脱细胞软骨生物支架材料的生物学特性

目的探讨脱细胞软骨生物支架材料(ACM)在细胞毒性、溶血试验、急性全身毒性等方面的生物学特性;方法①ACM的制备:猪膝关节软骨冻干加工为粉末,胰酶消化,曲拉通洗脱,蒸馏水洗净冻干,紫外线照射(UVI)后成型;②细胞毒性测定:材料浸提液培养细胞进行细胞形态大体观察,MTT法观察细胞活性;③急性全身毒性反应:材料浸提液注射入SD大鼠腹腔观察材料对动物表现及体重变化的影响;④溶血试验:材料浸提液与稀释动物鲜血混合观察红细胞溶解情况,492nm下检测OD值计算相对溶血率;结果①细胞毒性试验:24h、48h、72h各时间段内三组细胞OD值两两比较(>0.05),无显著差异,ACM细胞毒性为0级;②动物急性毒性实验:Ⅰ生物材料处理组和Ⅱ生理盐水处理组对动物体重影响没有差异(>0.05),Ⅰ生物材料处理组和Ⅲ苯酚处理组对动物体重有显著差异(<0.05);③溶血试验:材料相对溶血率为2.92%,低于5%的标准,无明显溶血现象;结论ACM在细胞毒性、溶血实验、动物急性毒性反应方面符合软骨组织工程中对于支架材料的要求,提示支架材料有良好的生物相容性和安全性。

低渗冻融联合生物酶法制备组织工程化静脉瓣脱细胞支架

目的：采用低渗冻融联合生物酶法制备组织工程化静脉瓣脱细胞支架,并与先前方法制备的静脉瓣脱细胞支架比较,以期获得一种性能较好的带瓣静脉脱细胞支架材料.方法：手术获得Beagle犬带瓣静脉分为4组,对照组、脱氧胆酸钠组、Triton组和冻融＋生物酶组.处理后对各组标本行H-E染色,透射电镜观察,DAPI荧光染色,细胞相容性测试等观察.结果：3种脱细胞方法均能彻底去除细胞,DAPI荧光检测显示各组支架材料均无DNA成分残留;H-E染色及透射电镜显示,冻融＋生物酶组胶原纤维排列整齐,未见明显的胶原纤维结构改变,其他2组可见胶原纤维断裂及结构紊乱现象;与其他2组脱细胞支架材料相比,冻融＋生物酶组的组织细胞相容性好,可见内皮祖细胞在支架材料上生长良好.结论：结合渗透压改变的反复冻融加生物酶法,既可以较彻底除去带瓣膜静脉细胞成分,又保留了较完整的细胞外基质结构,具有良好的组织和细胞相容性,是较理想的带瓣膜静脉脱细胞支架制备方法.

兔皮肤成纤维细胞在脱细胞真皮支架材料表面生长的研究

为了研究兔皮肤成纤维细胞在脱细胞真皮支架材料表面的生长活性,体外分离、扩增兔皮肤成纤维细胞,鉴定后作为种子细胞接种于脱细胞真皮支架材料上,对细胞在材料上的黏附率及其生长活力进行检测。利用DAPI荧光染色及SEM对细胞在材料上生长情况进行观察,对脱细胞真皮支架材料作为细胞载体的可行性以及用于移植的可行性进行了探讨。结果显示,可分离出单一的成纤维细胞,细胞在材料上的黏附率为96.78%,与在孔板内生长的细胞黏附率无显著性差异(P>0.05);细胞在材料上和在孔板上的生长趋势相似,但是在材料上生长活力较在孔板上小(P<0.01);DAPI荧光染色观察发现,材料上生长的细胞核形完整,且随着培养时间的增加,细胞数量增加;SEM观察结果显示,细胞在材料上能紧密黏附,培养5～10d,细胞在材料上能融合成细胞膜片。提示此脱细胞真皮支架材料可作为成纤维细胞培养载体和移植材料。

ACM复合rBMSC修复兔股骨内髁关节软骨缺损的价值

目的探讨脱细胞软骨支架材料(ACM)复合兔骨髓间充质干细胞(r BMSC)修复兔股骨内髁关节软骨缺损的价值。方法选取48只健康新西兰白兔(3月龄),随机分为3组,ACM-BMSC组,ACM组,空白对照组。各个组再分为6 w和12 w 2个时间段。6 w、12 w时观察修复组织,进行Wakitani组织学评分。结果各个关节腔没有看到感染积液,没有发生关节腔粘连情况。手术后6 w,ACM-BMSC组修复组织多数和周围组织接合较好,ACM组修复组织厚度约2/3,没有看到潮线,空白对照组缺损区没有明显的类软骨组织修复。手术后12 w,ACM-BMSC组修复组织多数是透明软骨样组织,ACM组修复组织表面欠光滑,空白对照组能够看到少量肉芽组织修复。在同一时间段内,不同组间细胞形态、基质染色、表面平整、软骨厚度、接合、总分比较,ACM-BMSC组和空白对照组、ACM组和空白对照组,差异显著(P<0.05);ACM-BMSC组和ACM组无显著差异(P>0.05)。结论经传代后复合脱细胞关节软骨支架材料可以较好地修复兔关节软骨缺损,修复组织中细胞形状、分布和排列与正常软骨组织接近,是关节软骨缺损修复的可选方法。