=(3.521 2±0.232 4)×105(mol/L)-1,KD=(2. 852 4±0. 188 3)×10-6 mol/L,TΔS 为(84. 860±3. 712) kJ/mol,该结合过程的ΔH 为(53.222±3.548) kJ/mol,是一个熵驱动的过程.本文还对Mg2+浓度对Bp DNase Ⅰ与DNA的相互作用的影响进行了研究.在相同温度下,Bp DNase Ⅰ与DNA的结合作用在有Mg2+存在时较无Mg2+ 存在时高约30.5 倍,表明Mg2+能极大地提高Bp DNase Ⅰ与DNA的结合能力.

重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ的复性及活性鉴定

建立尿素梯度凝胶过滤复性重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ的方法。将诱导表达的重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ包涵体通过初步纯化后变性,然后在尿素梯度凝胶过滤色谱柱Sephadex G-75中复性,洗脱流速0.4 mL/min,复性完毕后透析除去小分子复性剂,使用琼脂糖电泳法检验其有活性后,再用单向酶扩散法测定其酶活力为655.8 U/mg,复性得率为83.7%。最后通过LC-ESI-MS/MS从氨基酸序列组成上证明复性产物是重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ。结果表明,建立的方法能成功用于复性变性的重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ包涵体蛋白,获得了可用于结构和功能研究的具有生物学活性的重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ。

重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ的复性研究

随着现代分子生物学技术的不断发展,DNA的重组技术已经发展到了更高的阶段。重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ是一种特异性较强的DNA水解酶类物质,其是由2个二硫键和260个氨基酸所组成的。而脱氧核糖核酸酶Ⅰ是一种治疗红斑狼疮、心肌梗死以及胃肠道肿瘤类疾病的主要药物,这种物质提取自人体尿液当中,但自然状态下人体尿液中所能提取的脱氧核糖核酸酶Ⅰ的浓度较低,无法满足日益增加的需求量,而重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ则能够满足现代大批量生产的需求。因此本次对重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ的制备方法和复性检验方法进行研究,利用纯化、洗脱、透析、电泳等多种方法进行,以期能为相关工作提供参考。

脱氧核糖核酸酶Ⅰ在急性冠状动脉综合征诊断中的应用

目前有大量的研究表明急性冠状动脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)与炎症反应及粥样斑块的不稳定破裂有密切关系,而细胞凋亡在其中亦起着重要作用,脱氧核糖核酸酶Ⅰ(deoxyribonuclease Ⅰ,DNase Ⅰ)是细胞凋亡中双链DNA降解过程中起着重要作用的核酸酶,可能直接参与了ACS的发生和发展过程。

SLE患者血清中抗核小体抗体浓度与脱氧核糖核酸酶Ⅰ活性的相关分析

目的:探讨系统性红斑狼疮(SLE)血清抗核小体抗体(AnuA)浓度与脱氧核糖核酸酶Ⅰ(DNaseⅠ)活性的关系。方法:采用DNA-甲基绿比色法和间接ELISA法检测76例SLE患者(活动期40例,缓解期36例)与50例健康对照组DNaseⅠ的活性和血清AnuA浓度,并分析二者之间关系。结果:SLE患者血清DNaseⅠ活性水平明显低于健康对照组(P<0.01),而疾病活动期与缓解期相比未见明显差别(P>0.05);与健康对照组相比,血清AnuA浓度升高明显(P<0.01),并且疾病活动期浓度高于缓解期(P<0.01);AnuA浓度和DNaseⅠ的活性成负相关关系(r=-0.43,P<0.01)。结论:SLE患者中DNaseⅠ的活性下降可能导致血清AnuA的浓度升高。

系统性红斑狼疮患者脱氧核糖核酸酶1基因多态性研究

目的 探讨脱氧核糖核酸酶 1(DNASE1)基因单核苷酸多态性 (SNP)与中国人系统性红斑狼疮 (SLE)相关性。方法 验证文献报道的DNASE1基因 3′端 4个SNP ,选取杂合度较高者对 312个中国人群SLE家系以TaqManMGB等位基因识别技术在ABI790 0HT序列测定仪上进行SNP基因分型 ,数据以SDS 2 0软件收集 ,Genehunter进行统计处理并构建SNP单倍型。结果 中国人群中 ,DNASE1SNP3398、3737杂合度均接近 0 5 ,4 184亦有一定的杂合度。 3398与 3737的C G单倍型优先传递给患病子代 ,3398、3737、4 184的单倍型C G G优先传递给患病子代 (P <0 0 5 )。结论 在SLE患者中存在特定的SNP单倍型 ,部分SLE患者的发病与DNASE1基因相关联。

中国汉族人群DNA酶Ⅰ基因多态性特点及与急性心肌梗塞的关系

目的：探讨DNA酶Ⅰ（DNaseⅠ）基因多态性在中国汉族人群的分布频率、与急性心肌梗塞（acute myocardial infarction．AMI）易感性的关系。方法：以283名体检者及260名AMI患者为研究对象，提取外周血基因组DNA,应用PCR及PCR－限制性片段长度多态（PCR-RFLP）技术，分析DNA酶Ⅰ基因8外显子单核苷酸多态位点A2317G及4内含子56bp可变串联重复序列（HumDNl）的多态性。结果：AMI组和对照组共检测到3种A2317G基因型及10种HumDN1基因型，其中A2317和HumDN1。3是AMI及对照组中分布频率最高的等位基因。但两组中A2317G、HumDN1各基因型和等位基因分布差异无明显统计学意义（P〉0．05）。结论：DNA酶Ⅰ基因多态性与中国汉族人群急性心肌梗塞无明显相关性。

中国维族人群DNA酶Ⅰ基因多态性与急性心肌梗死的相关性研究

目的探讨DNA酶I（DNaseI）基因多态性在急性心肌梗死（acutemyocardialinfarction，AMI）患者中的分布及其与患者血脂、血糖水平的关系。方法选取急性心肌梗死患者157例及同期健康体检者148例，提取外周血基因组DNA．通过高温连接酶检测法（PCR-LDR）检测DNA酶Ⅰ基因A2317G（rsl053874）位点基因型。酶法检测血清总胆固醇、三酰甘油及空腹血糖水平；选择性遮蔽法测定低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇水平。结果A2317G位点3组基因型（AA／AG／GG）及两种等位基因（A2317，G2317）在对照组与AMI组分布频率差异均有统计学显著性意义（P值分别为0．025，0．0095）；AMI组3种基因型患者血清总胆固醇（P=0．799）、三酰甘油（P=0．78）、高密度脂蛋白胆固醇（P＝0．815）、低密度脂蛋白胆固醇（P＝0．576）水平差异均无统计学显著性意义，空腹血糖水平差异有统计学意义（P＝0．043）。结论DNA酶I基因多态性与急性心肌梗死易感性有一定相关性，与患者血脂无关，与空腹血糖水平有相关性。

DNase Ⅰ与Nd:YAP激光联合应用对根管内粪肠球菌生物膜清除作用的影响

目的 研究脱氧核糖核酸酶Ⅰ(DNase Ⅰ)与Nd:YAP激光联合应用对根管内粪肠球菌(E.f)生物膜的清除效果。方法 建立牙本质片表面E.f感染模型,应用扫描电子显微镜(SEM)观察感染模型建立情况。将25个培养48h的E.f生物膜样本采用随机数字表法分为5组,每组5个。A组:0.5%NaOCl;B组:0.5%NaOCl+Nd:YAP激光;C组:DNase Ⅰ+0.5%NaOCl;D组:DNase Ⅰ+0.5%NaOCl+Nd:YAP激光;E组:生理盐水。激光共聚焦显微镜(CLSM)观察牙本质表面E.f黏附情况,并计数绿色荧光量即为活细菌量。结果 SEM观察可见牙本质表面牙本质小管口开放,E.f黏附聚集在牙本质表面,并见到牙本质小管深层内细菌黏附。CLSM观察可见A、B、C组CLSM图像中绿色荧光的活细菌散在分布于牙本质表面,D组可见较少量的绿色荧光,E组绿色荧光的活细菌覆盖全部样本表面。D组中菌量明显小于A组和E组,C组菌量明显小于E组(P<0.01)。结论 相比于单独使用0.5%NaOCl,DNase Ⅰ联合Nd:YAP激光与0.5%NaOCl冲洗能更有效地处理E.f生物膜。

新疆阿克苏地区维族人群DNA酶Ⅰ基因多态性及其与血脂、血糖的相关性研究

目的探讨DNA酶Ⅰ(DNaseⅠ)基因多态性在新疆阿克苏地区维族人群中的分布及其与血脂、血糖的关系。方法选取新疆阿克苏地区维族健康体检者148例,提取外周血基因组DNA,通过高温连接酶检测法(PCR-LDR)检测DNaseⅠ基因A2317G(rs1053874)位点的基因型。酶法检测血清TC、TG及FPG水平;选择性遮蔽法测定LDL-C、HDL-C水平。结果 A2317G位点AA、AG、GG基因型在新疆阿克苏地区维族健康人群中分布频率分别为20.95%、54.05%和25.00%,A、G等位基因频率分别47.97%、52.03%,这与其在中国汉族人群中的分布频率相似(P>0.05),与蒙古人、日本人、韩国人、土耳其人、纳米比亚人、德国人明显不同(P<0.05)。3组基因型(AA/AG/GG)的血清TC、TG、LDL-C、FPG水平无统计学差异(P>0.05),而HDL-C水平差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DNaseⅠ基因多态性具有种族异质性;在新疆阿克苏地区维族人群中其多态性与HDL-C水平有相关性。

α1-AT/DNaseⅠ、HBD-1、SF在重症儿童社区获得性肺炎患儿中的表达及其临床意义

【目的】探讨α1-抗胰蛋白酶(α1-AT)/DNA酶Ⅰ(DNaseⅠ)、β-防御素1(HBD-1)、铁蛋白(SF)在重症社区获得性肺炎(SCAP)患儿中的表达及其临床意义。【方法】选取2020年1月至2021年5月开封市儿童医院收治的98例SCAP患儿(观察组),根据肺炎严重指数(PSI)分为低危组(n=15)、中危组(n=52)、高危组(n=31),根据检测结果分为细菌性肺炎组(n=50)、支原体肺炎组(n=22)、病毒性肺炎组(n=26),同时选取同期于本院体检的62例健康儿童作为对照组。比较不同组间血清α1-AT/DNaseⅠ、HBD-1、SF水平,采用Spearman法分析α1-AT/DNaseⅠ、HBD-1、SF与疾病严重程度的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估上述指标对SCAP的诊断价值。【结果】观察组血清α1-AT/DNaseⅠ、HBD-1、SF水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。单因素方差分析显示,不同疾病严重程度的SCAP患儿血清α1-AT/DNaseⅠ、HBD-1、SF水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。中危组、高危组血清α1-AT/DNaseⅠ、HBD-1、SF水平高于低危组,且高危组高于中危组,差异有统计学意义(P<0.05)。支原体肺炎组、病毒性肺炎组α1-AT/DNaseⅠ、HBD-1、SF水平高于细菌性肺炎组(P<0.05),支原体肺炎组、病毒性肺炎组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Spearman相关性分析显示,α1-AT/DNaseⅠ、HBD-1、SF均与疾病严重程度呈正相关(r_(s)=0.632、0.524、0.531,均P<0.01)。ROC曲线分析显示,α1-AT/DNaseⅠ、HBD-1、SF联合检测的曲线下面积、敏感度、特异度明显高于单项检测(P<0.05)。【结论】SCAP患儿血清中α1-AT/DNaseⅠ、HBD-1、SF水平异常升高,且与病情程度有关,联合检测可提高SCAP诊断价值。

中性粒细胞胞外诱捕网通过CCDC25促进骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的作用研究

目的探究中性粒细胞胞外捕获网(neutrophil extracellular traps,NETs)在骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭中的作用及其相关机制。方法纳入骨肉瘤患者和健康受试者各20例,通过ELISA检测血清中PAD4和H3cit水平。提取两组人群外周血中性粒细胞,比较NETs形成差异。将NETs与骨肉瘤细胞MG63共孵育,期间加入DNA降解酶DNaseⅠ,分为对照组、NETs组和NETs+DNaseⅠ组。通过蛋白质印迹检测CCDC25蛋白表达水平,CCK8检测细胞增殖水平,Transwell检测细胞迁移和侵袭水平。将si-NC和si-CCDC25转染至MG63,加入NETs共孵育,分为si-NC组和si-CCDC25组,通过蛋白质印迹检测CCDC25蛋白表达水平,CCK8检测细胞增殖水平,Transwell检测细胞迁移和侵袭水平。结果与健康受试者比较,骨肉瘤患者血清中PAD4和H3cit水平升高(P<0.05),NETs形成能力增强。与对照组比较,NETs组CCDC25蛋白表达升高,细胞增殖、迁移和侵袭水平升高(P<0.05)。与NETs组比较,NETs+DNaseⅠ组CCDC25蛋白表达降低,细胞增殖、迁移和侵袭水平降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-CCDC25组CCDC25蛋白表达降低,细胞增殖、迁移和侵袭水平降低(P<0.05)。结论NETs通过释放的DNA激活骨肉瘤细胞CCDC25表达,从而促进肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭。

植物基因组DNase Ⅰ超敏感位点的研究进展

真核生物的基因表达与调控是一系列顺式作用元件(cis-acting element)与反式作用因子(trans-acting fac-tor)相互作用的结果。顺式作用元件本身不编码蛋白,只是基因组中一些特定的区域,它们需与反式作用因子结合才能发挥其生理作用。目前已知,顺式作用元件往往与染色质的结构密切相关,能与反式作用因子结合发挥生物学功能的顺式作用元件,通常存在于脱氧核糖核酸酶I超敏感位点(DNase Ⅰ hypersensitive site)的内部或周围。随着越来越多的植物基因组测序的进展,大规模高通量鉴定植物基因组的顺式作用元件正在受到关注,通过鉴定脱氧核糖核酸酶I超敏感位点可以有效确定顺式作用元件的富集区域,将对功能基因组学研究提供的数据支持。文章综述了近期高通量鉴定和分析植物基因组脱氧核糖核酸酶I超敏感位点研究进展。

基于酶促信号放大的氧化石墨烯生物传感器快速检测金黄色葡萄球菌的研究

本研究以设计的与16SrRNA互补的单链DNA(ssDNA)探针作为捕捉探针,羧基荧光素(FAM)标记的探针1、探针2作为信号探针,将两者组装形成两个FAM标记的探针(TFP),并以氧化石墨烯(GO)作为猝灭剂形成TFP/GO复合物。当无靶标时,TFP吸附到GO表面,FAM的荧光被猝灭,当加入靶标后,TFP从GO上解离下来,荧光恢复,因此可以通过荧光值定量检测靶标。此外,在体系中加入脱氧核糖核酸酶Ⅰ(DNaseⅠ),TFP被降解从而释放出靶标RNA用于下一轮反应同时产生大量的FAM,可以极大地提高该传感器的灵敏度及特异性。结果表明该方法对靶标RNA的检测限可达0.3nmol/L,且在1～60nmol/L范围内呈良好的线性关系(R2=0.9984);对靶标菌的检测限低至50CFU/mL,且在102～107 CFU/mL范围内呈良好的线性关系(R2=0.9973)。该方法对靶标菌检测的信噪比要远大于非靶标菌,表明其具有很强的特异性。该研究建立的快速检测金黄色葡萄球菌的纳米生物传感器具有良好的定量能力和操作性能,且灵敏度高、特异性强。

类风湿关节炎患者血清及滑液中DNase Ⅰ活性检测及与炎症的相关性

目的探讨脱氧核糖核酸酶Ⅰ(DNaseⅠ)在类风湿关节炎中潜在的致病作用。方法辐射状酶扩散法测定83例类风湿关节炎(RA)患者和60名健康对照者血清DNaseⅠ活性以及27例RA患者和38例其他炎症性关节炎患者滑液(SF)DNaseⅠ活性,Pico Green试剂盒测定游离DNA(cf DNA)水平,并分析两者与RA患者临床指标的相关性。结果 RA组血清DNaseⅠ活性显著低于健康对照组[(0.3065±0.1436)U/m L vs(0.4289±0.1976)U/m L,P<0.001];血清DNaseⅠ活性与ESR(r=-0.2862,P=0.0122)、CRP(r=-0.2790,P=0.0184)和中性粒细胞计数(r=-0.287,P=0.011)呈负相关。SF DNaseⅠ活性在RA、强直性脊柱炎组和痛风性关节炎组中几乎都是阴性的。RA组患者SF cf DNA水平明显高于骨性关节炎组患者[(100.81±142.98)μg/m L vs(18.98±31.40)μg/m L,P=0.002];与强直性脊柱炎组(45.85±47.67μg/m L,P=0.428)和痛风性关节炎组(162.95±97.49μg/m L,P=0.132)无显著性差异;炎症性关节炎患者SF cf DNA水平与ESR(r=0.4106,P=0.0116)和CRP(r=0.5747,P=0.0002)呈显著正相关。结论 DNase I活性受损可能是中性粒细胞胞外网状陷阱形成增强的原因并在RA发病机制中起作用。

DNaseⅠ在临床中的应用

脱氧核糖核酸酶Ⅰ(DNaseⅠ)是一种特异性的DNA水解酶,参与了机体调节的许多过程。以前它被认为是一种消化酶,最近发现它在哺乳动物的其他组织中也具有较高的核酸酶活性,并具有其他的功能,其临床应用可能具有更高的研究价值。本文综述了DNaseⅠ在疾病诊断、治疗等方面的应用及其最新进展。

IMA、DNase Ⅰ、H-FABP对急性冠状动脉综合征的早期诊断价值

目的探讨血清缺血修饰白蛋白(IMA)、脱氧核糖核酸酶Ⅰ(DNaseⅠ)及心型脂肪酸结合蛋白(HFABP)在急性冠状动脉综合征(ACS)中的早期诊断价值。方法选取240例ACS患者作为观察组,260例同期无缺血性疾病者为对照组,分别采用比色法、SRED/CAM法、双抗体夹心法测定两组血液IMA、DNaseⅠ、H-FABP水平。计算其对ACS诊断的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值,并与肌钙蛋白I(cTnI)比较诊断效能。结果观察组IMA、DNaseⅠ及H-FABP明显高于对照组(P均<0.05),IMA、DNaseⅠ及H-FABP诊断ACS的灵敏度均高于cTnI(P均<0.05),IMA、DNaseⅠ、H-FABP及cTnI四者联合对ACS早期诊断灵敏度可达94.5%。结论 IMA、DNaseⅠ联合H-FABP可提高对ACS早期诊断灵敏度。

重组人DNaseⅠ不同表达模式的下游工艺研究

研究了诱导温度对重组人DNaseⅠ(rhDNaseⅠ)在大肠杆菌中可溶表达的影响,发现加诱导剂后在37℃培养时,rhDNaseⅠ融合蛋白以包涵体形式存在;而20℃培养,rhDNaseⅠ融合蛋白有62.3%分泌到周质,并且具有酶活性。对这两种不同表达模式表达的rhDNaseⅠ融合蛋白进行分离纯化,发现前者最终酶活为592.2 U/mg,回收率为32.1%;后者酶活为1283U/mg,回收率为24.1%。比较这两种纯化工艺,分泌表达模式的分离纯化工艺较好。