从脱细胞猪真皮基质材料的边角料中提取Ⅰ型胶原

以脱细胞猪真皮基质材料的边角料为原料,使用酸-酶结合法提取I型胶原,并用SDS-PAGE电泳、DSC、FI-IR、SEM、AFM对Ⅰ型胶原进行了结构表征。研究表明:组织学观察发现,脱细胞猪真皮基质材料中不存在细胞和细胞碎片,且胶原纤维得到充分的分离和松散,非纤维成分大部分被水解,有利于Ⅰ型胶原的提取。提取得到的I型胶原红外特征峰明显,分子质量大且分布窄,变性温度为69.4℃;SEM显示胶原呈现孔隙均匀的三维网状结构;AFM观察到胶原大部分排列紧密,相互编织缠绕,形成无规线团,小部分胶原直径较粗,且以线性分布,说明胶原已经发生自聚集现象。综合检测分析结果,可以认为所提取制备得到的确为具有天然三股螺旋结构的I型胶原。

京尼平交联脱细胞猪真皮基质材料的研究

分别采用0、2%、4%、8%、16%(质量分数)的京尼平(GP)交联脱细胞猪真皮基质(pADM),检测交联后材料(GP-pADM)的基本性能。研究结果表明,随着交联剂GP用量的增加,材料的收缩温度逐渐提高,抗张强度降低;电镜扫描图显示交联后材料的孔隙有缩小的趋势,并导致了吸附水率、吸湿率和溶胀率的逐渐下降;红外图谱表明交联后材料中含有共轭双键;细胞毒性试验显示,GP-pADM细胞毒性为0级,急性经口毒性实验未见明显急性毒性。

含银脱细胞猪真皮基质材料的研究

采取浸渍冻干的方法将硝酸银(AgNO3)与脱细胞猪真皮基质(pADM)复合,制备出含银的脱细胞猪真皮材料。测定了材料的力学性能和吸湿性,采用抑菌圈法表征了材料的抗菌性能,通过细胞培养和经口急毒性实验考察了材料的生物相容性。研究结果表明,含银脱细胞猪真皮材料力学性能和吸湿性都非常好,对大肠杆菌和金色葡萄球菌均具有明显的抗菌作用,细胞毒性为0级,无明显经口急性毒性。证明它是一种抗菌效果明显且无细胞毒性的材料,适宜作为创伤敷料在临床上推广。

脱细胞猪真皮基质材料改性

分别研究了植物多酚、戊二醛和环氧化合物对脱细胞真皮基质材料的改性性能,对改性后的材料进行收缩温度、力学性能、自由氨基等方面的表征。结果表明:植物多酚对脱细胞真皮基质的抗撕裂能力和硬度都有很大的提高,并且有一定的增厚性;戊二醛改性后脱细胞真皮基质的收缩温度大大提高,但是抗撕裂能力减弱;环氧化合物改性后脱细胞真皮基质的拉伸强度大幅度提高,收缩温度也相应提高。

双氧水-氢氧化钠结合对脱细胞猪真皮基质材料高度纯化的作用

以可溯源性猪皮为原料,采用特殊的化学、物理及生化方法对猪皮进行高度纯化处理,通过观察实验中皮块厚度、面积、废液中胶原蛋白与非胶原蛋白含量及组织学形貌变化,得出脱细胞猪真皮基质碱膨胀的最佳方案为双氧水4%-氢氧化钠6%。并制备了高纯度脱细胞猪真皮基质,检测其抗张强度为7.2 MPa,吸湿性能好,不含重金属,无经口急毒,细胞除去干净且细胞毒性1级,为今后脱细胞猪真皮基质在生物医用材料领域的应用奠定基础。

脱细胞真皮基质和带蒂颊脂垫瓣修复颊部软组织缺损的对比研究

目的比较脱细胞真皮基质(ADM)和带蒂颊脂垫瓣(PBFPF)修复颊部软组织缺损的效果。方法选取我院84例行颊黏膜缺损修复的患者,随机分为ADM组和PBFPF组,每组42例。ADM组患者采用ADM修复,PBFPF组患者使用PBFPF修复。比较2组患者修复时间、经口进食时间、住院时间。于术前、术后1周、术后1个月、术后6个月测量并比较患者的最大开口度,记录患者的修复有效率及并发症发生情况。观察患者术后口腔颌面部功能(吞咽功能、语言功能、咀嚼功能)改善情况。结果2组患者修复时间、经口进食时间、住院时间、并发症总发生率、术后吞咽功能、术后语言功能比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。ADM组与PBFPF组患者最大开口度组间比较、组间与时点的交互效应差异无统计学意义(P>0.05),时点的比较差异有统计学意义(P<0.05)。PBFPF组中缺损面积为>13~20 cm2的患者修复有效率高于ADM组(P<0.05)。PBFPF组患者的咀嚼功能优于ADM组(P<0.05)。结论PBFPF及ADM用于口腔黏膜组织缺损的修复各有优势,对于黏膜缺损面积较大(>13~20 cm2)的患者,PBFPF的修复效果更好。

脱细胞猪角膜基质深板层移植治疗感染性角膜炎的疗效观察

目的:评价脱细胞猪角膜基质深板层移植治疗感染性角膜炎的有效性、安全性。方法:前瞻性研究。收集2017-02/2020-10在我院经药物保守治疗无效的感染性角膜炎患者17例17眼,应用脱细胞猪角膜基质进行深板层角膜移植手术。术后随访6 mo,观察BCVA、角膜上皮愈合情况、角膜透明情况,并记录有无感染复发以及植片排斥。结果:所有患者中均顺利完成深板层角膜移植手术,均未发生术中并发症,无失访病例,术后角膜感染均得到有效控制。术后BCVA均较术前改善(P<0.05)。17眼中16眼术后1 mo上皮完全覆盖角膜植片,仅1眼上皮未完全愈合,为病毒性角膜炎的反复发作。术后1.5 mo所有患者上皮均完全愈合。术后1 mo角膜水肿开始改善,其中1眼角膜植片轻度混浊,16眼中重度混浊;术后3-6 mo角膜透明度稳定,至术后6 mo时4眼完全透明,6眼轻度混浊,6眼中度混浊,1眼重度混浊。随访过程中,无感染复发,有1眼发生眼压升高现象,经治疗后眼压恢复正常。结论:脱细胞猪角膜基质深板层移植治疗感染性角膜炎,不仅能有效控制感染,缓解患者角膜刺激症状,恢复角膜的解剖与功能,而且能维持良好的透明性,提高患者视力,可作为替代同种异体人角膜。

改良烧伤削痂+网状异种脱细胞真皮基质敷料联合活性碳敷料对儿童深二度烧伤创面的疗效评价

目的:探讨改良烧伤削痂+网状异种脱细胞真皮基质敷料联合医用活性碳敷料在儿童深二度烧伤创面中的治疗效果。方法:选取2018年9月—2023年9月我院烧伤整形与创面修复科接诊的深二度烧伤患儿120名作为研究对象。依据随机数字的方法将全部患儿,分为A、B、C 3组,每组40名。A组患儿采用传统换药治疗方法。B组患儿使用改良烧伤削痂+异种脱细胞真皮基质敷料的处理方法。C组患儿采用改良烧伤削痂+网状异种脱细胞真皮基质敷料+医用活性碳敷料的治疗方法。对比3组患儿的肿胀消退时间、创面完全愈合时间、总住院时间。对比3组患儿在治疗3d、10d、25d的创面愈合率、创面细菌培养阳性率、治疗过程中的不良反应发生情况。结果:3组患儿的肿胀消退时间、创面完全愈合时间、总住院时间比较差异均具有统计学意义(P<0.05),其中C组短于B组,B组短于A组(P<0.05)。3组患儿在治疗3d、10d、15d的创面愈合率比较差异均具有统计学意义(P<0.05),C组患儿的创面愈合率高于B组,B组的创面愈合率高于A组(P<0.05)。3组患儿的创面细菌培养阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05),其中C组阳性率低于B组,B组的阳性率低于A组(P<0.05)。3组患儿治疗过程中的不良反应发生率比较差异有统计学意义(P<0.05),C组低于B组,B组低于A组(P<0.05)。结论:针对发生深二度烧伤的患儿,在采取网状脱细胞真皮基质敷料联合活性碳敷料的干预方案后,有利于提升整体的治疗效果并且具有良好的安全性,值得在工作中推广。

猪脱细胞真皮基质对大鼠瘘管模型的修复作用及其对TGF-β1/NF-κB p65信号通路的影响

目的:观察猪脱细胞真皮基质对大鼠瘘管模型创面的修复作用,以及对TGF-β1/NF-κB p65信号通路的影响,探讨其可能的修复机制。方法:40只健康SD大鼠适应性喂养1周后,随机分为假手术对照组、模型组、猪脱细胞真皮基质组(真皮组)、瘘管栓阳性对照组(瘘管栓组),每组10只。连续给予相应材料治疗2周后,采用ELISA法检测血清中白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、血管内皮生长因子(VEGF)和前列腺素E2(PGE2)含量;取大鼠创面组织进行病理观察;Western blot法检测创面组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)及VEGF蛋白表达水平。结果:与模型组相比,治疗2周后真皮组和瘘管栓组大鼠的体质量明显增加(P<0.05),创面脓液明显减少。真皮组中血清IL-1β、IL-6和PGE2的含量比模型组低(P<0.05),VEGF含量比模型组高(P<0.05)。HE染色显示,与模型组相比,真皮组炎细胞浸润明显减少,胶原纤维明显增多并且更加致密。真皮组及瘘管栓组大鼠的创面组织TGF-β1和VEGF蛋白表达增加,NF-κB p65蛋白表达降低(P<0.05)。结论:猪脱细胞真皮基质可抑制大鼠瘘管创口组织炎症反应,促进血管新生及伤口愈合,且其促进胶原纤维生成的作用较瘘管栓更加明显,其机制可能与调控TGF-β1/NF-κB p65信号通路有关。

脱细胞真皮基质在隆眉弓术中的临床应用体会

目的:探讨应用脱细胞真皮基质(Acellular dermal matrix,ADM)材料隆眉弓的临床效果。方法:选取2022年1月-2023年7月笔者医院美容外科收治眉弓低平要求隆眉弓的18例就医者,其中女17例,男1例,年龄21~36岁,平均27岁。根据就医者要求设计眉弓增高的范围与高度,以ADM材料置入术区改善眉弓低平,术前术后拍照对比分析。结果:随访3~21个月,17例就医者眉弓低平改善明显,术后效果满意,1例就医者诉眉心区域相对凹陷,予以二期手术改善后效果满意,所有就医者未出现感染、排异等术后并发症。结论:应用脱细胞真皮基质材料隆眉弓手术安全有效,对眉弓低平改善明显,能有效增加上面部立体感,可以作为隆眉弓术的一种有效的临床选择。

CGF联合脱细胞真皮基质修复兔皮肤缺损的实验研究

目的 探讨脱细胞真皮基质(ADM)联合浓缩生长因子(CGF)对兔全层皮肤缺损的修复效果。方法新西兰兔12只,术前取血制作CGF膜,在兔背部制备2 cm×1 cm的全层皮肤缺损,A组:ADM+CGF、B组:ADM、C组:空白对照。观察愈合情况,Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维生长情况以及TGF-β1、VEGF的表达情况。结果A、B组在1周时已实现初级愈合,镜下胶原纤维排列整齐,C组在2周时实现初级愈合,镜下以Ⅰ型胶原纤维为主,胶原纤维排列紊乱;1周时,TGF-β1表达量A组> B组> C组(P<0.05);2周时,A、B组TGF-β1的表达下降,此时C组的TGF-β1呈增长趋势;1、2周时,VEGF表达量A组> B组> C组(P<0.05)。结论 ADM联合CGF修复兔全层皮肤缺损,可加快创口愈合速度、改善创口愈合质量;增加VEGF的释放,稳定调节TGF-β1的释放以利于伤口的愈合。

异种脱细胞真皮基质组织补片置入对腮腺良性肿瘤患者术后味觉出汗综合征发生的影响

目的探讨异种脱细胞真皮基质组织补片(H-AMD)置入对腮腺良性肿瘤患者术后味觉出汗综合征(Frey综合征)的影响,以期为临床预防腮腺良性肿瘤患者术后发生Frey综合征提供参考。方法选取2018年3月—2021年12月在成都市中西医结合医院接受手术切除治疗的90例腮腺良性肿瘤患者,按照是否置入H-AMD分为对照组(44例)与研究组(46例)。比较2组患者手术及术后恢复相关指标、术区异物感及其他并发症发生情况、Frey综合征发生情况、美容满意度等。结果2组患者术中出血量、手术时间、引流管放置时间、住院时间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。2组患者术后术区异物感及面瘫、耳周麻木、唾液漏、感染、发热等并发症发生率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。研究组患者术后12个月内Frey综合征主观判定阳性率与客观判定阳性率均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组患者术后3个月、6个月时Frey综合征客观判定阳性率低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);2组患者术后12个月时Frey综合征客观判定阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。研究组患者美容满意度优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论H-AMD置入可有效降低腮腺良性肿瘤患者术后Frey综合征发生风险,提高患者美容满意度,且不会造成患者不适或增加其他并发症发生风险。

异体脱细胞真皮基质复合自体刃厚皮片移植在面颈部烧伤后期瘢痕挛缩整形中的应用效果

目的分析异体脱细胞真皮基质(ADM)复合自体刃厚皮片移植在面颈部烧伤后期瘢痕挛缩整形中的应用效果。方法选取2018年1月至2022年4月诸城市人民医院收治的45例面颈部烧伤后期瘢痕挛缩患者作为研究对象,按照整形修复方案分为对照组(n=22)与观察组(n=23),两组均切除面颈部瘢痕组织并松解挛缩,对照组接受自体中厚皮片移植,观察组接受ADM复合自体刃厚皮片移植。比较两组皮片成活率、二次手术率、创面感染率、植皮区及供皮区愈合时间、创面修复效果、颏颈角及颈部主动活动度的矫正度数。结果观察组皮片成活率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组二次手术率、创面感染率比较差异均无统计学意义。两组植皮区愈合时间比较差异无统计学意义;观察组供皮区愈合时间短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。术后6个月,两组皮肤柔软度、厚度、色泽、血管分布评分均低于术后3个月,差异有统计学意义(P<0.05);两组术后3、6个月皮肤柔软度、厚度、色泽、血管分布评分比较差异无统计学意义。两组术后6个月颏颈角及颈部主动活动度的矫正度数比较差异均无统计学意义。结论面颈部烧伤后期瘢痕挛缩整形中应用ADM复合自体刃厚皮片移植的整形修复效果与自体中厚皮片移植相近,然而复合移植的皮片成活率更高,供皮区愈合时间更短。

脱细胞、病毒灭活与灭菌组合工艺对猪真皮基质理化性能的影响

背景:脱细胞、去抗原、病毒灭活与终端灭菌工艺的组合优化是制备符合临床要求组织再生材料的关键技术。目的:系统比较分析两种脱细胞、去抗原、病毒灭活与灭菌组合工艺对猪真皮基质理化性能的影响。方法:取新鲜猪皮,分两组工艺制备猪真皮基质:①方法A:采用1%Triton X-100、DNase和RNase、1%磷酸三丁脂进行脱细胞处理,1%过氧乙酸+25%乙醇病毒灭活,伽马射线辐照终端灭菌;②方法B:采用中性蛋白酶、0.5%Triton X-100和DNase进行脱细胞处理,α-半乳糖苷酶去除抗原,0.1%过氧乙酸病毒灭活,伽马射线辐照终端灭菌。对两种方法制备的猪真皮基质进行表征。结果与结论:①A组胶原蛋白含量低于B组,弹性蛋白、糖含量高于B组,材料硬度值高于B组;A组基质材料的悬垂性较差,B组基质材料的柔韧性较好;②A组脱细胞处理不影响基质材料的热稳定性,B组脱细胞略降低基质材料的热稳定性;伽马射线灭菌后,A组基质材料的热稳定性大幅度下降,B组基质材料的热稳定性下降很小;③与B组相比,A组基质材料的拉伸强度和弹性较小;体外酶降解实验显示,A组基质材料对胶原酶降解具有很强的抗性,对胰蛋白酶敏感、易降解,B组基质材料则相反;④扫描电镜显示,伽马射线灭菌后,A组基质材料基本看不到胶原三维结构,胶原纤维排列致密,胶原纤维之间存在非纤维结构性凝胶样物质;B组基质材料胶原纤维结构清晰,胶原纤维之间不存在非纤维结构性胶样物质。苏木精-伊红和三色染色显示,伽马射线灭菌后,A组基质材料可见少量细胞核,胶原纤维排列紧密,材料致密;B组基质材料无细胞核,保留了较好的胶原纤维三维空间结构;⑤结果表明,不同组合的制备工艺对脱细胞基质材料的理化性能影响极大,方法B在有效脱细胞和去抗原的同时较完整地保留了天然组织结构,方法A对材料的破坏性较大,制备的基质材料胶原成分含量、柔软度、热稳定性和力学性能均不如方法B。

脱矿牙本质基质和脱细胞牙本质基质成骨效果的对比研究

目的比较骨缺损区植入脱矿牙本质基质和脱细胞牙本质基质的成骨效果。方法制备脱矿牙本质基质和脱细胞牙本质基质。将24只SPF级SD雄性大鼠随机分为脱矿组(A组)、脱细胞组(B组)、Bio-Oss骨粉组(C组)、空白组(D组),每组6只大鼠,在麻醉条件下制备双侧股骨骨缺损。A、B、C组大鼠分别在骨缺损区植入脱矿牙本质基质、脱细胞牙本质基质、Bio-Oss骨粉,D组大鼠不植入任何材料。术后4周和8周,每组各随机处死3只大鼠。大体观察骨缺损区愈合情况,血清学检测成骨指标骨形态发生蛋白(BMP)-2及碱性磷酸酶(ALP)浓度,影像学观察骨缺损区高密度灰色区(代表骨愈合)分布情况,组织形态学观察新骨形成情况,计算新骨形成率。结果术后4周和8周,大体观察见A组成骨能力较其他组活跃,血清学检测A组BMP-2及ALP浓度均高于其他组,差异有统计学意义(P<0.05)。8周时,影像学观察可见A组骨缺损区高密度灰色区分布均匀,组织形态学观察见A组排列规则的骨基质。A组4、8周时的新骨形成率分别为28.51%±0.55%、32.57%±2.28%,均高于其他组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论脱矿牙本质基质比脱细胞牙本质基质具有更好的成骨潜能。

纳米材料改性脱细胞猪真皮基质的研究

将纳米SiO2、纳米TiO2及纳米银的溶液与脱细胞猪真皮基质(porcine acellular dermal matrix,pADM)复合,考察改性前后材料的表面微观结构、收缩温度、抗张强度、透水汽性、孔隙率和抗菌性能。研究结果表明:纳米材料能以纳米粒子状态较好地分布于pADM内,随着纳米SiO2、纳米TiO2用量的增大,改性后的pADM收缩温度提高,抗张强度提高,孔隙率增大,透水汽性提高,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有良好的抗菌效果;纳米银改性后的pADM收缩温度降低,抗张强度增大,孔隙率减小,透水汽性略有减小,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有优良的抗菌效果。

异种脱细胞真皮基质的临床研究进展

异种脱细胞真皮基质(Xenogeneic acellular dermalmatrix,Xeno-ADM)是异种皮经过生物工程技术制备而成的新型真皮移植替代材料。研究表明其具有低抗原性、快速上皮化且可塑性强等特点,在临床创伤修复方面得到广泛的应用。本文就异种脱细胞真皮基质的特性及其在临床应用进展上进行综述。

甲基丙烯酰化改性真皮细胞外基质水凝胶促进腹壁缺损修复

背景:目前用于填充腹壁缺损部位的合成高分子材料(如聚丙烯或聚酯)不仅缺乏可降解性和生物活性,还难以适应复杂形状伤口需求,因此,找到免疫原性低、组织相容性好的生物活性材料成为腹壁缺损修复研究的热点。目的:制备甲基丙烯酰化改性真皮细胞外基质水凝胶,探讨其在腹壁缺损中的潜在应用价值。方法:(1)依次用0.25%胰蛋白酶、1%Triton X-100对猪真皮进行脱细胞处理,获得真皮细胞外基质;胃蛋白酶消化真皮细胞外基质,经甲基丙烯酸酐改性后光交联形成甲基丙烯酰化改性真皮细胞外基质水凝胶,扫描电镜观察水凝胶的微观形貌,测试其流变学性能、溶胀性等理化性质;(2)将L929成纤维细胞接种到甲基丙烯酰化改性的真皮细胞外基质水凝胶中,检测细胞相容性;(3)将12只SD大鼠随机分为2组(n=6),创建保留腹膜的腹壁缺损模型,聚丙烯组缺损部位填充聚丙烯材料,水凝胶组缺损部位填充甲基丙烯酰化改性真皮细胞外基质水凝胶,两组创面皮肤均用聚丙烯材料覆盖,观察创面愈合情况并进行组织学分析。结果与结论:(1)采用酶解法对猪真皮进行脱细胞后具有良好的脱细胞效果,并且原有的糖胺聚糖及胶原蛋白保留较好。扫描电镜下可见甲基丙烯酰化改性真皮细胞外基质水凝胶为疏松多孔结构,孔径在70-120μm之间,该水凝胶的溶胀比为(16.88±3.24)%,吸水率为(94.24±1.11)%,流变学性能测试表明该水凝胶状态稳定且具有剪切变稀特点,具备可注射性;(2)CCK-8检测与Live/Dead染色结果显示,甲基丙烯酰化改性真皮细胞外基质水凝胶具有良好的细胞相容性;(3)动物实验结果显示,实验组术后7,10,14 d的皮肤创面愈合率高于对照组(P <0.05);皮肤与肌层组织苏木精-伊红、Masson染色显示,与聚丙烯组比较,水凝胶组术后14 d的皮肤创面上皮化情况、毛囊生成、胶原纤维排列及新生血管情况更好,术后28 d的皮肤创面新生组织结构与正常组织相近,并且瘢痕增生较少,术后28 d时可见少量肌肉组织再生;(4)结果表明,甲基丙烯酰化改性真皮细胞外基质水凝胶可促进腹壁缺损大鼠的皮肤创面愈合和肌肉组织再生。

应用异种脱细胞真皮基质修复钢板外露难愈性创面1例

创伤、烧伤、感染等导致的慢性创面常常侵犯深层组织,甚至深达骨面,伴骨、肌腱、内置入物的外露,严重者可伴有骨髓炎,导致深部的窦道形成,长期不愈,形成慢性难愈性创面,本文通过使用异种脱细胞真皮基质成功修复了钢板外露的难愈性创面1例,取得了良好的治疗效果。对于钢板外露及窦道型创面,可通过填塞异种脱细胞真皮基质,使创面达到无无效腔,促进创面愈合,为窦道形成、钢板外露创面的临床治疗提供了新的选择及方案。

脱细胞真皮基质对烧伤损伤修复的研究进展

严重烧伤是一种极具创伤性、致死率高的疾病,其治疗一直是烧伤整形外科中的难点,而脱细胞真皮基质(Acellular dermal matrix,ADM)因为具有基底膜较完整、生物相容性良好和可“永久性”存在等优点,推动了烧伤整形修复的发展。脱细胞异体真皮已成为目前国内外业内认可的“永久性”真皮的替代原料。迄今为止,已有数万名患者从中受益并重拾健康。本文就近年来ADM的理化性能、临床应用及作用机制等方面做了阐述,希望给严重烧伤治疗提供指导。