东方山羊豆脱水蛋白基因的克隆及初步分析

采用SMART RACE方法,从东方山羊豆盐诱导抑制性差减杂交cDNA文库中分离到了一个脱水蛋白(GoDHN)基因。该基因cDNA全长1 169bp,开放阅读框843bp,编码281个氨基酸,编码的蛋白质分子量为28.71kDa。经实时荧光定量PCR分析,GoDHN基因在东方山羊豆的茎和叶中表达量明显高于根中表达量,并且基因表达受ABA、NaCl和PEG的诱导,随着诱导时间的增加,表达量呈持续增长趋势。这些结果表明,DHN基因在东方山羊豆的抗逆性中可能起到重要的调控作用。本研究成功构建了pCAMBIA1302-DHN植物表达载体,为下一步转基因研究奠定了基础。

极端耐盐植物盐穗木脱水胁迫响应基因Rd22的克隆及表达分析

目的:选择合适的标记基因用于检测胁迫处理盐穗木的有效性。方法:根据NCBI同源序列比对设计简并引物,通过RT-PCR从盐穗木(Halostachys caspica)中克隆获得盐穗木脱水胁迫响应基因Rd22(HcRd22)基因,并采用实时定量PCR技术检测其逆境胁迫下的表达规律。结果:最终扩增获得301bp盐穗木HcRd22核酸序列,NCBI和clustalwz序列比对分析表明HcRd22具有BURP结构域。400 mmol/L盐胁迫和50μmol/L ABA处理分别使HcRd22的基因表达量在处理12h上调2.5倍和3倍。结论:所克隆的HcRd22基因属于盐胁迫和ABA处理的响应基因,可作为今后研究盐穗木胁迫处理的标准基因。