脱细胞小肠黏膜下层与脱细胞心包修复大鼠腹壁缺损的对比研究

目的:观察小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)和脱细胞心包(pericardium,PC)修复大鼠腹壁缺损的效果,比较两种生物材料相容性。方法:SD大鼠40只,体重200～250g,手术造成3 cm×2 cm全层腹壁缺损,随机分为二组(n=20),分别采用相同面积的小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)和脱细胞真皮基质(acellular dermal matr,ADM)补片进行修补。术后1、2、4和8周分批取出腹壁修复材料,行动物一般情况观察、腹腔内粘连情况评价、力学强度测定及组织学观察。结果:术后动物都成活,两种材料术后8周均无疝瘘发生,缺损得到完整修复。术后各期SIS组的腹腔粘连评分明显低于PC组。术后4、8周,SIS组力学强度强于PC组,有统计学意义;组织学观察两组未见明显免疫排斥反应,SIS组的组织再生和重塑、血管化优于PC组;术后炎症反应两组无明显差异。结论:SIS和PC均能修复大鼠腹壁全层缺损,SIS在生物相容性方面优于PC。

脱细胞牛心包构建引导骨再生膜的初步研究

目的制备具有良好生物相容性和适宜降解吸收时间的引导骨组织再生(guidedboneregeneration,GBR)膜材料。方法采用0.25%Trypsin+0.5%TritonX-100酶联脱细胞法对新鲜牛心包进行脱细胞处理,将脱细胞牛心包(A组)、甘油保存脱细胞牛心包(B组)、碳化二亚胺[1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimidehy-drochloride,EDAC]交联脱细胞牛心包(C组)、甘油保存EDAC交联脱细胞牛心包(D组)4种膜材料分别植入38只SD大鼠背部皮下,不植入材料为E组。于2、4、8和16周分别处死大鼠7、12、12和7只,观察周围组织反应及材料的降解吸收情况。结果4种材料植入动物体内均有不同程度的炎性反应和纤维囊膜形成。术后4周,A组和C组的炎性反应轻微,纤维包膜变薄。A组膜材料吸收替代时间为8周左右,C组吸收替代时间为16周左右;16周时B组和D组材料仍有纤维包膜。结论EDAC交联脱细胞牛心包具有良好的生物相容性和理想的降解性能,在动物体内能顺利被自体组织替代。

京尼平交联的脱细胞牛心包生物支架材料的实验研究

目的:初步探讨新型生物交联剂京尼平对脱细胞牛心包基质作为支架材料的影响及意义,为心肌组织工程心脏补片的构建提供较理想的生物支架材料。方法:实验分为三组,A组(25块)为新鲜未脱牛心包组织,B组(25块)为脱细胞牛心包组织,C组(25块)为京尼平交联的脱细胞牛心包组织。采用光学显微镜、扫描电镜观察脱细胞效果和胶原纤维、弹力纤维改变;以组织厚度、热皱缩温度和抗拉力测试观察基质的物理性能变化。结果:光学显微镜、扫描电镜观察显示去污剂-酶消化法去细胞百分率达98.63%,能够有效脱除细胞,完整保留牛心包组织的胶原纤维和弹力纤维;组织厚度测试结果为,A组(3.8±1.0)mm,B组(3.8±1.2)mm,C组(4.0±1.0)mm;组织热皱缩温度测定结果为,A组(78.50±0.50)℃,B组(67.90±0.60)℃,C组(85.90±0.40)℃;组织抗拉力测试结果显示,经交联剂京尼平处理后C组最大载荷、最大应力、弹性模量、最大应变均高于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:经过新型生物交联剂京尼平交联的脱细胞牛心包最大载荷增加显著,可以弥补脱细胞牛心包力学性能的减少,作为较理想的心肌组织工程支架材料。

脱细胞牛心包补片在结膜囊成形术中的临床应用

目的探讨脱细胞牛心包组织补片在结膜囊成形术中的临床效果。方法选取2010年6月至2015年5月我院收治的32例（32眼）义眼台植入术后结膜囊狭窄患者,应用脱细胞牛心包进行结膜囊成形术。所有患者局部浸润麻醉后分离去除结膜瘢痕组织,使用脱细胞牛心包组织补片修补结膜缺损区形成结膜囊,放入眼模加压包扎1周。随访观察6~12个月,平均10个月。结果 32例（32眼）均获得良好效果。术后1周植片可见上皮生长,术后1个月植片色泽红润,术后3个月植片呈正常结膜色泽外观,无感染、坏死或排斥反应等发生。配戴义眼片后患眼外形良好。结论采用脱细胞牛心包生物补片进行结膜囊成形术取材方便,手术安全,疗效可靠。

以脱细胞牛心包膜为支架材料构建组织工程化表皮的初步研究

目的:探讨脱细胞牛心包膜(ABP)作为组织工程化表皮支架材料的可行性。方法:体外分离培养SD大鼠皮肤KC,将KC以1×106个/cm2接种于ABP上,用光镜、扫描电镜观察细胞在ABP上的粘附、增殖情况。结果:KC在ABP上种植5 d后,光镜观察可见KC在ABP上单层生长。扫描电镜观察见KC粘附于ABP表面,呈大小不等的集落。结论:ABP可作为组织工程化表皮的支架材料。

脱细胞牛心包膜材料与胶原膜引导骨再生的对照研究

目的 比较碳化二亚胺[1-ethyl-3（3-diaminopropyol）-carbodiimide，EDAC]交联脱细胞牛心包（acellular bovine pericardium，ABP）与胶原膜引导骨再生的作用和膜材料植入动物体内的转归。方法 健康雄性成年新西兰白兔24只，体重2．6～3．5kg，平均3．1kg。制备兔双侧下颌体7mm×7mm×5mm骨缺损模型，一侧骨缺损覆盖EDAC交联ABP（EDAC交联ABP组），另一侧覆盖胶原膜（胶原膜组）。术后4、8、16及24周各处死6只动物行大体、组织学观察及图像分析检测新生骨面积百分比及膜材料吸收替代百分比。结果 大体观察：术后4、8周EDAC交联ABP组膜材料完整，与缺损区正常骨粘连紧密；胶原膜组膜材料形态消失，骨缺损区轮廓欠清晰。术后16、24周EDAC交联ABP组骨缺损区创面平坦；而胶原膜组凹凸不平。组织学观察：术后4、8周EDAC交联ABP组胶原纤维排列规则，缺损区中央大量新生骨小梁；胶原膜组胶原纤维断裂，缺损区见大量新生骨小梁。术后16、24周，EDAc交联ABP组骨缺损区形成完整的骨桥，而胶原膜组骨缺损内局部长入纤维结缔组织。术后4、8周，两组新生骨面积百分比相近，16周EDAC交联ABP组为81．99％±3．92％，胶原膜组为76．35％±4．29％，组间差异有统计学意义（P〈0．05）。术后4、8、16及24周，EDAC交联ABP组膜材料平均吸收替代百分比分别为16．57％、27．94％、65．61％和85．72％；胶原膜组4周降解超过50％，8周已完全降解吸收。结论 EDAC交联脱细胞牛心包膜材料引导成骨的效率优于胶原膜。

PC交联脱细胞牛心包膜的力学性能、稳定性和血液相容性

测定了原花青素(PC)交联的脱细胞牛心包膜(dbpECM)的力学性能、稳定性和血液相容性.实验结果显示,2.5 mg/mL原花青素交联能将拉伸强度从29.1 MPa提高到51.3 MPa,并保持弹性模量基本不变,而抗胶原酶降解能力与戊二醛相当;PC-dbpECM浸泡于D-Hanks溶液中,仅过量未交联原花青素在一周内释放,而交联的PC在PC-dbpECM中保持稳定.1 mg/mLPC即可基本抑制体外钙化.PC或GA交联的dbpECM都有较好的血液相容性,但PC交联明显优于GA.2.5 mg/mL PC交联的dbpECM血小板的粘附率(7.8%)显著低于未交联组(26.1%)和GA交联组(36.6%),表明PC-dbpECM具有较好的抗血栓形成能力.结果表明PC-dbpECM具有良好的力学性能,稳定性和血液相容性,有可能成为制备人工心脏瓣膜的优良材料.

脱细胞牛心包补片移植修复义眼台暴露的临床疗效分析

目的：探讨脱细胞牛心包补片移植修复义眼台暴露的临床效果。方法：对12例羟基磷灰石义眼台植入术后发生暴露的患者进行修复。将脱细胞牛心包补片覆盖于表面，修复缺损区，术后随访观察6～24月。结果：术后未出现结膜裂开及义眼台暴露，义眼活动良好。结论：脱细胞牛心包补片移植是修复义眼台暴露的有效方法。避免了应用异体组织修补排异反应的发生，对治疗该并发症具有一定的临床意义。

脱细胞猪心包膜在引导骨组织再生术中的屏障作用

目的 :在兔股骨骨缺损处行引导骨组织再生术,观察脱细胞猪心包膜的存留时间及引导骨再生的效果。方法 :自行制取脱细胞猪心包膜(acellular porcine pericardium,APP)。利用高、低渗Na Cl溶液将新鲜的猪心包交替浸泡后,胰酶+EDTA消化,Triton X-100漂洗,最后以戊二醛交联处理。选取24只新西兰大白兔,在双侧股骨远端设置8 mm×8 mm×5 mm骨缺损区,采用随机方法 ,一侧骨缺损区覆盖脱细胞猪心包膜(实验组),另一骨缺损区不盖膜(对照组)。分别于术后4、8和12周进行整体观察、X线片检查、组织学检查和骨密度测量。采用SPSS18.0软件包对数据进行统计学分析。结果:术后创口愈合良好,未发生感染等相关并发症;整体观察有纤维包囊覆盖脱细胞猪心包膜表面;实验组骨密度值较对照组显著升高(P<0.05);组织学观察见实验组成骨效果好于对照组。结论:利用脱细胞猪心包膜行引导骨组织再生术,可达到较理想的屏障作用,膜存留时间满足成骨需求。

天然衍生脱细胞牛心包复合BMP-2转染的BMSCs引导骨组织再生的体外实验研究

目的:研究天然衍生脱细胞牛心包复合BMP-2转染BMSCs引导骨组织再生的可行性和有效性。方法:天然衍生脱细胞牛心包体外复合BMP-2转染BMSCs,SEM评估细胞生长与增殖,MTT法检测牛心包对转染细胞的毒性,ELISA检测BMP-2含量,结晶紫染色法测定BMSCs细胞粘附能力,ALP活性实验检测转染BMSCs成骨性能。结果:SEM发现天然衍生脱细胞牛心包复合BMP-2基因转染的BMSCs后,细胞生长并增殖良好;各组细胞的存活率没有显著性差异;天然衍生脱细胞牛心包增强了BMP-2转染BMSCs的细胞粘附能力和成骨细胞转化能力。结论:天然衍生脱细胞牛心包复合BMP-2基因转染BMSCs后,具有良好的生物和细胞相容性,有望成为一种优良的天然GBR膜材料。

脱细胞牛心包补片修复义眼台暴露的临床应用

目的：探讨脱细胞牛心包补片修复义眼台暴露的临床效果。方法：对23例羟基磷灰石义眼台置入术后发生义眼台暴露的患者进行义眼台修复，将脱细胞牛心包补片覆盖于表面，修补缺损区，术后随诊观察6～24月。结果：脱细胞牛心包补片修复术后未再出现结膜裂开及义眼台暴露，义眼活动良好。结论：脱细胞牛心包补片移植是修复义眼台暴露的有效方法。

脱细胞牛心包补片在眼球萎缩整形中的应用

目的:探讨脱细胞牛心包补片在眼球萎缩整形中的临床效果。方法:轻中度眼球萎缩34例(34眼),术中将萎缩眼球的角膜上皮层和角膜缘上皮组织彻底清除,将直径20mm补片覆盖于角巩膜,上方球结膜与眼球筋膜同时向下滑行,覆盖整个补片并固定于下方角膜缘,与下方眼球筋膜及结膜缝合。术后1个月定做义眼片佩戴,随访6~24个月,观察其效果。结果:34例轻中度眼球萎缩患者,术后结膜筋膜均覆盖良好,无角膜暴露,佩戴义眼片后无明显异物感及刺激症状,双侧睑裂对称,外观改善良好。结论:轻中度眼球萎缩采用脱细胞牛心包补片治疗,术后角膜不易暴露,佩戴个性化义眼片后无明显异物感及刺激症状。

脱细胞基质法治疗尿道狭窄的临床研究

目的观察脱细胞基质法治疗尿道狭窄的的临床疗效,为临床手术治疗尿道狭窄提供新的思路。方法40例尿道狭窄患者分为A、B两组各20例,均行脱细胞基质修复尿道狭窄术,A组使用小肠粘膜脱细胞基质,B组使用牛心包脱细胞基质。术后6个月、12个月定时随访,统计术后并发症发生情况,术前及各随访时间点患者平均最大尿流率、膀胱残余尿量及影像学图片。结果术后6个月、12个月,A组的平均最大尿流速率高于术前、膀胱残余尿量低于术前;与术后6个月比较,术后12个月的平均最大尿流速率降低、膀胱残余尿量升高;差异均有统计学意义(P<0.05)。术后6个月、12个月,B组平均最大尿流速率均低于A组、膀胱残余尿量均高于A组,差异均有统计学意义(P<0.05)。术后2组并发症发生率差异无统计学意义(P>0.05)。膀胱镜尿道检查显示A组术后6个月植入的脱细胞基质补片剩余存在,与周围组织间限清楚,尿道畅通;术后12个月补片表面出现絮状物,絮状物占位尿道。B组术后6个月尿道狭窄再次形成。结论脱细胞基质法可以用于治疗尿道狭窄,小肠粘膜脱细胞基质疗效优于牛心包脱细胞基质,术后应定期随访防止后期再次出现狭窄。

生物交联剂京尼平交联牛心包生物支架材料的性能

脱细胞牛心包膜因其具有优良特性而成为组织工程生物瓣膜中理想的支架材料。采用冻融+表面活性剂法对牛心包组织进行脱细胞处理后,用戊二醛或京尼平对其进行表面修饰固定。通过HE染色及扫描电镜观察脱细胞效果,并对交联组织进行厚度检测、含水量和接触角测试、力学检测、交联指数和差示扫描量热(DSC)测定、体外降解、溶血试验以及细胞毒性试验,判断两种交联方法对脱细胞牛心包基质的影响,从而选择出交联脱细胞组织的最好方法。结果显示,冻融+表面活性剂法脱除细胞彻底,戊二醛或京尼平交联后组织厚度明显增加分别约20%、25%,亲水性良好,力学特性稳定,交联指数都高达90%,且28 d降解率分别为5%和3%,交联后组织稳定性高。但京尼平组溶血率(0.37%)远小于戊二醛组溶血率(13.77%),且细胞毒性很低。作为瓣膜组织工程支架材料,京尼平交联脱细胞牛心包膜比戊二醛交联效果具有更好生物相容性,交联效果好,是较好的交联方法。

不同方法处理的牛心包生物相容性和钙化结果分析

目的观察脱细胞处理对牛心包体内生物相容性及钙化的影响并与戊二醛处理的牛心包进行比较;材料和方法对新鲜牛心包随机分为三组,A、戊二醛处理组:新鲜牛心包采用0.5%的戊二醛进行处理;B、新鲜牛心包组:新鲜牛心包保存于四联抗生素液中;C、脱细胞组:新鲜牛心包酶-去污剂联合脱细胞后保存于四联抗生素液中。上述处理后的牛心包经细菌培养,显示无细菌生长后,植入雄性昆明小鼠皮下三周观察炎性浸润及钙化情况。采用von Kossa钙染色检查进行定性分析;原子吸收光谱检查进行钙含量定量分析。同时体外对三组牛心包进行力学和热皱缩温度进行测试。结果三组间炎性浸润程度明显不同,0.5%的戊二醛处理组钙化程度明显增高,每克干重牛心包平均含钙量71.2mg,较其他两组有明显差异(P<0.001),新鲜牛心包组(平均2.12mg/g干重)和脱细胞组(1.41mg/g干重)间钙化程度方面亦有显著统计学意义(P<0.001)。组织学钙染色光镜下检查显示三组间黑色颗粒有明显差异,支持三组间钙含量定量结果的差异。戊二醛处理组的力学性能与优于新鲜组和脱细胞处理组,热皱缩温度高于新鲜组和脱细胞处理组。结论新鲜牛心包脱细胞处理后钙化显著降低,免疫源性降低,有很好的生物相容性。

牛心包衍生材料引导骨再生的实验研究

目的:评价碳化二亚胺(EDAC)交联处理的脱细胞牛心包的引导成骨作用。方法:在新西兰白兔双侧下颌体各制备7 mm×7 mm大小的骨缺损,一侧骨缺损覆盖EDAC交联脱细胞牛心包,另一侧不覆膜作为对照。术后4周、8周、12周、16周行X线、DXA测量骨密度及组织学观察骨缺损修复情况。结果:术后各组新西兰白兔伤口愈合良好;各期EDAC交联脱细胞牛心包组骨缺损区的BMD均高于同期对照组,有统计学意义(P<0.05);DAC交联脱细胞牛心包组骨缺损修复速度快于对照组。结论:EDAC交联脱细胞牛心包有良好的引导骨组织再生作用。

牛心包衍生材料引导成骨效应的X射线和骨密度评估

目的:应用X射线和骨密度值评价碳化二亚胺交联处理的脱细胞牛心包的引导成骨作用。方法:实验于2004-09/2005-01在中南大学湘雅二医院中心实验室及湘雅二医院动物部完成。健康雄性成年新西兰白兔20只,在新西兰白兔双侧下颌体各制备7mm×7mm大小的骨缺损,一侧骨缺损上方紧贴骨面覆盖碳化二亚胺交联脱细胞牛心包,作为实验组;另一侧不作处理,作为对照组。每组又分4,8,12,16周4个时间点,每个时间点为5只。术后4,8,12,16周行X射线观察和双能X射线吸收仪测量骨密度,评价骨缺损修复情况。结果:纳入新西兰兔20只,均进入结果分析。①术后骨缺损区大体观察:术后12,16周时实验组骨缺损区创面平坦;对照组骨缺损区凸凹不平,中央有结缔组织长入,16周时仍有直径2mm以上的缺损,呈纤维性愈合。②两组兔术后骨缺损区X射线观察:自8周起,实验组骨缺损区密度均高于对照组。③兔骨密度变化:术后4,8,12,16周实验组骨密度均高于对照组,差异均有显著性意义[分别为(0.337±0.035),(0.304±0.027)g/cm2;(0.373±0.022),(0.354±0.025)g/cm2;(0.365±0.032),(0.341±0.031)g/cm2;(0.347±0.023),(0.311±0.028)g/cm2,P<0.05]。结论:X射线和骨密度评估结果均显示碳化二亚胺交联脱细胞牛心包有良好的引导骨组织再生作用。

多巴胺配位银离子共交联的脱细胞猪心包力学及生物学特性

目的:多巴胺、银离子共交联脱细胞猪心包(DA/Ag-PP)力学及生物相容性研究。方法:采用0.2 g/ml的多巴胺和12μg/ml银离子共同交联脱细胞的猪心包,并对比交联后的支架与原始脱细胞猪心包和戊二醛交联的猪心包之间的力学性能、生物学相容性等。通过单轴拉伸实验、电镜扫描、水接触角测量、细胞毒性实验、皮下包埋等实验,从各个角度综合评估多巴胺和银离子共交联的猪心包的各项性能,采用单因素方差分析。结果:单轴拉伸实验显示共交联后拉伸强度DA/Ag-PP组[(13.560±1.539)MPa,P<0.01]显著高于DPP组[(2.301±0.588)MPa],稍高于GPP组[(10.490±0.640)MPa,P<0.05]。此外,DA/Ag-PP组[(31.230±5.316)MPa]杨氏模量较DPP组[(8.173±1.095)MPa,P<0.01],但稍低于GPP组[(43.100±9.161)MPa,P>0.05]。扫描显微镜和院子里显微镜扫描显示DA/Ag-PP表面更粗糙。水接触角实验提示DA/Ag-PP[(46.230±0.153)°]水接触角较DPP组[(60.400±5.478)°,P<0.01]更小,但与GPP组[(48.470±1.159)°,P>0.05]差异无统计学意义。Raw264.7和HUVECs细胞毒性实验均显示DA/Ag-PP细胞毒性较DPP组稍差,但仍较戊二醛修饰组具有良好的生物安全性。在大鼠皮下包埋模型中DA/Ag-PP组表现出优异的再细胞化能力。结论:多巴胺和银离子共交联的脱细胞猪心包具有良好的力学性能和生物相容性。支架皮下包埋后,再细胞化水平较高,具有良好的重塑基础。

以牛心包为来源的天然衍生引导骨组织再生膜制备方法的实验研究

目的:探索天然牛心包脱细胞和交联处理的理想方法。方法:用胰酶去垢剂法(I)、胰酶核酸酶法(II)、胰酶去垢剂+核酸酶联合法(III)、冻融去污剂法(IV)、冻融核酸酶法(V)、冻融去污剂+核酸酶联合法(VI)进行脱细胞和交联处理,采用光镜和SEM、细胞毒性实验、机械性能测定、细胞趋化性实验评估处理效果,筛选出理想的脱细胞和交联方法。结果:冻融去污剂+核酸酶联合法是理想的脱细胞方法。京尼平交联法是理想的交联方法。结论:冻融去污剂+核酸酶联合法制备的脱细胞牛心包再采用京尼平交联法可制备出理想的GBR膜材料。

纳米心包片的研究进展

心血管疾病已成为危害人类健康的主要疾病,尤其是先天性心血管畸形、心血管缺损性疾病。目前最常用的外科治疗手段为补片修补术。同种或异种、自体或人造织物补片、合成型或生物型等材料都在心血管外科手术中得到了广泛的应用。