脱细胞异体神经移植物联合电针对坐骨神经损伤大鼠脊神经节的保护作用及机制

目的探讨脱细胞异体神经移植物(ANA)联合电针对坐骨神经损伤(SNI)大鼠脊神经节的保护作用及机制。方法选取50只雄性SD大鼠,10只制备ANA;40只随机分为正常组、模型组、ANA组和联合组,每组10只。分离右侧坐骨神经,于梨状肌下缘5 mm处去除10 mm制备SNI模型。ANA组将制备好的ANA连接在损伤神经的两断端处。联合组于ANA连接术后2 d采用电子针疗仪电针“环跳穴”和“阳陵泉穴”,15 min/d,7 d为1个疗程,共4个疗程。电生理检测各组大鼠坐骨神经传导速度,评估受损轴突再生情况;尼氏染色观察脊神经节中神经元的形态结构;Western blotting和免疫荧光法检测脊神经节中神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠坐骨神经传导速度明显降低(P<0.01);神经节神经元中的尼氏体因肿胀、溶解导致结构不完整,数量显著减少(P<0.01);NGF和BDNF蛋白表达量明显降低(P<0.01)。与模型组比较,ANA组和联合组大鼠坐骨神经传导速度明显增加(P<0.01);神经节神经元中尼氏体损伤减弱,数量明显增加(P<0.01);NGF和BDNF蛋白表达量显著升高(P<0.01)。与ANA组比较,联合组大鼠坐骨神经传导速度显著增加(P<0.01);神经节神经元中尼氏体形态较规则,数量明显增加(P<0.01);NGF蛋白表达量显著升高(P<0.01)。结论ANA联合电针可提高大鼠坐骨神经传导速度,改善神经节中神经元的形态结构,发挥对脊神经节神经元的保护作用,其机制可能与提高神经元中NGF和BDNF蛋白的表达,尤其是NGF蛋白的表达相关。

脱细胞猪角膜基质深板层移植治疗感染性角膜炎的疗效观察

目的:评价脱细胞猪角膜基质深板层移植治疗感染性角膜炎的有效性、安全性。方法:前瞻性研究。收集2017-02/2020-10在我院经药物保守治疗无效的感染性角膜炎患者17例17眼,应用脱细胞猪角膜基质进行深板层角膜移植手术。术后随访6 mo,观察BCVA、角膜上皮愈合情况、角膜透明情况,并记录有无感染复发以及植片排斥。结果:所有患者中均顺利完成深板层角膜移植手术,均未发生术中并发症,无失访病例,术后角膜感染均得到有效控制。术后BCVA均较术前改善(P<0.05)。17眼中16眼术后1 mo上皮完全覆盖角膜植片,仅1眼上皮未完全愈合,为病毒性角膜炎的反复发作。术后1.5 mo所有患者上皮均完全愈合。术后1 mo角膜水肿开始改善,其中1眼角膜植片轻度混浊,16眼中重度混浊;术后3-6 mo角膜透明度稳定,至术后6 mo时4眼完全透明,6眼轻度混浊,6眼中度混浊,1眼重度混浊。随访过程中,无感染复发,有1眼发生眼压升高现象,经治疗后眼压恢复正常。结论:脱细胞猪角膜基质深板层移植治疗感染性角膜炎,不仅能有效控制感染,缓解患者角膜刺激症状,恢复角膜的解剖与功能,而且能维持良好的透明性,提高患者视力,可作为替代同种异体人角膜。

显微外科技术下脱细胞基质周围神经修复膜在上肢周围神经损伤中的应用效果

目的探讨显微外科技术下脱细胞基质周围神经修复膜在上肢周围神经损伤中的治疗效果。方法回顾性分析2020年10月至2022年3月我院收治的23例上肢周围神经损伤病人的临床资料,其中男18例,女5例;年龄为10~60岁,平均41.3岁,指神经损伤9例,腕部及前臂远端的正中神经损伤14例。神经损伤予脱细胞基质周围神经修复膜修复,记录病人两点辨别觉,参考英国医学研究院神经外伤学会(MCRR)的评定标准评估指神经恢复情况,手部功能根据中华医学会手外科学会上肢部分功能评定试用标准评估。结果病人术后随访9~14个月,9例指神经损伤病人的两点辨别觉平均为7 mm,S3级6例,S3+级3例,14例腕部及前臂远端的正中神经损伤拇指对掌功能基本恢复到正常,优7例,良3例,可4例,优良率为71.4%。结论脱细胞基质周围神经修复膜在人体上肢周围神经损伤中运用安全,能较好地改善神经恢复情况,在促进神经恢复方面有一定的作用。

异体脱细胞真皮基质复合自体刃厚皮片移植在面颈部烧伤后期瘢痕挛缩整形中的应用效果

目的分析异体脱细胞真皮基质(ADM)复合自体刃厚皮片移植在面颈部烧伤后期瘢痕挛缩整形中的应用效果。方法选取2018年1月至2022年4月诸城市人民医院收治的45例面颈部烧伤后期瘢痕挛缩患者作为研究对象,按照整形修复方案分为对照组(n=22)与观察组(n=23),两组均切除面颈部瘢痕组织并松解挛缩,对照组接受自体中厚皮片移植,观察组接受ADM复合自体刃厚皮片移植。比较两组皮片成活率、二次手术率、创面感染率、植皮区及供皮区愈合时间、创面修复效果、颏颈角及颈部主动活动度的矫正度数。结果观察组皮片成活率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组二次手术率、创面感染率比较差异均无统计学意义。两组植皮区愈合时间比较差异无统计学意义;观察组供皮区愈合时间短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。术后6个月,两组皮肤柔软度、厚度、色泽、血管分布评分均低于术后3个月,差异有统计学意义(P<0.05);两组术后3、6个月皮肤柔软度、厚度、色泽、血管分布评分比较差异无统计学意义。两组术后6个月颏颈角及颈部主动活动度的矫正度数比较差异均无统计学意义。结论面颈部烧伤后期瘢痕挛缩整形中应用ADM复合自体刃厚皮片移植的整形修复效果与自体中厚皮片移植相近,然而复合移植的皮片成活率更高,供皮区愈合时间更短。

脱细胞软骨细胞外基质匀浆联合氧化苦参碱治疗大鼠骨关节炎

背景:脱细胞软骨细胞外基质治疗骨关节炎具有一定的效果,但其单独应用时的治疗效果有限。氧化苦参碱可缓解白细胞介素1β诱导的软骨细胞凋亡和细胞外基质降解。目的:观察不同剂量氧化苦参碱与脱细胞软骨细胞外基质联合膝关节腔注射对大鼠骨关节炎的治疗作用。方法:获取SD大鼠股骨软骨,采用物理、化学与酶相结合的方法制备脱细胞软骨细胞外基质。取50只SD大鼠,利用随机数字表法分为假手术组、骨关节炎组、单纯材料组、低剂量药物组、高剂量药物组,每组10只,后4组采用改良Hulth法建立大鼠骨关节炎模型。造模成功后,单纯材料组大鼠膝关节腔注射脱细胞软骨细胞外基质匀浆,低剂量药物组、高剂量药物组膝关节腔分别注射含50,100μg氧化苦参碱的脱细胞软骨细胞外基质匀浆。注射4周后取材进行相关检测。结果与结论:①与假手术组比较,骨关节炎组关节腔积液中白细胞介素1β、肿瘤坏死因子ɑ、丙二醛水平升高(P<0.05),超氧化物歧化酶水平降低(P<0.05);与骨关节炎组比较,低剂量药物组、高剂量药物组关节腔积液中白细胞介素1β、肿瘤坏死因子ɑ、丙二醛水平降低(P<0.05),超氧化物歧化酶水平升高(P<0.05),其中高剂量药物组变化更显著。②Tunel染色显示,与假手术组相比,骨关节炎组凋亡软骨细胞增多;与骨关节炎组相比,单纯材料组、低剂量药物组、高剂量药物组凋亡软骨细胞减少,其中高剂量药物组减少更显著。③苏木精-伊红与免疫组化染色显示,骨关节炎组大鼠膝关节软骨严重退变,软骨组织中Ⅱ型胶原表达降低(P<0.05)、基质金属蛋白酶9表达升高(P<0.05);与骨关节炎组相比,单纯材料组、低剂量药物组、高剂量药物组大鼠膝关节软骨退变明显改善,软骨组织中Ⅱ型胶原表达升高(P<0.05)、基质金属蛋白酶9表达降低(P<0.05),其中高剂量药物组改善最显著。④Western blot检测显示,与假手术组相比,骨关节炎组软骨组织中Nrf2、HO-1、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-9、Bax蛋白表达升高(P<0.05);与骨关节炎组相比,低剂量药物组、高剂量药物组Nrf2、HO-1、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05),Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-9、Bax蛋白表达降低(P<0.05),其中高剂量药物组改善更显著。⑤结果表明,膝关节腔内联合注射脱细胞软骨细胞外基质与氧化苦参碱可通过促进细胞外基质的合成、抑制炎症与氧化应激反应、抑制软骨细胞凋亡发挥骨关节炎治疗作用,该治疗作用可能与激活Nrf2/HO-1通路有关。

小肠黏膜下层脱细胞基质复合外泌体构建组织工程尿道

背景:小肠黏膜下层脱细胞基质已被临床与基础研究证实可用于尿道的修复重建,但其单独应用时存在宿主细胞生长缓慢、支架血管化不足而成活困难、重建尿道狭窄梗阻等问题,仅适用于较短的尿道狭窄。目的:探讨应用小肠黏膜下层脱细胞基质复合外泌体构建组织工程尿道的可行性。方法:从新西兰大白兔骨髓间充质干细胞中分离提取外泌体;制备猪小肠黏膜下层脱细胞基质,将外泌体负载于小肠黏膜下层脱细胞基质上。将小肠黏膜下层脱细胞基质-外泌体(PKH26染料标记)复合物与脐静脉内皮细胞共培养12 h,观察细胞摄取外泌体情况。选取生长状态良好的脐静脉内皮细胞,分3组培养:空白组常规培养,对照组加入小肠黏膜下层脱细胞基质,实验组加入小肠黏膜下层脱细胞基质-外泌体复合物,通过划痕实验、成管实验、血管生成因子分泌检测评估血管生成情况。取30只新西兰大白兔,建立长段(3 cm)尿道缺损模型,采用随机数字表法分3组干预(n=10):单独材料组植入小肠黏膜下层脱细胞基质,对照组植入小肠黏膜下层脱细胞基质-骨髓间充质干细胞复合物,实验组植入小肠黏膜下层脱细胞基质-外泌体复合物,植入后12周进行尿道造影、尿动力学检查及重建尿道切片病理观察。结果与结论:(1)荧光显微镜下可见小肠黏膜下层脱细胞基质中的外泌体可被脐静脉内皮细胞摄取。(2)与空白组、对照组相比,实验组材料可促进脐静脉内皮细胞的迁移、成血管能力以及成血管因子血管内皮生长因子、肝细胞生长因子、白细胞介素8的分泌(P <0.05)。(3)尿道造影结果显示,单独材料组10只兔均出现尿道狭窄,对照组10只兔中2只出现尿道狭窄,实验组10只兔均未出现尿道狭窄。尿动力检查结果显示,单独材料组兔材料植入后12周的最大尿道压高于术前(P <0.05),对照组、实验组兔植入后12周的最大尿道压均低于空白组(P <0.05)。苏木精-伊红、Masson与免疫组化染色显示,单独材料组可见明显的再生上皮层、少量的皮下平滑肌与血管,以纤维组织增生为主,伴有明显炎性细胞浸润;对照组可见较完整的再生上皮与少量胶原,可见大量的皮下血管与平滑肌,伴有炎性细胞浸润;实验组可见完整的再生上皮层与大量的皮下血管、平滑肌,未见明显炎性细胞浸润,实验组AE1/AE3、ɑ-平滑肌肌动蛋白、CD31阳性表达均高于单独材料组、对照组(P <0.05)。(4)结果表明,小肠黏膜下层脱细胞基质-外泌体组织工程尿道可通过促进血管生成来修复尿道缺损。

基质细胞衍生因子1α联合自体贫血小板血浆在 恒牙撕脱伤中的应用评价

目的:探讨基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)联合自体贫血小板血浆(PPP)在恒牙撕脱伤中的治疗效果。方法:选择2020年3月—2022年3月衡水市人民医院收治的恒牙撕脱伤患者144例(患牙152颗),随机分为试验组72例(患牙76颗)和对照组72例(患牙76颗)。对照组行常规再植术,术前使用PPP生物液浸泡、冲洗根尖。试验组在对照组基础上,于离体牙再植前在牙槽窝内植入SDF-1α。术后随访12个月,比较2组植入成功率、术后咬合疼痛程度、龈沟液中炎症因子表达、血清生长因子表达及术后并发症发生率。采用SPSS 19.0软件包对数据进行统计学分析。结果:对照组患牙再植成功率为90.79%(69/76),试验组为98.68%(75/76),试验组显著高于对照组(P<0.05)。术后2天、3个月和12个月,2组患者疼痛程度评分逐渐降低(P<0.05);各时间点疼痛程度评分组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。术后1个月,2组患者C反应蛋白(CRP)、白介素6(IL-6)显著降低(P<0.05),试验组显著低于对照组(P<0.05);2组患者可溶性细胞间黏附因子(sICAM-1)升高,试验组显著高于对照组(P<0.05)。术后1个月,2组患者血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、转化生长因子β(TGF-β)和血小板衍生生长因子(PDGF)升高,试验组显著高于对照组(P<0.05)。试验组术后并发症发生率显著低于对照组(P<0.05)。结论:PPP联合SDF-1α用于恒牙撕脱伤治疗,延迟再植成功率高,且术后不良反应发生率低。

脱细胞真皮基质和带蒂颊脂垫瓣修复颊部软组织缺损的对比研究

目的比较脱细胞真皮基质(ADM)和带蒂颊脂垫瓣(PBFPF)修复颊部软组织缺损的效果。方法选取我院84例行颊黏膜缺损修复的患者,随机分为ADM组和PBFPF组,每组42例。ADM组患者采用ADM修复,PBFPF组患者使用PBFPF修复。比较2组患者修复时间、经口进食时间、住院时间。于术前、术后1周、术后1个月、术后6个月测量并比较患者的最大开口度,记录患者的修复有效率及并发症发生情况。观察患者术后口腔颌面部功能(吞咽功能、语言功能、咀嚼功能)改善情况。结果2组患者修复时间、经口进食时间、住院时间、并发症总发生率、术后吞咽功能、术后语言功能比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。ADM组与PBFPF组患者最大开口度组间比较、组间与时点的交互效应差异无统计学意义(P>0.05),时点的比较差异有统计学意义(P<0.05)。PBFPF组中缺损面积为>13~20 cm2的患者修复有效率高于ADM组(P<0.05)。PBFPF组患者的咀嚼功能优于ADM组(P<0.05)。结论PBFPF及ADM用于口腔黏膜组织缺损的修复各有优势,对于黏膜缺损面积较大(>13~20 cm2)的患者,PBFPF的修复效果更好。

脱细胞异体神经基质移植物对脊髓前角运动神经元的保护作用

目的探讨脱细胞神经基质移植物异体移植对脊髓前角运动神经元的保护作用。方法W ist-ar大鼠30只,10只用化学提取法制备坐骨神经脱细胞基质移植物;另20只分为实验组(坐骨神经缺损移植物桥接组)和对照组(坐骨神经缺损组),每组10只。动物饲养3到4个月后取移植物、脊髓腰6-骶1节段和术侧腓肠肌,做HE、尼氏和AchE结合镀银染色以及电镜标本,进行组织学和超微结构观察,并对脊髓前角细胞的数量做统计学分析。结果实验组动物移植术后3到4个月术侧下肢行走时,后蹬动作有力,足趾能分开,步态趋于正常;针刺足底有逃避动作。对照组动物术侧下肢的运动和感觉功能未见恢复。实验组动物的移植物内见有大量再生的神经纤维,髓鞘结构清晰,腓肠肌内见有再生的神经纤维束和运动终板。实验组移植侧和对照组缺损侧脊髓腰6到骶1节段前角外侧群细胞的数量比正常侧减少,尤以对照组为甚。实验组移植侧前角细胞比正常侧的前角细胞数减少而移植侧前角细胞数比对照组缺损侧明显减少(P<0.01)。结论脱细胞异体神经基质移植物桥接周围神经缺损对运动神经元胞体的存活具有良好的保护作用。

脱矿牙本质基质和脱细胞牙本质基质成骨效果的对比研究

目的比较骨缺损区植入脱矿牙本质基质和脱细胞牙本质基质的成骨效果。方法制备脱矿牙本质基质和脱细胞牙本质基质。将24只SPF级SD雄性大鼠随机分为脱矿组(A组)、脱细胞组(B组)、Bio-Oss骨粉组(C组)、空白组(D组),每组6只大鼠,在麻醉条件下制备双侧股骨骨缺损。A、B、C组大鼠分别在骨缺损区植入脱矿牙本质基质、脱细胞牙本质基质、Bio-Oss骨粉,D组大鼠不植入任何材料。术后4周和8周,每组各随机处死3只大鼠。大体观察骨缺损区愈合情况,血清学检测成骨指标骨形态发生蛋白(BMP)-2及碱性磷酸酶(ALP)浓度,影像学观察骨缺损区高密度灰色区(代表骨愈合)分布情况,组织形态学观察新骨形成情况,计算新骨形成率。结果术后4周和8周,大体观察见A组成骨能力较其他组活跃,血清学检测A组BMP-2及ALP浓度均高于其他组,差异有统计学意义(P<0.05)。8周时,影像学观察可见A组骨缺损区高密度灰色区分布均匀,组织形态学观察见A组排列规则的骨基质。A组4、8周时的新骨形成率分别为28.51%±0.55%、32.57%±2.28%,均高于其他组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论脱矿牙本质基质比脱细胞牙本质基质具有更好的成骨潜能。

脱细胞皮肤基质/聚氨酯混纺纤维支架促进大鼠皮肤缺损的修复

背景:研究证实,将脱细胞基质与聚合物进行混合纺丝不仅可改善纤维的结构性质,还可保存脱细胞基质的生物学活性,但是目前将聚氨酯与脱细胞皮肤基质进行静电纺丝制备皮肤组织工程支架还没有相关报道。目的:观察脱细胞皮肤基质/聚氨酯混纺纤维支架对大鼠皮肤缺损的修复作用。方法:利用静电纺丝技术分别制备聚氨酯静电纺丝纤维支架和脱细胞皮肤基质/聚氨酯混纺纤维支架。扫描电镜下观察纤维结构;将大鼠脂肪间充质干细胞分别接种于两组支架上,扫描电镜下观察支架上的细胞形态。取10只SD大鼠,在每只大鼠背部制作3个1 cm×1 cm的全层皮肤缺损,其中2处缺损分别植入聚氨酯静电纺丝纤维支架(对照组)、脱细胞皮肤基质/聚氨酯混纺纤维支架(实验组),剩余缺损处不植入任何材料(空白对照组)。术后第1,2,3周,观察皮肤创面愈合情况;植入后第3周,进行创面苏木精-伊红染色,计算创面瘢痕面积。结果与结论:①扫描电镜下可见两种静电纺丝纤维均为网状结构,并且大鼠脂肪间充质干细胞在两种支架上沿纤维附着,黏附良好。②随着术后时间的延长,各组皮肤创面逐渐愈合,至术后第3周,实验组、对照组皮肤创面基本愈合,空白对照组创面可见小溃疡形成。皮肤创面苏木精-伊红染色显示,对照组、实验组创面表皮覆盖基本完整,真皮层内可见成纤维细胞长入和炎症细胞浸润,并且实验组创面胶原纤维较为丰富、排列规则有序,与表皮面基本平行;空白对照组创面表皮仍有缺损。实验组创面瘢痕面积小于其他两组(P<0.05,P<0.01)。③结果表明,脱细胞皮肤基质/聚氨酯混纺纤维支架可以有效修复大鼠全层皮肤缺损、改善创面瘢痕形成。

改良烧伤削痂+网状异种脱细胞真皮基质敷料联合活性碳敷料对儿童深二度烧伤创面的疗效评价

目的:探讨改良烧伤削痂+网状异种脱细胞真皮基质敷料联合医用活性碳敷料在儿童深二度烧伤创面中的治疗效果。方法:选取2018年9月—2023年9月我院烧伤整形与创面修复科接诊的深二度烧伤患儿120名作为研究对象。依据随机数字的方法将全部患儿,分为A、B、C 3组,每组40名。A组患儿采用传统换药治疗方法。B组患儿使用改良烧伤削痂+异种脱细胞真皮基质敷料的处理方法。C组患儿采用改良烧伤削痂+网状异种脱细胞真皮基质敷料+医用活性碳敷料的治疗方法。对比3组患儿的肿胀消退时间、创面完全愈合时间、总住院时间。对比3组患儿在治疗3d、10d、25d的创面愈合率、创面细菌培养阳性率、治疗过程中的不良反应发生情况。结果:3组患儿的肿胀消退时间、创面完全愈合时间、总住院时间比较差异均具有统计学意义(P<0.05),其中C组短于B组,B组短于A组(P<0.05)。3组患儿在治疗3d、10d、15d的创面愈合率比较差异均具有统计学意义(P<0.05),C组患儿的创面愈合率高于B组,B组的创面愈合率高于A组(P<0.05)。3组患儿的创面细菌培养阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05),其中C组阳性率低于B组,B组的阳性率低于A组(P<0.05)。3组患儿治疗过程中的不良反应发生率比较差异有统计学意义(P<0.05),C组低于B组,B组低于A组(P<0.05)。结论:针对发生深二度烧伤的患儿,在采取网状脱细胞真皮基质敷料联合活性碳敷料的干预方案后,有利于提升整体的治疗效果并且具有良好的安全性,值得在工作中推广。

NRG1基因修饰的骨髓基质干细胞移植对大鼠脊髓半横切损伤的修复作用及其机制

目的探讨移植神经调节蛋白1(NRG1)基因修饰的骨髓基质干细胞(BMSCs)对大鼠脊髓半横切损伤(SCI)的修复作用及其可能机制。方法分离培养大鼠BMSCs,转染NRG1基因,采用ELISA法测定BMSCs裂解液和培养液上清中NRG1蛋白含量,细胞计数法检测BMSCs增殖活性。43只健康8周龄SD大鼠,随机分为对照组(n=10)、SCI模型组(n=10)、BMSCs组(n=10)与NRG1-BMSCs组(n=13)。建立大鼠脊髓半横切损伤模型后,原位移植BMSCs和NRG1-BMSCs。移植第1、7、14、21、28天,采用BBB评分、斜板实验评估大鼠后肢运动功能;移植第7天,应用荧光显微镜观察移植细胞迁移及分布情况;移植第28天,采用HE染色和Nissl染色观察大鼠脊髓组织病理学变化,TUNEL染色检测脊髓组织细胞凋亡情况,Western blotting检测脊髓组织内质网应激相关蛋白[X-box结合蛋白1(XBP1)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、转录激活因子4(ATF4)、ATF6和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)]及凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]的表达。结果成功分离培养BMSCs,并转染NRG1基因。ELISA法检测结果显示,NRG1-BMSCs裂解液和培养液上清中NRG1蛋白含量明显高于BMSCs,且呈时间依赖性(P<0.05)。NRG1-BMSCs增殖活性明显高于BMSCs(P<0.05)。移植第21、28天,NRG1-BMSCs组BBB评分及斜板倾斜角度均高于SCI模型组和BMSCs组(P<0.05),但未恢复到对照组水平(P<0.05)。移植第28天,与SCI模型组和BMSCs组比较,NRG1-BMSCs组大鼠脊髓组织神经元核固缩减少,尼氏体密度增加,XBP1、CHOP、ATF4、ATF6、GRP78、Bax蛋白表达水平及TUNEL阳性细胞率明显降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论移植NRG1基因修饰的BMSCs能够减轻SCI,促进大鼠运动功能恢复,其机制可能与增加BMSCs增殖活性、抑制脊髓组织细胞凋亡、减轻内质网应激反应有关。

超临界CO_(2)流体技术制备脱细胞外基质材料及其生物医学应用

脱细胞外基质(decellularized extracellular matrix,dECM)材料在组织工程和再生医学中具有重要应用,超临界CO_(2)流体(supercritical CO_(2)fluid,SCF-CO_(2))技术已被证明可用于dECM材料的制备。文中综述了SCF-CO_(2)的基本原理、SCF-CO_(2)脱细胞及其灭菌机制,介绍了辅助溶剂的使用与预处理技术对SCF-CO_(2)脱细胞的影响,以及dECM材料的生物医学应用。结果表明:与常规方法相比,具有高渗透性、高扩散性的SCF-CO_(2)能更有效地保持细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的结构完整性和生物活性,同时展现出高效灭菌的优势,且制备的dECM材料在组织修复和再生医学领域具有显著应用潜力。

干细胞与膀胱脱细胞基质构建组织工程管状移植物修复长段输尿管缺损

背景:临床上重建长段输尿管缺损的方法存在并发症多且创伤大等缺点,因此,需要寻找其他的修复方式。目的:探讨组织工程管状移植物修复长段输尿管缺损的可行性。方法:将兔骨髓间充质干细胞和膀胱平滑肌细胞种植到兔膀胱脱细胞基质的两面,培养7 d后制作成4 cm长的组织工程管状移植物,仅将膀胱平滑肌细胞种植到兔膀胱脱细胞基质构建组织工程管状移植物作为对照;新西兰兔25只,随机分为实验组20只和对照组5只,将2种组织工程管状移植物移植到兔体内修复输尿管缺损,修复同时利用网膜包裹,分别于术后2,4,8周取实验组标本做苏木精-伊红染色及免疫组化检测。结果与结论:组织学检查发现实验组尿路上皮层再生呈连续性,术后8周可见组织工程管状移植物管腔内覆盖多层尿路上皮结构及规则的平滑肌束,免疫组化可见uroplakinⅢa及CK AE1/AE3阳性,证实了组织工程管状移植物组织内有成熟上皮细胞覆盖,且上皮细胞之间有连接功能。对照组5只动物术后拔除输尿管支架管2周内均死亡,尸检见流出道瘢痕形成,组织工程管状移植物内腔闭锁,同侧肾脏重度积水,未作组织学观察。以上结果表明将骨髓间充质干细胞和膀胱平滑肌细胞种植于兔膀胱脱细胞基质上构建组织工程管状移植物修复长段输尿管缺损是可行的,组织工程管状移植物内腔有成熟上皮覆盖,骨髓间充质干细胞能促进尿路上皮再生。

脱细胞神经移植物对骨髓间充质干细胞的诱导分化

目的探讨脱细胞神经移植物诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为施旺细胞样细胞的可行性。方法将分离纯化的SD大鼠骨髓间充质干细胞进行体外培养扩增,行表型鉴定后,取第5代细胞,诱导组采用脱细胞神经移植物匀浆进行诱导,非诱导组加入等量无血清培养基,倒置相差显微镜观察诱导后细胞形态变化,免疫细胞化学染色检测诱导后细胞S-100,神经胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein GFAP）的表达情况。结果BMSCs表型鉴定为CD44＋、CD54＋、CD34-,免疫细胞化学染色GFAP、S-100的阳性表达率分别为为（42±4）%和（64±5）%。结果 脱细胞神经移植物可诱导骨髓间充质干细胞分化为施旺细胞样细胞。

不同退变程度人髓核脱细胞外基质支架的生物学特性研究

目的:探索不同退变程度(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ度)人髓核脱细胞外基质(nucleus pulposus decellularized extracellular matrix,NP-dECM)支架的生物学特性,并选取出生物学特性最优的NP-dECM支架。方法:采用Ⅱ型胶原酶消化法提取人髓核间充质干细胞(nucleus pulposus mesenchymal stem cells,NPMSCs),镜下观察人NPMSCs贴壁、细胞形态及生长情况,行流式细胞术检测细胞表面标志物CD73、CD90、CD105、CD34、CD45、HLA-DR,并进行成脂、成骨、成软骨诱导分化,观察人NPMSCs的三系分化能力,以确定其为本研究所需要的种子细胞。采用物理、去污剂联合核酸酶法制备不同退变程度的人NP-dECM支架(分别为Ⅱ-D、Ⅲ-D、Ⅳ-D组)。通过肉眼观、DNA及细胞外基质(extracellular matrix,ECM)成分的定量和定性检测、扫描电镜等对比,评价不同退变程度的人NP-dECM支架脱细胞的效果。并运用CCK-8法和活/死细胞染色体外评估不同退变程度人NP-dECM支架的细胞相容性。结果:从髓核组织分离培养的人NPMSCs贴壁生长,细胞呈短梭形、纺锤形,第3代人NPMSCs高表达CD73、CD90、CD105等表面标志物,低表达CD34、CD45、HLA-DR等表面标志物,同时人NPMSCs具有成脂、成骨和成软骨分化能力,符合间充质干细胞标准。三种退变程度的人NP-dECM支架肉眼观形态保持完好,电镜下各组支架疏松多孔。HE染色、DAPI染色及DNA测定结果显示三种退变程度的人NP-dECM支架均有效去除了细胞成分。GAG和HYP定量及定性检测结果均显示ECM成分保留良好,GAG保留量从高到低依次为Ⅱ-D组>Ⅲ-D组>Ⅳ-D组,Ⅱ-D组和Ⅲ-D组HYP含量差异无统计学意义,均高于Ⅳ-D组。CCK-8及活/死细胞染色结果表明Ⅱ-D组、Ⅲ-D组和Ⅳ-D组均表现出良好的细胞相容性。结论:Ⅱ度退变的人髓核组织为制备人NP-dECM支架最佳选择。

脱细胞组织基质和自身细胞构建组织工程移植物

目的采用脱细胞组织基质作为支架,自身内皮细胞和平滑肌细胞作为种子细胞,构建组织工程移植物。方法取小猪颈动脉,采用酶消化法分别得到内皮细胞和平滑肌细胞,于体外培养、扩增,获得足够量的种植细胞;另取羊主动脉,经多步骤脱细胞处理,获得羊脱细胞组织基质;将培养的猪内皮细胞和平滑肌细胞分别种植于羊脱细胞组织基质,体外培养3周后移植至细胞供体猪。结果培养、扩增的细胞经鉴定,内皮细胞和平滑肌细胞的特异性标志分别呈阳性反应;脱细胞组织基质中胶原纤维和弹性纤维保持原来的形态和结构,力学性能良好;细胞种植后移植至细胞供体猪,3个月后处死,见移植物内表面光滑,无血栓形成,无钙化,内膜层与周围组织连续分布,显微镜下见大量生长细胞,弹力纤维数量与正常血管壁相似。结论体外培养的自身细胞和异种动物脱细胞组织基质可作为构建组织工程移植物的良好材料。

脱细胞真皮基质在隆眉弓术中的临床应用体会

目的:探讨应用脱细胞真皮基质(Acellular dermal matrix,ADM)材料隆眉弓的临床效果。方法:选取2022年1月-2023年7月笔者医院美容外科收治眉弓低平要求隆眉弓的18例就医者,其中女17例,男1例,年龄21~36岁,平均27岁。根据就医者要求设计眉弓增高的范围与高度,以ADM材料置入术区改善眉弓低平,术前术后拍照对比分析。结果:随访3~21个月,17例就医者眉弓低平改善明显,术后效果满意,1例就医者诉眉心区域相对凹陷,予以二期手术改善后效果满意,所有就医者未出现感染、排异等术后并发症。结论:应用脱细胞真皮基质材料隆眉弓手术安全有效,对眉弓低平改善明显,能有效增加上面部立体感,可以作为隆眉弓术的一种有效的临床选择。

CGF联合脱细胞真皮基质修复兔皮肤缺损的实验研究

目的 探讨脱细胞真皮基质(ADM)联合浓缩生长因子(CGF)对兔全层皮肤缺损的修复效果。方法新西兰兔12只,术前取血制作CGF膜,在兔背部制备2 cm×1 cm的全层皮肤缺损,A组:ADM+CGF、B组:ADM、C组:空白对照。观察愈合情况,Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维生长情况以及TGF-β1、VEGF的表达情况。结果A、B组在1周时已实现初级愈合,镜下胶原纤维排列整齐,C组在2周时实现初级愈合,镜下以Ⅰ型胶原纤维为主,胶原纤维排列紊乱;1周时,TGF-β1表达量A组> B组> C组(P<0.05);2周时,A、B组TGF-β1的表达下降,此时C组的TGF-β1呈增长趋势;1、2周时,VEGF表达量A组> B组> C组(P<0.05)。结论 ADM联合CGF修复兔全层皮肤缺损,可加快创口愈合速度、改善创口愈合质量;增加VEGF的释放,稳定调节TGF-β1的释放以利于伤口的愈合。