利用c-kit^+骨髓间充质干细胞与心脏脱细胞骨架共培育心肌组织

背景:研究发现c-kit阳性骨髓间充质干细胞可特异分化为心肌细胞,可能成为理想的种子细胞。目的:验证利用c-kit+骨髓间充质干细胞及心脏脱细胞骨架培育心肌组织的可行性。方法:取成年大鼠心脏脱细胞后备用。取大鼠骨髓间充质干细胞,培养至第8代后行c-kit富集,采用5μmol/L的5氮杂胞苷诱导2周后行二氢吡啶受体α2富集,然后继续培养行心肌分化鉴定或种植于心脏脱细胞骨架内行心肌组织培养。6周后,利用心肌细胞特异性蛋白表达及动作电位鉴定心肌细胞分化,利用免疫荧光染色分析新生心肌组织结构。结果与结论:第2次富集6周后,约60%的骨髓间充质干细胞表达心肌肌钙蛋白T、GATA结合蛋白4、连接蛋白43,电生理分析显示这些细胞可产生心肌细胞样动作电位,证实c-kit+骨髓间充质干细胞可特异分化为心肌细胞,种植于脱细胞心脏骨架后可形成排列有序的心肌组织。

心脏脱细胞基质在心肌组织工程中的应用

近年来,心脏脱细胞基质材料成为心肌组织工程领域炙手可热的明星,其低致敏性和最接近天然的三维结构显示了其在修复、替代坏死心肌和器官再造方面的广阔应用前景。本篇综述着眼于心脏脱细胞基质在心肌梗死治疗以及全器官再造等方面的研究,从心脏脱细胞基质的制备、检测和应用方面进行了系统回顾,并探讨该材料今后的应用前景与方向。

心脏脱细胞支架的制备及其生物相容性

目的：优化心脏脱细胞支架的制备方法，评价所制备的脱细胞支架的基本生物学特征。方法：联合应用十二烷基硫酸钠（SDS）和聚乙二醇辛基苯基醚（TritonX-100）对大鼠心行逆行主动脉灌流制备心脏脱细胞支架。同时，将间充质干细胞（MSCs）接种到支架上构建细胞支架复合体，采用H—E染色及扫描电镜分别对制备支架及复合体进行评价。结果：心脏脱细胞支架大体呈半透明囊状。组织学染色及扫描电镜观察示支架呈多孔网状或束状结构，未见细胞核残留。荧光显微镜观察示MSCs沿支架纤维黏附生长，未见明显坏死细胞。结论：本研究运用灌流法成功制备脱细胞彻底且细胞外基质保留较完整的心脏脱细胞支架，既拥有天然三维结构且具有良好的生物相容性。

脱白细胞温血心脏停搏液对心脏瓣膜置换术患者心肌的保护作用

目的研究脱白细胞温血心脏停博液微流量连续灌注对体外循环下瓣膜置换术患者心肌的保护效果。方法拟行心脏瓣膜置换术患者4JD例,随机分为对照组和试验组,每组20例。对照组:采用温血心脏停博液微流量连续顺行灌注;试验组:采用脱白细胞的温血心脏停博液微流量连续顺行灌注。采集术中不同时间点静脉血标本,检测血浆类脂肪酸结合蛋白、丙二醛及右心房心肌内髓过氧化物酶水平。结果试验组主动脉开放30、60min血浆类脂肪酸结合蛋白、丙二醛均较主动脉阻断前升高,但均低于对照组(P<0.05)。试验组心肌内髓过氧化物酶在主动脉开放后与阻断前相比差异无统计学意义(P>0.05),而对照组与阻断前相比增加(P<0.05),两组之间比较,差异有统计学意义。结论脱白细胞温血心脏停博液微流量连续灌注,可有效减轻心肌缺血再灌注损伤。

基于心脏全器官脱细胞基质的组织工程支架材料制备与生物学评价

目的探讨一种心脏全器官脱细胞方法,并对制备的心脏脱细胞基质支架进行检测与评价。方法通过联合使用胰蛋白酶、Triton X-100等洗涤剂,对成年SD大鼠离体心脏进行主动脉逆行灌流脱细胞处理。对制备的心脏脱细胞基质支架进行大体观察、甲苯胺蓝灌流染色、HE染色、扫描电镜观察、阿利新蓝染色、细胞外基质组分免疫组织化学染色等观察。结果成功制备心脏全器官脱细胞基质支架材料,其保留了原心脏的大体形态;HE染色、甲苯胺蓝染色及扫描电镜观察显示其保留了较好的脉管结构与超微空间构象;阿利新蓝染色及免疫组织化学染色结果显示,其主要的细胞外基质成分,包括Ⅰ型胶原、糖氨聚糖、纤连蛋白、层粘连蛋白保留良好。结论制备的大鼠心脏脱细胞基质支架保留了心脏原有的结构与细胞外基质成分,有望作为全器官心脏体外再造的良好组织工程支架材料。

复合心肌补片对小鼠梗死心肌的修复效果观察

目的探讨以人心脏瓣膜组织脱细胞基质作为支架的复合骨髓c-kit+干细胞心肌补片(以下称复合心肌补片)对小鼠梗死心肌的修复效果。方法制作复合心肌补片。采用结扎左冠状动脉前降支法制作30只心肌梗死小鼠模型并随机分为复合补片组、补片组及对照组各10只。造模成功3 d时各组小鼠予异氟烷麻醉、固定,开胸暴露心脏。复合补片组将复合心肌补片移植于梗死心肌周边;补片组采用同样方法将脱细胞基质移植于梗死心肌周边;对照组不采取修复措施。采用心脏超声检测移植4周时三组心移植左室射血分数、左室短轴缩短率、心梗面积。结果移植4周时,复合补片组左室射血分数、左室短轴缩短率明显高于补片组及对照组,心梗面积明显小于补片组及对照组,P均<0.05。结论复合心肌补片用于修复梗死心肌效果满意。