DNA脱碱基位点的检测与应用

脱碱基位点是一种常见的DNA损伤,源于N-糖苷键断裂而使碱基脱落。辐射、烷基化试剂和一些抗癌药物等可能会造成碱基脱落,因此脱碱基位点作为标志性损伤能够帮助疾病早期筛查、药物毒副作用评价、环境污染物毒性评价等。目前已有不同的检测方法用于脱碱基位点的定量、定性分析,包括32P后标记法、LC-MS、ELISA及化学探针检测法等。另一方面,由于脱碱基位点在双链DNA内形成疏水空腔,能够结合小分子,使得脱碱基位点作为结合位点被用于小分子检测、构建适配体传感器及SNP检测。本文简要概述目前为止对DNA脱碱基位点的化学探针检测法研究进展以及含有脱碱基位点DNA的应用研究进展,并展望其发展趋势。

DNA脱碱基位点的检测方法及其生物学研究进展

DNA中糖苷键断裂形成的脱碱基位点(脱嘌呤/嘧啶位点,AP位点)是常见的DNA损伤类型之一,由核苷酸自发水解产生,也是DNA碱基切除修复途径中的关键中间体。若修复不及时,可能会导致DNA复制阻滞和DNA链断裂,产生突变和细胞毒性,同时还会引起形成DNA交联或DNA-蛋白质交联的损伤,因此对于AP损伤的检测有助于理解细胞氧化应激损伤和基因毒性物质的毒性评价。目前检测AP位点的方法有14C或32P后标记法、酶联免疫吸附分析(ELISA)法和液相色谱-质谱(LC-MS)技术等。该文重点概述DNA中AP位点的检测方法和生物学研究进展,并展望了AP位点损伤相关研究的前景。

基于脱碱基位点的免标记分子信标设计

本文设计了一个免标记的分子信标,该分子信标茎部有一个无碱基位点,其对面为A碱基,没有目标DNA时,分子信标为发卡型结构,荧光小分子alloxazine通过氢键结合到缺失位点处,其荧光猝灭。当加入目标DNA后,分子信标的发夹结构被打开,alloxazine释放出来,荧光恢复。

基于核酸脱碱基位点的铽离子荧光增强型单核苷酸多态性识别研究

基于核酸脱碱基(AP)位点构建了无机配体稀土铽离子(Tb3+)荧光增强型单核苷酸多态性(SNP)识别方法.在目标链靶标碱基对应的探针链上相应位置引入AP位点,发现Tb3+可以选择性地结合在AP位点,光激发时发生从DNA碱基到结合的Tb3+的能量转移,使Tb3+特征荧光显著增强.这种荧光增强作用与靶标碱基及AP位点侧翼碱基类型密切相关.当靶标碱基和侧翼碱基为G时,荧光最强.该方法可用于区分肿瘤抑制基因p53密码子177位的C/G碱基变异.

基于氧化石墨烯和三链DNA的三聚氰胺检测研究

发展成本低、准确度高、特异性好的三聚氰胺检测方法具有重要的研究意义。基于氧化石墨烯(GO)自身较好的荧光猝灭性能,结合含脱碱基位点的三链DNA和核酸外切酶Ⅲ的特殊性能,构建了一种高灵敏的特异性三聚氰胺检测新方法。首先制备了GO,并采用紫外-可见吸收光谱仪、傅里叶红外吸收光谱仪及透射电子显微镜对其进行了表征。在最佳的实验条件下,考察了设计方法对三聚氰胺的检测灵敏度和特异性。结果显示,体系荧光强度与三聚氰胺浓度呈现较好的线性关系,线性范围为0.5×10^(-9)~7.0×10^(-9) mol/L,检测限为0.32×10^(-9) mol/L。此外,本方法对奶粉样品中三聚氰胺检测的回收率为92.8%~106.1%,表现出很好的实际应用潜力。