HPLC法测定地特胰岛素有关物质及主要杂质鉴别

目的:探索和建立地特胰岛素的纯度分析测定方法,并对主要杂质进行鉴别。方法:采用RP-HPLC方法分离分析地特胰岛素的有关物质,使用Protronavi C4色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm,300),流动相A为0.2 mol·L-1硫酸钠缓冲液(pH2.3)-乙腈(82∶18),流动相B为水-乙腈(40∶60),洗脱梯度(0 min,35%B;45 min,67%B;65 min,67%B;66 min,35%B;80min,35%B),流速1.0 mL·min-1,检测波长214 nm,柱温45℃。同时收集该色谱条件下的最大杂质组分,利用LC-MS/MS方法进行鉴别。液质条件为:液相色谱分离采用Acquity UPLC BEH300 C18柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相A为含0.1%甲酸的水溶液,流动相B为含0.1%甲酸的乙腈溶液,30 min内B相由5%升至30%,流速为300 nL·min-1,洗脱时间为30 min。质谱离子源为纳升级电喷雾离子源,采用正离子模式检测。结果:建立的RP-HPLC纯度分析方法具有良好的方法学验证结果,能准确测定样品中的有关物质;LC-MS/MS鉴定了地特胰岛素中的最大杂质为A链第21位天冬酰胺的脱氨产物。结论:建立的RP-HPLC和LC-MS/MS方法可准确有效地对地特胰岛素有关物质进行定量测定和鉴别分析,可作为地特胰岛素的质量研究和质控分析方法。