脱细胞异体神经移植物联合电针对坐骨神经损伤大鼠脊神经节的保护作用及机制

目的探讨脱细胞异体神经移植物(ANA)联合电针对坐骨神经损伤(SNI)大鼠脊神经节的保护作用及机制。方法选取50只雄性SD大鼠,10只制备ANA;40只随机分为正常组、模型组、ANA组和联合组,每组10只。分离右侧坐骨神经,于梨状肌下缘5 mm处去除10 mm制备SNI模型。ANA组将制备好的ANA连接在损伤神经的两断端处。联合组于ANA连接术后2 d采用电子针疗仪电针“环跳穴”和“阳陵泉穴”,15 min/d,7 d为1个疗程,共4个疗程。电生理检测各组大鼠坐骨神经传导速度,评估受损轴突再生情况;尼氏染色观察脊神经节中神经元的形态结构;Western blotting和免疫荧光法检测脊神经节中神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠坐骨神经传导速度明显降低(P<0.01);神经节神经元中的尼氏体因肿胀、溶解导致结构不完整,数量显著减少(P<0.01);NGF和BDNF蛋白表达量明显降低(P<0.01)。与模型组比较,ANA组和联合组大鼠坐骨神经传导速度明显增加(P<0.01);神经节神经元中尼氏体损伤减弱,数量明显增加(P<0.01);NGF和BDNF蛋白表达量显著升高(P<0.01)。与ANA组比较,联合组大鼠坐骨神经传导速度显著增加(P<0.01);神经节神经元中尼氏体形态较规则,数量明显增加(P<0.01);NGF蛋白表达量显著升高(P<0.01)。结论ANA联合电针可提高大鼠坐骨神经传导速度,改善神经节中神经元的形态结构,发挥对脊神经节神经元的保护作用,其机制可能与提高神经元中NGF和BDNF蛋白的表达,尤其是NGF蛋白的表达相关。

电针联合脱细胞异体神经移植物对坐骨神经损伤大鼠脊神经节的保护机制

目的:观察电针联合脱细胞异体神经移植物(ANA)对坐骨神经损伤(SNI)大鼠脊神经节细胞形态结构及神经生长因子(NGF)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达的影响,探讨电针联合ANA对脊神经节的保护机制。方法:将SPF级雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、单纯ANA桥接组(桥接组)和电针联合ANA组(联合组),每组10只。采用右侧坐骨神经离断法制备SNI大鼠模型。桥接组将ANA桥接于损伤坐骨神经的两断端处。联合组在ANA桥接术后2 d予患侧“阳陵泉”“环跳”电针治疗,疏密波,频率1 Hz/20 Hz,强度1 mA,15 min/d,7 d为1个疗程,连续治疗4个疗程。足迹实验观察各组大鼠坐骨神经功能指数(SFI);计算大鼠胫前肌湿重比率;尼氏染色法观察大鼠腰4-6段右侧脊神经节细胞的形态结构;免疫荧光法和Western blot法检测大鼠脊神经节中NGF和p-Akt蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠SFI和胫前肌湿重比率显著降低(P<0.05);脊神经节细胞中尼氏体溶解,结构不完整,数量减少(P<0.05),NGF和p-Akt蛋白表达量显著降低(P<0.05)。与模型组比较,桥接组和联合组大鼠SFI和胫前肌湿重比率显著升高(P<0.05);脊神经节细胞中尼氏体损伤减弱且数量增加(P<0.05),NGF和p-Akt蛋白表达量显著升高(P<0.05)。与桥接组比较,联合组大鼠SFI和胫前肌湿重比率显著升高(P<0.05);脊神经节细胞中尼氏体形态较规则且数量增加(P<0.05),NGF和p-Akt蛋白表达量显著升高(P<0.05)。结论:电针联合ANA治疗可提高大鼠SFI和胫前肌湿重比率,改善脊神经节细胞的形态结构,其机制可能与增加脊神经节中NGF和p-Akt蛋白的表达,从而发挥对脊神经节的保护作用有关。

人脱细胞异体神经移植物修复上肢高位创伤性神经缺损的初步观察

目的观察人脱细胞异体神经修复材料(hANG)修复上肢高位创伤性神经缺损的有效性。方法自2017年3月至2019年1月,采用hANG修复创伤性上肢神经缺损8例,其中男6例,女2例;年龄21~53岁,平均35.4岁。臂远端桡神经缺损2例,前臂段正中神经缺损4例,骨间后神经缺损1例,前臂段尺神经缺损1例;合并臂肌肉损伤2例,前臂肌肉损伤4例,合并肱动脉缺损1例,创面中至重度污染;神经缺损长30~60 mm,平均45 mm。均为急诊手术,先行骨折固定,修复肌肉组织,找出缺损神经远、近端,修剪至正常神经乳头,以hANG端端缝合进行桥接。术后随访18~40个月,平均30.6个月,观察移植物排斥反应,采用中华医学会手外科学会上肢部分功能评定试用标准评价修复效果。结果所有病例未出现移植物免疫排斥反应。5例伤口Ⅰ期愈合,2例创面无法闭合,Ⅱ期行游离植皮术后伤口愈合,1例患者术后10 d出现皮肤部分坏死,行局部皮瓣转移修复后伤口愈合。2例正中神经恢复良好,手指握拳及拇指对掌肌力Ⅳ级,感觉S_(3)^(+),1例骨间后神经恢复良好,伸拇伸指肌力Ⅳ级。根据中华医学会手外科学会上肢部分功能评定试用标准,优3例,可1例,差4例。结论在严格清创后,hANG可应用于急诊的高位创伤性神经缺损的修复,并可部分恢复神经功能。

脱细胞异体神经基质移植物对脊髓前角运动神经元的保护作用

目的探讨脱细胞神经基质移植物异体移植对脊髓前角运动神经元的保护作用。方法W ist-ar大鼠30只,10只用化学提取法制备坐骨神经脱细胞基质移植物;另20只分为实验组(坐骨神经缺损移植物桥接组)和对照组(坐骨神经缺损组),每组10只。动物饲养3到4个月后取移植物、脊髓腰6-骶1节段和术侧腓肠肌,做HE、尼氏和AchE结合镀银染色以及电镜标本,进行组织学和超微结构观察,并对脊髓前角细胞的数量做统计学分析。结果实验组动物移植术后3到4个月术侧下肢行走时,后蹬动作有力,足趾能分开,步态趋于正常;针刺足底有逃避动作。对照组动物术侧下肢的运动和感觉功能未见恢复。实验组动物的移植物内见有大量再生的神经纤维,髓鞘结构清晰,腓肠肌内见有再生的神经纤维束和运动终板。实验组移植侧和对照组缺损侧脊髓腰6到骶1节段前角外侧群细胞的数量比正常侧减少,尤以对照组为甚。实验组移植侧前角细胞比正常侧的前角细胞数减少而移植侧前角细胞数比对照组缺损侧明显减少(P<0.01)。结论脱细胞异体神经基质移植物桥接周围神经缺损对运动神经元胞体的存活具有良好的保护作用。

脱细胞同种异体神经移植物修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究

目的 观察脱细胞处理的同种异体神经移植物修复大鼠坐骨神经缺损的作用。 方法 用组织工程学方法制备的大鼠同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损 ,并对再生神经进行电生理学功能测试 ,光镜、电镜观察移植物内的再生神经 ,并进行统计分析。 结果 术后 13周内 ,动物未见炎症及排斥反应。用脱细胞处理的同种异体神经移植物修复神经缺损 ,再生神经的传导功能、纤维数量、轴突直径、有髓纤维占有的面积与自体神经移植对照及计量学上统计分析均无显著性差异。 结论 脱细胞处理的同种异体神经移植物具有良好的组织相容性 ,它对缺损的坐骨神经再生有促进作用。

BDNF在脱细胞同种异体神经移植物修复神经缺损后不同组织中的表达

目的探讨脱细胞同种异体神经移植物(ANA)修复大鼠坐骨神经缺损后促神经再生的分子作用机制。方法将36只Wistar大鼠随机分成6组:正常对照组,自体移植组,桥接2,4,8,12周组,每组6只,分别观测患侧L4脊髓及胫前肌内脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白及mRNA表达。结果ANA桥接大鼠坐骨神经缺损后2周患侧脊髓内BDNF表达增高,4周时达高峰,持续到8周,然后逐渐降低,12周时仍显著高于正常对照组,与自体移植组相比无差异。而患侧胫前肌最初4周内逐渐降低,然后逐渐升高,12周时达到正常水平,与自体移植组相比无差异。BDNF mRNA的表达基本与蛋白表达一致。结论ANA具有良好的组织相容性,也许可替代自体神经修复大鼠坐骨神经长距离缺损,此作用可能与上调脊髓BDNF蛋白及mRNA表达有关。

脱细胞同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损的形态学观察

目的: 研究脱细胞处理的同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损后, 再生神经的形态学变化。方法: 光镜、电镜观察移植物内再生神经的超微结构变化, 免疫组织化学技术观察再生神经中S-100蛋白表达,并对再生神经的纤维数量、髓鞘厚度等进行统计学分析。结果: 实验组和自体神经移植对照组的移植段内见有由束膜和外膜包被的大量再生神经纤维, 两组比较再生神经的纤维数量、髓鞘厚度、有髓纤维占有的面积均无显著性差异; 两组移植段神经中的S-100阳性施万细胞数、形态和排列等方面也无明显差异。结论: 脱细胞同种异体神经同自体神经一样,对缺损的坐骨神经再生具有促进作用。

脱细胞同种异体神经移植物的制备及成分分析

目的 探讨脱细胞同种异体神经移植的制备方法及其含有的成分。方法 采用组织工程化低渗脱细胞方法制备神经异体移植物 ,光电镜观察其结构特征 ;用免疫组织化学法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析神经异体移植物的成分。结果 正常的 (天然的 )周围神经经脱细胞处理后 ,清除了雪旺细胞、神经外膜和束膜的细胞 ,以及神经纤维的髓鞘和轴突 ,保存了由雪旺细胞基底膜管以及神经外膜和束膜的细胞外基质构成的三维支架结构。成分分析结果显示 ,含有LN、FN以及生长相关蛋白GAP 4 3和 6 5kDa蛋白等促进和诱导受体损伤神经再生的重要成分。结论 脱细胞异体神经移植物含有诱导和促进神经再生的相关蛋白 ,有利于受损神经的再生。

种植施万细胞的脱细胞同种异体神经移植物对大鼠坐骨神经缺损的修复作用

目的观察种植施万细胞的脱细胞同种异体神经移植物,桥接大鼠坐骨神经缺损后的神经再生。方法应用酶反复消化法与差速贴壁法体外分离培养乳鼠施万细胞;显微注射法将施万细胞种植到脱细胞同种异体神经移植物内;再应用种植施万细胞的脱细胞同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经10 mm缺损。光镜、透射电镜和扫描电镜观察再生神经的形态结构、有髓神经纤维数量、平均髓鞘厚度并进行统计学分析。结果光、电镜观察到实验组(SCs+ARSN)的施万细胞在再生神经纤维中互相连结纵行排列成类似Büngner带样细胞链,对照组(ARSN)未见到施万细胞的链状排列。实验组再生有髓神经纤维的髓鞘厚度较对照组均匀且较厚,有髓神经纤维数量和平均髓鞘厚度明显多于对照组(P<0.05)。结论种植施万细胞的脱细胞同种异体神经移植物对缺损的坐骨神经再生有更加有效的促进作用。

脱细胞同种异体神经移植物组织相容性初探

目的探讨脱细胞大鼠坐骨神经的组织相容性。方法应用低渗脱细胞方法制备脱细胞同种异体神经移植物-脱细胞大鼠坐骨神经(Acel ular Rat Sciatic Nerve,ARSN),进行组织学观察和免疫组织化学方法检测,肌肉埋植术后分别于第4d和第7d进行其组织相容性分析。结果①ARSN保存了雪旺细胞基底膜管以及神经外膜和束膜的细胞外基质结构,清除了轴突、髓鞘及雪旺细胞神经外膜和束膜的细胞结构。于肌肉埋植后第4d,ARSN神经外膜结构吸收明显,周围出现由新生肉芽组织构成的环状包绕;第7d,ARSN神经外膜结构已被吸收,周围肉芽组织趋于成熟,无淋巴细胞。③免疫组织化学法检测FN和LN可见ARSN基底膜管壁分别呈棕黄色和黄色,但较NRSN阳性略弱。结论采用低渗脱细胞方法制备的周围神经细胞外基质支架保留了对神经再生具有促进作用-FN和LN,具有良好的组织相容性,可随着时间的推移逐渐降解。

化学去细胞同种异体神经移植物储存方法的初步研究

目的 :探索犬去细胞神经的最佳储存方法。方法 :采用真空封装辐照灭菌法深低温储存犬去细胞坐骨神经12个月 ,进行细菌学检查、一般组织学观察、免疫组化染色、透射电镜观察。结果 :储存过程中不会发生细菌污染 ,储存去细胞神经的延展性及神经外膜的韧弹性保持良好 ;其基本结构、神经基底膜及许旺细胞基底板层被保留 ;仍然保持为没有细胞髓鞘及其碎片的空的神经基质管。结论 :真空封装辐照灭菌法可有效储存去细胞神经 1年。

人类去细胞同种异体神经移植物化学萃取方法的研究(英文)

背景:研究表明:应用化学消化剂处理同种异体神经可以有效地清除细胞、髓鞘而不出现宿主免疫排斥反应,但目前这种方法仅在小动物及低等哺乳类实验中取得成功,离临床应用尚有差距。目的:清除人类周围神经中的细胞和髓鞘,萃取粗大和长段的去细胞神经移植物。设计:非随机非对照实验研究。地点和对象:实验在解放军第三○四医院骨科完成,对象为急性脑外伤死亡者,男,26岁,体质量75kg,死者家属同意遗体捐献。干预:切取年轻男性遗体捐献者的长段尺神经,以TritonX-100和脱氧胆酸钠溶液按一定浓度和程序进行化学处理。萃取神经及新鲜神经行HE染色、髓鞘染色及纤维素染色,以观察细胞、髓鞘及神经基底膜;免疫组织化学染色以显示许旺细胞基底板层;行半薄切片及超薄切片透射电镜检查,观察超微结构。主要观察指标:去细胞神经的物理形状,组织学观察和超微结构。结果:去细胞神经的延展性及神经外膜的韧弹性良好。细胞和髓鞘被彻底清除,神经基底膜被保留;许旺细胞基底板层保留完好;去细胞神经为一种没有细胞髓鞘及其碎片的空的神经基质管。结论:TritonX-100及脱氧胆酸钠化学处理方法,可有效清除人类周围神经中的细胞及髓鞘,萃取粗大和长段的去细胞神经;该神经移植物保持了网管柱状组织结构,保留了许旺细胞基底板层及其主要?

异种脱细胞神经移植物修复坐骨神经缺损的实验研究

目的:观察异种脱细胞神经修复坐骨神经缺损的效果,探寻修复周围神经的新型移植物。方法:分别取家犬、新西兰大白兔臂丛神经及SD大鼠坐骨神经,对其适当切修使直径、长度相近,对获取的神经进行低渗-脱细胞处理,得到脱细胞神经移植物。32只大鼠均制造人为坐骨神经缺损,随机均分为4组,A组,家犬脱细胞神经移植修复;B组,兔脱细胞神经移植修复;C组,大鼠脱细胞神经移植修复;D组,未修复组。修复后进行神经运动和感觉功能的检测。结果:修复组大鼠坐骨神经功能恢复均显著优于未修复组,而各修复组间无明显差异。结论:异种脱细胞神经可取得与同种脱细胞神经修复周围神经缺损相似的效果。

脱细胞神经移植物对骨髓间充质干细胞的诱导分化

目的探讨脱细胞神经移植物诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为施旺细胞样细胞的可行性。方法将分离纯化的SD大鼠骨髓间充质干细胞进行体外培养扩增,行表型鉴定后,取第5代细胞,诱导组采用脱细胞神经移植物匀浆进行诱导,非诱导组加入等量无血清培养基,倒置相差显微镜观察诱导后细胞形态变化,免疫细胞化学染色检测诱导后细胞S-100,神经胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein GFAP）的表达情况。结果BMSCs表型鉴定为CD44＋、CD54＋、CD34-,免疫细胞化学染色GFAP、S-100的阳性表达率分别为为（42±4）%和（64±5）%。结果 脱细胞神经移植物可诱导骨髓间充质干细胞分化为施旺细胞样细胞。

KLF7对小鼠脱细胞异体神经支架移植后运动功能的影响

目的:探讨核转录因子KLF7对脱细胞异体神经支架(ANA)移植修复坐骨神经缺损后小鼠运动轴突再生和运动功能恢复的影响。方法:制作C57BL/6小鼠坐骨神经缺损模型,用ANA进行桥接修复,在ANA注射腺相关病毒2(AA2)或腺相关病毒2-KLF-7(AAV2-KLF7,2μl,1×10^(11)病毒颗粒)。于修复术后4周,Western Blot和免疫荧光染色检测ANA内KLF7蛋白表达,NF和S100免疫荧光染色检测ANA内轴突再生和髓鞘生成,神经示踪剂荧光金(FG)逆行标记检测运动轴突再生,坐骨神经运动功能指数(SFI)和电生理检测运动功能的恢复。结果:AAV2-KLF7注射ANA后4周,ANA内KLF7蛋白表达显著增高,NF和S100表达显著增加,FG阳性标记脊髓运动神经元的数量增加,坐骨神经功能指数增加,电生理动作电位波幅增大,潜伏期缩短(P<0.05)。结论:KLF7促进小鼠脱细胞异体神经支架修复坐骨神经缺损后运动轴突再生和髓鞘形成,有助于运动功能恢复。

ChABC联合脂肪源性干细胞对大鼠脱细胞异体神经支架移植后功能恢复的影响

目的:探讨硫酸软骨素酶ABC(chondroitinase ABC,ChABC)与脂肪源性干细胞(Adipose-derived stem cell,ADSC)联合应用对脱细胞异体神经支架移植修复坐骨神经缺损后大鼠运动和感觉功能恢复的影响。方法:成年大鼠随机分为脱细胞坐骨神经(acellular rat sciatic nerve,ARSN)组、ChABC组、ADSC组、ChABC+ADSC组;应用坐骨神经功能指数(SFI)、电生理和胫前肌湿重比检测神经再生和运动功能的恢复;脊神经节HRP逆行标记及患侧足掌皮肤触觉小体HE染色检测感觉功能的恢复。结果:与ARSN组比较,ChABC组、ADSC组和ChABC+ADSC组SFI显著增高,神经传导速度显著增高,动作电位波幅增大,胫前肌湿重比率增高,HRP阳性标记感觉神经元和触觉小体的数量增高(P<0.05)。其中ChABC+ADSC组作用显著优于单独治疗组(P<0.05)。结论:ChABC联合ADSC移植对大鼠坐骨神经缺损脱细胞异体神经支架修复后运动和感觉功能恢复的作用优于单独治疗组。

人胎盘羊膜包裹的脱细胞同种异体神经移植修复犬坐骨神经缺损

目的:探讨人胎盘羊膜包裹的脱细胞同种异体神经移植技术的可行性。方法:12只犬分为脱细胞同种异体神经移植组和人胎盘羊膜包裹的脱细胞同种异体神经移植(B)组,每组6只,均建立坐骨神经缺损动物模型。制备人胎盘羊膜和脱细胞同种异体神经。A和B组分别行同种异体神经移植术和人胎盘羊膜包裹的同种异体神经移植术。术后16周运用电生理学、髓鞘HE染色等观察2组犬移植段神经比目鱼肌诱发电位的波幅和时限、双侧坐骨神经传导速度的差异。结果:术后16周,A组犬足部及小腿红肿;B组犬神经功能恢复,小腿肌肉肌力恢复,犬右后肢能够站立。A和B组犬移植段神经连续性好,B组犬移植段神经周围炎症反应轻。B组与A组相比可见较多雪旺细胞增殖及大量再生的神经纤维。B组轴突密度和比目鱼肌诱发电位波幅、时限明显高于A组(t=10.195、4.825和6.323,P<0.001)。结论:人胎盘羊膜包裹的脱细胞同种异体神经移植术可改善神经形态学变化,提高移植神经的修复质量。

脱细胞处理的同种异体神经移植研究进展

周围神经损伤的修复是创伤外科难题之一，筛选促进神经再生理想的移植物，是解决这一难题的关键。近年来，在修复周围神经缺损研究中采用脱细胞处理的同种异体神经作为移植物，已取得促进神经再生的效果，展示了较好的应用前景。本文对脱细胞处理移植体的脱细胞处理方法，脱细胞处理后的细胞外基质所含的生物活性物质，以及这些物质的对促进神经再生的生物效应进行综述，以期为此种移植体的深入研究提供参考资料。

脱细胞异体神经移植在周围神经缺损修复中的应用研究进展

目的介绍脱细胞异体神经移植在周围神经缺损修复中的应用研究进展。方法广泛查阅国内外相关文献,进行回顾,综合分析脱细胞方法的进展及脱细胞处理后的异体神经移植效果。结果相对于物理方法,化学脱细胞方法可有效降低移植神经的免疫原性,经过脱细胞处理后的异体神经移植后,效果良好。结论目前随着脱细胞异体神经移植长度的增加,神经再生效果逐渐降低,宿主雪旺细胞可能存在迁移极限,对长段脱细胞异体神经再细胞化或使用辅助手段提高雪旺细胞迁移能力,可望解决这一问题。

利用异种脱细胞神经基质与脂肪源间充质干细胞构建周围神经移植物

由于合成的神经导管不具有促神经再生的特性,因此不能有效修复长距离神经缺损。本研究,利用异种脱细胞神经基质与神经分化的脂肪源间充质干细胞进行整合,构建了一种含神经再生特性的周围神经移植物。其中制备的异种脱细胞神经基质不但完全去除了细胞与髓鞘，并保留了生长因子和细胞外基质的天然结构，例如多孔隙率与基膜管。