高效液相色谱法同时测定黑蒜中蒜氨酸、脱氧蒜氨酸及γ-谷氨酰半胱氨酸含量

黑蒜中蒜氨酸及相关硫化物具有较强抗氧化性和多种药理活性。建立同时测定黑蒜中蒜氨酸、脱氧蒜氨酸和γ-谷氨酰半胱氨酸含量高效液相色谱法。黑蒜样品用榨汁机粉碎,超声提取后过滤离心,以甲醇+0.1%磷酸(1􀏑9)为流动相,经ZORBAX-Eclipse XDB-C18 Analytical色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)分离,220 nm下检测。结果表明,蒜氨酸、脱氧蒜氨酸和γ-谷氨酰半胱氨酸分别在27.20~275.00μg·mL^-1(R^2=0.9992)、22.40~280.00μg·mL^-1(R^2=0.9991)、36.80~368.00μg·mL^-1(R^2=0.9988)范围内,线性关系良好;3种物质加标回收率分别为94.61%、96.39%和92.56%;相对标准偏差RSD分别为2.87%、1.07%和0.98%。该方法样品前处理简单,测定快速,回收率高,精密度高,适用于黑蒜中蒜氨酸、脱氧蒜氨酸和γ-谷氨酰半胱氨酸含量同时测定。

荧光光谱法测定大蒜中三种含硫氨基酸与BSA间的相互作用

大蒜中的含硫氨基酸,如脱氧蒜氨酸(SAC)、蒜氨酸(SACS)、 S-烯丙基巯基半胱氨酸(SAMC),具有抗肿瘤、抗氧化等多种生理、药理活性,这些活性应当与上述含硫氨基酸和存在于生物体内的蛋白质等生物大分子之间的相互作用有直接关系。为探明其关系,本文以牛血清蛋白(BSA)为模型蛋白,运用荧光光谱法和紫外吸收光谱法,研究了pH 7.40的Tris-HCl缓冲溶液中,大蒜中SAC, SACS, SAMC与BSA的相互作用。采用荧光分光光度计,以280 nm为激发波长,扫描300~400 nm的荧光发射光谱;采用紫外分光光度计,扫描SAMC的300~400 nm紫外吸收光谱。荧光光谱和紫外吸收光谱结果分析表明:BSA与SAC, SACS的猝灭类型是动态猝灭。BSA与SAMC的猝灭类型是静态猝灭,在298和310 K下两者的结合常数分别为6.18×10^3和5.54×10^3 L·mol^-1,结合作用较强;对应温度下BSA与SAMC均近似为1个结合位点,可形成1∶1的复合物,推断其在生物体内能被较好的储存与转运;两者的结合距离为1.61 nm。两者结合的热力学参数在298和310 K下的ΔG分别为-21.63和-22.21 kJ·mol^-1,说明反应是一个自发进行的过程;其ΔH为-7.06 kJ·mol^-1;在298和310 K温度下的ΔS分别为48.89和46.99 J·mol^-1·K^-1,结合ΔH和ΔS的大小可判断两者的结合以静电引力作用为主。研究表明SAMC与BSA的结合作用较强,为其可作为药物分子提供了理论依据,同时这些结果也为进一步研究三种含硫氨基酸与BSA等大分子的相互作用、开发与利用提供了理论依据。