基于气相色谱-质谱法检测禾谷镰孢菌丝胞内外的脱氧雪腐镰刀菌烯醇和15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇

禾谷镰孢(Fusarium graminearum)是引起小麦赤霉病的主要病原真菌,不仅会造成严重的作物减产,还会产生脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)等真菌毒素污染谷物,威胁人畜健康。为探究禾谷镰孢产毒菌丝胞内外的毒素含量,本文建立了气相色谱-质谱联用法同时检测DON和15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇(15-ADON)。通过质谱特征扫描,DON和15-ADON均获得了较高离子化效应的离子。在单离子检测(SIM)模式下,利用m/z295、235和193离子定性分析DON,m/z 392、235和193离子定性分析15-ADON。选择其中响应强度最高的m/z 235离子定量分析DON,m/z 193离子定量分析15-ADON。利用该方法检测禾谷镰孢野生型PH-1和DON合成缺陷突变体tri5胞内外的DON和15-ADON含量,PH-1胞内的DON和15-ADON含量分别为(149.13±9.15)μg/g和(1833.31±185.33)μg/g,胞外含量分别为(5910.35±468.23)μg/g和(45222.12±2726.81)μg/g;tri5突变体的胞内外均未检测到DON和15-ADON。该方法可用于菌丝胞内外DON和15-ADON的同时分析。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的毒性及其生物转化研究进展

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)是世界上分布最广泛的真菌毒素之一,给世界粮食产业造成巨大经济损失,也给人类健康带来重大威胁。该文对DON毒素的基本性质、毒性作用及生物转化研究进展进行全面论述,为DON毒素的防控技术提供参考。

实验制粉去除小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的研究

采用自然污染脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)毒素不同程度的9种小麦为材料,通过检测其经实验制粉工艺得到麸皮、细麸、不同出粉点面粉包括最后统粉的DON含量,探索小麦实验制粉工艺去除DON的效果。结果表明:经过小麦实验制粉工艺后,能够重新分配小麦中的DON毒素,存留在面粉中的DON总量仅为原来小麦的31.03%～50.39%,并主要分布在小麦的表皮中,在小麦胚乳中也呈从内到外逐渐升高。制得面粉统粉中DON含量减少23.67%～58.97%,心磨粉最高能减少70.51%。小麦籽粒DON含量与制得面粉中DON含量之间呈幂函数回归关系,回归方程为y=0.498x1.206(R2=0.991),随着DON污染程度越低,DON含量减少率越大。以上实验证明,小麦制粉工艺是一种有效的去除小麦中DON毒素的方法。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(don)直接竞争elisa方法的建立

利用前期制备得到的DON酶标抗原(辣根过氧化物酶标记)以及抗DON抗体,建立检测食品中DON含量的直接竞争ELISA方法。该方法的检测范围1～100ng/mL,灵敏度达0.56ng/mL,半数抑制浓度IC50为10ng/mL;与DON类似物T-2毒素的交叉反应率为12%;玉米淀粉样品回收率在80.2%～91.1%之间,平均批间变异<15%,平均批内变异<3%。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)检测方法研究进展

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)是一种霉菌毒素,也是谷物中的主要污染物之一,对农产品生产、人类健康、国际贸易交流和社会经济发展均有重要影响。适宜的检测方法是确定毒素含量是否符合相关限量标准、制定谷物饲料和食品中毒素污染控制措施的关键。本文就脱氧雪腐镰刀菌烯醇的毒性特征,分子结构特点,常用检测方法及最新研究进展进行综述。

制粉对小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的迁移作用

以自然污染脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的小麦为材料,通过筛理、水洗、制粉等加工工艺处理后,对小麦中的DON含量进行测定,得到了DON在小麦籽粒中的分布情况及小麦加工对其中DON迁移的影响。实验结果表明:1小麦中的DON主要分布在皮层,虽然小麦粉中DON含量有随染病程度增加而上升的趋势,但就总体而言,小麦粉中DON含量明显低于全麦粉;2筛理和水洗都能不同程度地降低小麦粉中DON的含量。筛理对于降低小麦粉中毒素的作用较明显,水洗对于降低麸皮中DON含量的作用较明显;3由于心粉和皮粉之间,粗麸和细麸之间的DON含量差异微小,因此,提高加工精度或控制出粉率对进一步降低小麦粉中DON含量的作用不大;4当小麦的DON含量在1.56mg/kg以下时,经筛理、水洗、制粉加工后的含量有较大可能性达到限量值1mg/kg以下。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对小鼠胸腺细胞凋亡和增殖的影响

目的 :探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇 (DON)对小鼠胸腺细胞凋亡和增殖的影响。方法 :以动物实验、形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术方法研究了不同剂量DON对小鼠胸腺细胞凋亡和增殖的影响及其量效关系。结果 :FCM检测结果表明 ,不同浓度DON均能诱导并促进体内小鼠胸腺细胞凋亡 ,DON 0 5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、4mg/kg、8mg/kg组胸腺细胞的平均凋亡百分率分别为 6 35 %± 1 30 %、8 30 %± 1 33%、8 89%± 2 15 %、10 70 %± 0 6 2 %和 12 5 4 %± 2 0 8% ,在 0 5mg/kg到 8mg/kg的浓度范围内 ,随DON浓度的增高 ,胸腺细胞的凋亡率也相应增高 ,两者呈显著正相关 (r=0 788,P <0 0 1)。DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示 ,大剂量 (8mg/kg和 4mg/kg)DON处理组小鼠胸腺细胞出现了凋亡特有的梯状条带。超微结构观察可见DON处理组小鼠胸腺部分细胞出现核染色质固缩凝聚、胞芽等细胞凋亡的超微结构特征表现。大剂量 (8mg/kg和 4mg/kg)DON可明显降低小鼠胸腺细胞增殖活性 (用PI表示 ,P <0 0 1)。结论 :脱氧雪腐镰刀菌烯醇可剂量依赖地诱导并促进小鼠胸腺细胞的凋亡和抑制其增殖。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇研究进展

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)是单端孢霉烯族化合物,是镰刀菌产生的次级代谢产物。DON存在于农作物以及食品和饲料中,世界上许多地区都有DON毒素的检出报道。由于其具有较强毒性,不仅对农业经济造成严重的损失,而且严重威胁人类和动物的健康,引起一系列不良反应例如呕吐、腹泻、胃肠道出血等。本文从DON的毒性作用、检出量、影响DON含量的因素、降解方法四方面进行综述。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇在小麦赤霉病病程中的作用

脱氧雪腐镰刀菌烯醇 (deoxynivalenol,DON)系小麦赤霉病菌———禾谷镰孢 (Fusariumgraminearum ,有性态Gibberellazeae)产生的一种单端孢霉烯族毒素 (trichothecenes,以下简称“单族毒素”)。作者以病菌正常产毒的野生型菌株GZ36 39及其产毒基因Tri5损坏、不能产毒的转化子GZT40 (Tri5 -,TRI-)为材料 ,对DON在病菌致病过程中的作用进行了研究。结果显示 :GZ36 39能引起典型的赤霉病症状 ,病害可由接种小花发展至其它小穗 ,病菌也可定殖于其它小穗组织 ;而GZT40仅在接种小花处产生鸟眼状坏死斑点 ,不能引起典型的赤霉病症状 ,病菌仅定殖于接种小花处。当病菌与一定浓度 (4 0 0 μg·mL-1)的DON混合处理小花后 ,GZT40的定殖时间提前 2d(感病品种上 )至 4d(抗病品种上 ) ,定殖范围可扩大到 1～ 3个小穗 ,接种 2 0d后的病小穗率也由病菌单独接种时的 2 8%提高到 12 5 %。DON也使GZ36 39的定殖时间提前 1d(感病品种上 )至 2d(抗病品种上 ) ,定殖范围更广 ,其所致的病害发展更迅速 ,接种后 2 0d的病小穗率由病菌单独接种时的 78 0 %提高到 10 0 %。因此 ,作者认为 ,单族毒素在病害发展和病菌在寄主组织内的扩展中起着决定性作用 ,一旦丧失产毒能力 ,病菌虽能侵入寄主 ,但不能在寄主组织中扩展。

SPE-HPLC-MS/MS测定粮食中玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇

建立了以乙腈-水（84：16，v／v）为提取溶剂、正己烷萃取和HLB固相萃取（SPE）净化、水和乙腈C18反相色谱梯度洗脱、电喷雾负离子多反应监测模式（MRM）同时测定粮食中玉米赤霉烯酮（ZEN）和脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）2种物质含量的HPLC-MS／MS检测方法。结果表明，ZEN和DON检出限（以信噪比S／N：3计）依次为0．1μg/kg和2μg/kg，定量限（以信噪比S／N=10计）依次为0．3μg/kg和6μg／kg；两者线性范围分别为0．20～25μg／L（相关系数r=1．0000）和4．0～500μg／L（相关系数r=0．9999）；不同样品2种目标物3个水平的加标回收率在88．7％～102．3％之间，相对标准偏差（RSD）在2．4％～7．3％之间。应用该方法对所检小麦样品进行分析，结果均发现严重污染样品的2种目标毒素。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇致家兔多脏器损伤的实验观察

目的观察脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对家兔器官的毒性及损伤作用。方法将成年雄性家兔随机分为高剂量组、低剂量组和对照组,高、低剂量组分别用0.1mg·kg-1BW,0.05mg·kg-1BW剂量的脱氧雪腐镰刀菌烯醇,经耳缘静脉注射染毒,每48h染毒一次,染毒10次后处死家兔,取心、肝、肾、脾等器官进行常规病理检查。结果染毒家兔的心、肝、肾、脾均有病理变化,可见组织细胞肿胀、空泡变性、炎性细胞浸润及细胞坏死。结论DON具有明显的细胞毒性,对多脏器具有损伤作用。

多功能柱净化-高效液相色谱法同时检测小麦中雪腐镰刀菌烯醇和脱氧雪腐镰刀菌烯醇

建立了小麦中雪腐镰刀菌烯醇（NIV）和脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）的高效液相色谱同时检测方法。样品采用乙腈-水（体积比85：15）混合溶剂进行提取．通过多功能净化柱（MFC）进行一次性净化，以C18柱为分离柱，水-乙腈-甲醇（体积比90：5：5）混合溶剂为流动相进行高效液相色谱分离和检测。在小麦样品中，本方法在0．2～5μg／g添加范围内的凹收率为87％～99％；相对标准偏差为1．5％～8．3％；DON和NIV的检出限分别为0．12和0、16μg／g（5／N=3）。

二氧化氯对玉米乙醇发酵糟液中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的降解

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)是造成粮食污染的主要原因之一。采用高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)对DON含量进行检测分析,通过液体浸泡法,探究了ClO_2对DON纯品以及玉米乙醇发酵糟液中DON的降解效果。结果显示:DON降解率随ClO_2溶液浓度的增大以及处理时间的延长而提高,且pH值对DON降解有影响。当pH值为4. 5～5. 5时,600 mg/L ClO_2溶液对DON纯品处理12 h,降解率为28. 23%,并产生了2种降解产物;该方法同样适用于玉米乙醇发酵糟液中DON降解,600 mg/L的ClO_2溶液对玉米发酵糟液处理12 h,降解率达40. 70%,降解效果较好,对处理乙醇发酵工艺中的DON或其他真菌毒素具有一定的指导意义,为大规模生产中对DON的去除提供了新的思路。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇在食品加工中的变化研究进展

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)是最常见的一种污染粮食、饲料和食品的霉菌毒素之一,严重影响人和牲畜的健康。分析粮食从农田到餐桌的生产加工过程DON毒素的转移、降解规律,评价不同污染程度的粮食及其制品加工后的健康风险,及通过合理加工降低食品中毒素污染程度,成为保证粮食及其制品食用安全的重要方法。该文主要论述了国内外有关DON毒素在食品加工过程中的变化规律,为食品加工提供合理去除DON毒素方法并为完善食品中DON毒素的安全风险评估提供参考。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇致Vero细胞核基因组DNA损伤与修复的彗星实验观察

目的 应用彗星实验技术观察脱氧雪腐镰刀菌烯醇 (DON)对Vero细胞DNA损伤与修复特征 ,探讨DON的遗传毒性。方法 ① 1μmol、5 μmol、10 μmolDON对指数生长期的Vero细胞分别染毒 4、16h后 ,观察DNA的损伤。② 10μmolDON处理的细胞重新孵育 15、3 0、60、12 0min ,观察DNA损伤修复。③以彗星实验技术结合“彗星图像分析软件(KIAS)”获得彗星细胞主要参数 ,并进行统计分析。结果 ①随染毒剂量增加 ,染毒时间延长 ,受损伤细胞的数量逐渐增加 ,细胞DNA损伤程度逐渐加重 ;短时间染毒 ( 4h) ,损伤以DNA碎片的数量增加为主 ;较长时间染毒 ( 16h) ,损伤以DNA碎片变小为主。②去除DON ,重新孵育若干时间 ,随修复时间延长 ,受损伤细胞数量逐渐减少 ,细胞DNA损伤程度逐渐减轻 ,提示受损细胞在进行自我修复 ;短时间染毒 ( 4h)修复启动时间较短 ( <15min) ,而长时间染毒 ( 16h)修复启动时间也相应延长 ( >15min) ;孵育 12 0min后 ,修复完成。结论 DON毒素可致Vero细胞DNA损伤 ,重新孵育若干时间后损伤可修复。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒性和检测方法研究进展

本文综述了脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素的毒理以及在世界各国的有关现状,介绍了国内外食品检测中该毒素的提取、纯化和定量检测的最新进展及存在问题,建议应加强对国内市场食品特别是进出口食品中该毒素的检测。

基于分子模拟的脱氧雪腐镰刀菌烯醇半抗原分子设计及免疫效果研究

运用分子模拟软件Hyperchem 7.5,对脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)及其6种不同连接臂修饰后的DON衍生物的分子构型进行量化计算,通过对其结构参数以及分子轨道的计算比较,获得高特异性、高生物活性的DON半抗原结构,避免了半抗原设计方面的盲目性。同时合成了其中的3种半抗原,通过碳二亚胺(EDC)法与BSA进行偶联免疫Bal b/c小鼠,制备多抗血清,采用间接酶联免疫吸附法(ELISA)和间接竞争ELISA法进行抗体效果的比较。结果表明,分子模拟计算结果与免疫实验的结果相一致,分子模拟对半抗原结构设计具有指导性意义。

小麦中与低脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量关联的抗性基因类似物

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)是小麦遭受赤霉病危害后由赤霉病菌———禾谷镰刀菌产生的一种真菌毒素,这种毒素对人类和家畜的健康产生危害,严重地影响小麦的利用价值.种植低DON含量的品种是减少这种毒素危害的有效措施,而分子标记辅助育种技术能加速低DON品种的选育进程.在采用AFLP、SSR分子标记的基础上,进一步利用抗性基因类似物(RGA)对‘宁7840’(低DON含量的品种)和‘Clark’(高DON含量的品种)建立的133个重组自交系进行了DON含量的遗传特性分析.研究结果发现两个DON含量的数量特性位点(QTL),它们中含有4个与低DON含量密切相关RGAs,其中三个RGAs(RGA14-1,RGA16-1,RGA18-1)座落在染色体1A的长臂上,另一个(RGA14-2)座落在染色体5B的长臂上.座落在1AL和5BL上的QTL分别解释16.81%和7.84%的DON含量变异.DNA序列分析表明这些RGAs均与现已发现的抗性基因同源/类似,它们可能在小麦的低DON含量和赤霉病抗性上扮演着重要的角色.

工业制粉对小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的影响

本文用自然污染脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)3630PPb 的红硬冬小麦进行工业制粉生产,研究在各组分中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的分布及含量变化。结果表明在24个组分中全部含有 DON,以生产粉、麦麸中含量最高,分别为5000和4680PPb;建设粉、1皮粉、2皮粗粉、3皮粗粉和3心粉中含量较低,分别为3030、3000、2780、3000和3110PPb。二道清理可使小麦中 DON 下降4.68%,但与原麦中 DON 含量没有显著差异(P>0.05)。成品建设粉中 DON 下降了16.53%,明显低于原麦中毒素含量(P<0.05)。结果提示,小麦制粉可以降低面粉中DON 含量,但不能有效地去除小麦中的 DON。