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肝细胞癌组织中APOBEC3s类胞苷脱氨酶基因家族成员的表达观察 被引量:1
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作者 陈清梅 陈睿 邓阳 《山东医药》 CAS 2018年第47期15-19,共5页
目的观察载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3(APOBEC3s)类胞苷脱氨酶基因家族成员在肝细胞癌(HCC)组织中的表达变化,并探讨其意义。方法分别采用实时定量PCR和免疫组化法检测155例HCC患者癌组织和癌旁组织中的APOBEC3s类胞苷脱氨酶基因家族... 目的观察载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3(APOBEC3s)类胞苷脱氨酶基因家族成员在肝细胞癌(HCC)组织中的表达变化,并探讨其意义。方法分别采用实时定量PCR和免疫组化法检测155例HCC患者癌组织和癌旁组织中的APOBEC3s类胞苷脱氨酶基因家族成员A3A、A3B、A3C、A3D、A3F、A3G、A3H的mRNA和蛋白。以癌组织中APOBEC3s类胞苷脱氨酶基因家族成员mRNA相对表达量的中位数为界,将155例HCC患者分为高表达组和低表达组,并分析APOBEC3s类胞苷脱氨酶基因家族各成员mRNA相对表达量与HCC预后的关系。结果 HCC患者癌组织中APOBEC3s类胞苷脱氨酶基因家族成员A3A、A3B、A3C、A3D、A3F、A3G、A3H mRNA相对表达量分别为4. 08±0. 11、6. 61±0. 17、6. 42±0. 10、5. 29±0. 12、6. 64±0. 12、7. 49±0. 07、4. 32±0. 08,HCC患者癌旁组织中APOBEC3s类胞苷脱氨酶基因家族成员A3A、A3B、A3C、A3D、A3F、A3G、A3H mRNA相对表达量分别为2. 93±0. 11、4. 60±0. 11、5. 48±0. 11、5. 22±0. 08、6. 97±0. 08、5. 91±0. 12、4. 21±0. 10,癌组织与癌旁组织中A3A、A3B、A3C、A3G mRNA相对表达量相比,P均<0. 05。HCC患者癌组织中APOBEC3s类胞苷脱氨酶基因家族成员A3A、A3B、A3C、A3D、A3F、A3G、A3H蛋白阳性表达率分别为92. 3%、96. 8%、89. 0%、58. 1%、69. 7%、85. 9%、52. 9%,HCC患者癌旁组织中APOBEC3s类胞苷脱氨酶基因家族成员A3A、A3B、A3C、A3D、A3F、A3G、A3H蛋白阳性表达率分别为61. 3%、63. 2%、57. 4%、61. 9%、74. 8%、47. 7%、47. 7%,癌组织与癌旁组织中A3A、A3B、A3C、A3G蛋白阳性表达率相比,P均<0. 05。155例HCC患者癌组织中A3A mRNA低表达者、高表达者5年生存率分别为27. 3%、17. 7%,两者相比,P <0. 05; A3B mRNA低表达者、高表达者5年生存率分别为30. 0%、17. 1%,两者相比,P <0. 05; A3G mRNA低表达者、高表达5年生存率分别为33. 6%、13. 7%,两者相比,P <0. 05。结论APOBEC3s类胞苷脱氨酶基因家族成员A3A、A3B、A3C、A3G mRNA和蛋白表达水平在HCC癌组织中显著上调,且A3A、A3B、A3G mRNA高表达的HCC患者术后生存率低。 展开更多
关键词 载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽3胞苷脱氨酶 肝肿瘤 原发性肝癌 肝细胞癌
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由BL21DE3^(pET28C-rPAL-1-cDNA)高效表达具有酶活性的苯丙氨酸脱氨酶 被引量:1
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作者 蔡朱男 余应年 +1 位作者 陈星若 袁丽芳 《中国药理学与毒理学杂志》 CSCD 北大核心 2000年第3期211-215,共5页
为了开辟苯丙酮尿症治疗新途径 ,本实验室构建了插入水稻苯丙氨酸脱氨酶 (PAL) c DNA的重组表达质粒 ,并用它转化大肠杆菌 BL2 1 DE3获得工程菌 BL2 1 DE3p ET2 8C-r PAL -1-c DNA.经异丙基硫代 -β-D-半乳糖苷诱导后 ,通过 SDS- PAGE... 为了开辟苯丙酮尿症治疗新途径 ,本实验室构建了插入水稻苯丙氨酸脱氨酶 (PAL) c DNA的重组表达质粒 ,并用它转化大肠杆菌 BL2 1 DE3获得工程菌 BL2 1 DE3p ET2 8C-r PAL -1-c DNA.经异丙基硫代 -β-D-半乳糖苷诱导后 ,通过 SDS- PAGE及微型蛋白双向电泳 ,证明表达的目的蛋白的分子量为 78.6ku,主要存在于破碎菌体的沉积物中 (以包涵体形式存在 ) .按 Zucker法测定 PAL酶活性 ,并进行酶动力学实验 .测得表达蛋白的酶比活性为 462 nmol·g-1·min-1,Km,vmax分别为 0 .50 mmol·L-1和3. 0 5nmol · min-1.结果证明所建立BL2 1 DE3p ET2 8C-r PAL -1-c DNA大肠杆菌菌株能高效表达有活性的 PAL . 展开更多
关键词 脱氨酶类 苯丙氨酸脱氨酶 苯丙氨酸 苯丙酮尿症
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胞嘧啶脱氨酶基因联合5-氟胞嘧啶对卵巢癌裸鼠移植瘤的抑制作用 被引量:5
3
作者 姚远 彭芝兰 +2 位作者 王和 李清丽 刘珊玲 《中华妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期195-197,共3页
目的 了解胞嘧啶脱氨酶 (CD)基因联合 5 氟胞嘧啶 (5 FC)对卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用。方法 应用胚肾 2 93细胞扩增整合有CD基因的复制缺陷的腺病毒 ,并将其分离、提纯。以卵巢癌裸鼠模型作为研究对象。实验组 (5只 ) :... 目的 了解胞嘧啶脱氨酶 (CD)基因联合 5 氟胞嘧啶 (5 FC)对卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用。方法 应用胚肾 2 93细胞扩增整合有CD基因的复制缺陷的腺病毒 ,并将其分离、提纯。以卵巢癌裸鼠模型作为研究对象。实验组 (5只 ) :将整合有CD基因的复制缺陷的腺病毒 0 1ml[1×10 10 菌斑形成单位 (pfu) /ml]注入瘤体内 ,隔日 1次 ,共 3次 ;同时将 5 FC按每次 4 0 0mg/kg注入裸鼠腹腔内 ,每日 2次 ,共 7d。对照组 (5只 ) :以同样方法将同体积生理盐水注入裸鼠体内。观察两组裸鼠的肿瘤生长速度及倍增时间。结果  (1)整合有CD基因的腺病毒滴度为 1 0 7× 10 10 pfu/ml。 (2 )实验组裸鼠肿瘤生长明显受抑制 ,肿瘤体积由 9mm3 增加到 85 5mm3 ,而对照组肿瘤体积由 7mm3 增加到 2 0 14mm3 ,两组比较 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,这种显著性差异在用药结束后约 2 0d才表现出来 ,并维持约 30d。(3)实验组与对照组肿瘤倍增时间分别为 (8 1± 0 7)d和 (6 4± 0 7)d ,两组比较 ,差异有显著性 (P<0 0 5 )。结论 应用CD基因联合 5 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 核苷酸脱氨酶类 氟胞嘧啶 控制
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重组腺病毒rAdCDglyES治疗宫颈癌的体外实验研究 被引量:1
4
作者 李圃 李冬田 +1 位作者 尹冰楠 汤华 《天津医药》 CAS 北大核心 2008年第4期276-279,I0002,共5页
目的:构建含CDglyES融合基因的重组腺病毒,并观察其在体外对宫颈癌细胞的直接抑瘤作用和对血管内皮细胞的抑制作用。方法:用PCR方法扩增CD基因和glyES基因片段,构建成腺病毒穿梭质粒pAdCDglyES。用细菌内同源重组方法与腺病毒骨架质粒pA... 目的:构建含CDglyES融合基因的重组腺病毒,并观察其在体外对宫颈癌细胞的直接抑瘤作用和对血管内皮细胞的抑制作用。方法:用PCR方法扩增CD基因和glyES基因片段,构建成腺病毒穿梭质粒pAdCDglyES。用细菌内同源重组方法与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1重组构建出重组腺病毒质粒prAdCDglyES。经脂质体介导转染293细胞,进而扩增获取重组腺病毒rAdCDglyES。用MTT法检测rAdCDglyES/5-FC系统对宫颈癌细胞株HeLa细胞的生长抑制率及其表达产物对脐静脉血管内皮细胞ECV-304增殖的影响。结果:纯化的rAdCDglyES滴度为1×1013.3TCID50/L,对HeLa细胞的生长抑制率达(84.1±7.3)%,高于对照rAd-LacZ/5-FC系统的(23.1±14.1)%,差异有统计学意义(P<0.01)。浓缩的转染了rAdCDglyES的细胞培养上清液对ECV-304细胞增殖的抑制率为(77.7±1.8)%,高于同样浓缩的转染rAd-CD细胞培养上清液抑制率的(22.9±9.7)%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:rAdCDglyES在体外对宫颈癌具有直接和间接抑瘤作用。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 胞嘧啶 脱氨酶类 内皮抑素 重组蛋白质 腺病毒科 基因
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ADA和TB-Ab联合检测对肺结核诊断价值探讨 被引量:1
5
作者 刘和录 申杰 袁咏梅 《中国误诊学杂志》 CAS 2008年第28期6844-6845,共2页
目的:探讨ADA和TB-Ab联合检测对肺结核诊断价值。方法:选取50例活动性肺结核患者和50例非结核患者,分别检测ADA和TB-Ab,比较单项检测与联合检测之间的统计学差异。结果:两项指标联合检测的敏感性、特异性、阳性预示值、阴性预示值分别为... 目的:探讨ADA和TB-Ab联合检测对肺结核诊断价值。方法:选取50例活动性肺结核患者和50例非结核患者,分别检测ADA和TB-Ab,比较单项检测与联合检测之间的统计学差异。结果:两项指标联合检测的敏感性、特异性、阳性预示值、阴性预示值分别为92.0%、82.0%、83.6%、91.1%,其中敏感性高于单一任何指标(P<0.05),阴性预示值明显高于ADA(P<0.01),但特异性和阳性预示值与单一指标比较无统计学意义。结论:ADA和TB-Ab联合检测比单一指标敏感性高,可提高肺结核的诊断水平,减少漏诊和误诊。 展开更多
关键词 核苷脱氨酶类/分析 结核 肺/酶学/诊断 抗体/分析 敏感性与特异性
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腺病毒介导胞嘧啶脱氨酶基因对直肠癌细胞的杀伤作用
6
作者 李世拥 于波 +3 位作者 安萍 陈钢 蔡惠云 郭文华 《中华普通外科杂志》 CSCD 北大核心 2001年第12期744-746,共3页
目的探讨腺病毒载体介导的胞嘧啶脱氨酶 (CD)基因转染和CD/ 5 FC对直肠癌细胞的杀伤作用。方法用重组腺病毒介导外源CD基因转移到人直肠癌细胞株HR 834 8,通过检测腺病毒的转导效率、CD基因表达 ,以及集落形成实验、细胞存活率测定 ,... 目的探讨腺病毒载体介导的胞嘧啶脱氨酶 (CD)基因转染和CD/ 5 FC对直肠癌细胞的杀伤作用。方法用重组腺病毒介导外源CD基因转移到人直肠癌细胞株HR 834 8,通过检测腺病毒的转导效率、CD基因表达 ,以及集落形成实验、细胞存活率测定 ,裸鼠移植癌治疗实验 ,观察分析CD/ 5 FC对癌细胞的杀伤作用。结果重组腺病毒介导CD基因转染 ,在癌细胞中得到高效表达。CD/ 5 FC系统对转染含CD重组腺病毒HR 834 8细胞的集落形成、细胞生长均有明显的抑制作用 ,而对无CD基因转染癌细胞无影响。在转染和未转染CD基因的HR 834 8混合体系中 ,CD/ 5 FC除了杀伤转染CD基因的癌细胞外 ,对周围的无CD转染癌细胞也有明显的杀伤作用 ,表现出很强的“旁观者效应”。裸鼠皮下移植癌治疗实验结果表明 ,CD/ 5 FC对HR 834 8实体癌生长抑制率为 71 5 %。结论CD/ 5 FC对腺病毒介导CD基因转染的直肠癌细胞有很强的杀伤作用和显著的“旁观者效应”。 展开更多
关键词 直肠肿瘤 基因疗法 脱氨酶类 腺病毒科 直肠癌
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人类免疫缺陷病毒-1感染者胞嘧啶脱氨基酶家族表达水平分析
7
作者 王珍燕 江雪艳 +1 位作者 张云智 卢洪洲 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期24-29,共6页
目的定量研究HIV-1感染者外周血单个核细胞(PBMC)中胞嘧啶脱氨基酶家族成员hA3B、hA3F和hA3G的mRNA表达水平,并分析它们与CD4^+T淋巴细胞计数的相关性。方法采集各21例未接受和已接受抗病毒治疗的HIV-1感染者、10例HIV-1阴性健康对... 目的定量研究HIV-1感染者外周血单个核细胞(PBMC)中胞嘧啶脱氨基酶家族成员hA3B、hA3F和hA3G的mRNA表达水平,并分析它们与CD4^+T淋巴细胞计数的相关性。方法采集各21例未接受和已接受抗病毒治疗的HIV-1感染者、10例HIV-1阴性健康对照者的外周静脉血,Ficoll密度梯度离心法分离PBMC,采用反转录-实时荧光定量PCR法检测其中hA3B、hA3F和hA3GmRNA水平,流式细胞术检测CD4^+T淋巴细胞计数。数据行t、t'或Wilcoxon秩和检验。结果未治疗及已治疗的HIV-1感染者、HIV-1阴性者hA3BmRNA的表达水平分别为208.4、365.2和563.6(P〈0.05),hA3FmRNA分别为245.5、316.6和442.9(P〈0.05),hA3GmRNA分别为404.6、360.8和638.6。HIV-1感染者hA3GmRNA水平低于健康对照(Z=2.451,Z=2.493,均P〈0.05),但未治疗与已治疗HIV-1组间比较差异无统计学意义(Z=0.340,P=0.7342)。HIV-1感染者hA3B、hA3F和hA3GmRNA表达水平与CD4^+T淋巴细胞计数均无相关性(未治疗者:r=-0.0104,r=-0.0545,r=0.1623,均P〉0.05;已治疗者:r=0.3220,r=0.2193,r=0.1455,均P〉0.05)。hA3B、hA3F和hA3G三者mRNA水平在已治疗HIV-1感染者和健康对照者中呈正相关(P〈0.05),而在未治疗HIV-1感染者无相关性(P〉0.05)。结论hA3B、hA3F和hA3G基因表达水平与CD4^+T淋巴细胞计数无直接相关性;HIV-1感染可导致PBMC中hA3B、hA3F和hA3G表达水平降低,抗病毒治疗可上调hA3B和hA3F的表达。 展开更多
关键词 HIV感染 胞嘧啶 脱氨酶类 基因表达 单核细胞 抗原 CD4 淋巴细胞计数
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干扰素α和胸腺五肽协同干预对HepG2.2.15细胞APOBEC3A和APOBEC3B mRNA表达的影响
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作者 熊芳 高耀 +4 位作者 马艳品 于乐乐 谭炳琴 鲍旭丽 闾军 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2020年第1期76-79,共4页
目的探讨IFNα和胸腺五肽(TP5)协同干预对HepG2.2.15细胞载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3A(APOBEC3A)、APOBEC3B基因mRNA表达水平的影响。方法将HepG2.2.15细胞分为空白对照组、IFN处理组、TP5处理组和IFNα联合TP5组,在处理的12、24、48... 目的探讨IFNα和胸腺五肽(TP5)协同干预对HepG2.2.15细胞载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3A(APOBEC3A)、APOBEC3B基因mRNA表达水平的影响。方法将HepG2.2.15细胞分为空白对照组、IFN处理组、TP5处理组和IFNα联合TP5组,在处理的12、24、48和72 h用实时荧光定量PCR方法检测细胞APOBEC3A、APOBEC3B基因mRNA表达水平。计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果与空白对照组相比,IFNα、IFNα联合TP5分别处理12、24、48和72 h后,APOBEC3A mRNA的表达水平显著提高,差异均有统计学意义(P值均<0.001)。与IFNα处理组相比,4个时间点IFNα联合TP5组APOBEC3A mRNA的表达水平显著提高,差异均有统计学意义(P值<0.001)。TP5处理在各时间点对APOBEC3A mRNA表达水平的影响差异无统计学意义(P值均>0.05)。与对照组相比,所有处理组中APOBEC3B的mRNA表达水平差异无统计学意义(P值均>0.05)。结论IFNα联合TP5处理可显著上调HepG2.2.15细胞中APOBEC3A mRNA的表达水平。 展开更多
关键词 干扰素Α 胸腺喷丁 APOBEC脱氨酶类
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Molecular evidence suggests that the enigmatic Sulawesi endemic Geomalia heinrichi belongs in the genus Zoothera (Turdidae, Aves) 被引量:1
9
作者 Urban OLSSON Per ALSTRM 《Chinese Birds》 CSCD 2013年第2期155-160,共6页
The taxonomic status of the Sulawesi endemic Geomalia heinrichi has long been debated, and it has variously been treated as a babbler (Timaliidae) or a turdid (Turdidae). We estimated the phylogeny of 43 taxa in the f... The taxonomic status of the Sulawesi endemic Geomalia heinrichi has long been debated, and it has variously been treated as a babbler (Timaliidae) or a turdid (Turdidae). We estimated the phylogeny of 43 taxa in the family Turdidae based on the mitochondrial cytochrome b gene and the nuclear myoglobin intron 2 and ornithine decarboxylase introns 6–7. Geomalia heinrichi was shown to be part of the Zoothera clade with high support. We propose that Geomalia is transferred to Zoothera under the name Zoothera heinrichi. 展开更多
关键词 Bayesian inference cytochrome b myoglobin intron 2 (myo) ornithine decarboxylase (ODC) introns 6–7 taxonomy
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慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞中APOBEC3GmRNA与血丙型肝炎病毒RNA的相关性 被引量:3
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作者 聂静敏 蔡卫平 +5 位作者 胡凤玉 李凌华 刘金峰 许敏 关玉娟 唐小平 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期104-107,共4页
目的探讨慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMc)APOBEC3GmRNA表达水平与HCV慢性感染的关系。方法用TaqMan实时(RT)-PCR法检测49例慢性丙型肝炎患者以及31名健康人PBMC中APOBEC3GmRNA的水平,同时检测丙型肝炎患者外周血HCVRNA载... 目的探讨慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMc)APOBEC3GmRNA表达水平与HCV慢性感染的关系。方法用TaqMan实时(RT)-PCR法检测49例慢性丙型肝炎患者以及31名健康人PBMC中APOBEC3GmRNA的水平,同时检测丙型肝炎患者外周血HCVRNA载量。所得数据采用SPSS11.0分析软件进行t检验和回归分析。结果慢性丙型肝炎患者PBMC中APOBEC3GmRNA的表达水平为(1.5±1.9)×10-5拷贝/mL,低于健康对照组(5.2±5.5)×10-5拷贝/mL,两组比较差异具有统计学意义(=-3.005,P〈0.01),而与外周血HCVRNA载量无明显相关性(r=-0.082,P〉O.05)。结论HCV感染抑制APOBEC3G的表达,但APOBEC3G不影响HCV复制。 展开更多
关键词 肝炎 丙型 慢性 核苷脱氨酶类 单核细胞 病毒载量 RNA信使 RNA 病毒
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联合应用自杀基因/前药系统和放疗对人骨肉瘤细胞的杀伤作用 被引量:3
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作者 乔慧 丘钜世 +1 位作者 朱全胜 王晋 《中华骨科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第7期427-431,共5页
目的观察联合应用自杀基因/前药系统和放疗对人骨肉瘤细胞的杀伤作用。方法以大肠杆菌JM107为模板,PCR扩增出CD基因,测序并将其插入真核表达质粒pEGFP-C1中,构建EGFPCD融合基因。用DOTAP将分别含有CD和HSV-TK的两种质粒pEGFP-CD和tgCMVH... 目的观察联合应用自杀基因/前药系统和放疗对人骨肉瘤细胞的杀伤作用。方法以大肠杆菌JM107为模板,PCR扩增出CD基因,测序并将其插入真核表达质粒pEGFP-C1中,构建EGFPCD融合基因。用DOTAP将分别含有CD和HSV-TK的两种质粒pEGFP-CD和tgCMVHyTK同时导入人骨肉瘤细胞SAOS-2,经G418和潮霉素B共同筛选后,于荧光显微镜下观察阳性克隆细胞株SAOS-2CDTK。运用PCR和Northernblot方法检测SAOS-2CDTK细胞中的CD和HSV-TK基因及其表达。用MTT法检测单独或联合应用两种前药(GCV、5-FC)对SAOS-2CDTK细胞的存活率、“旁观者效应”以及细胞对放疗敏感性的影响。结果测序图和酶切鉴定证明CD基因的克隆和含EGFPCD融合基因的重组真核表达质粒pEGFP-CD的构建是成功的。荧光显微镜观察SAOS-2CDTK细胞胞质呈现绿色荧光。PCR和Northernblot分析均表明SAOS-2CDTK细胞中含有CD和HSV-TK两个基因,并获得mRNA水平的表达。与单一前药相比,联合应用两种前药时,SAOS-2CDTK细胞的存活率下降,“旁观者效应”及细胞对放疗的敏感性增强。结论联合应用两种自杀基因/前药系统和放疗可增强细胞毒作用,为骨肉瘤的治疗提供了一条新的有效途径。 展开更多
关键词 骨肉瘤 基因疗法 放射疗法 胞嘧啶 脱氨酶类 胸苷激酶
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Studies on the combinatorial modifications with two amino groups on the catalytic core of 10-23 DNAzyme
12
作者 李朋羽 李志文 +1 位作者 王琦 何军林 《Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences》 CAS CSCD 2017年第12期851-857,共7页
As a small catalytic DNA molecule, 10-23 DNAzyme has cleavage ability against complementary RNA. Previous studies of chemical modification have shown that its catalytic core can be further optimized in order to obtain... As a small catalytic DNA molecule, 10-23 DNAzyme has cleavage ability against complementary RNA. Previous studies of chemical modification have shown that its catalytic core can be further optimized in order to obtain more powerful catalytic ability. The analogues of 2'-deoxyadenosine (5) and 2'-deoxyguanosine (6) could improve the cleavage ability of the DNAzyme when positioned at positions A9, (32 and G14 in the catalytic core, respectively. Moreover, their combinatorial incorporations were studied, the results implicated that the effect was position-dependent, and positive additive results could be achieved at some positions. The highly conserved G1, G2 and G14 could be optimized by single or combinatorial modification with 2'-deoxyguanosine analogues. Chemical modifications on the functional groups of the core residues would be a feasible approach for the optimization of 10-23 DNAzyme. 展开更多
关键词 10-23 DNAzyme Chemical modification Amino group Nucleoside analogues Observed rate constant
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