脱细胞组织基质和自身细胞构建组织工程移植物

目的采用脱细胞组织基质作为支架,自身内皮细胞和平滑肌细胞作为种子细胞,构建组织工程移植物。方法取小猪颈动脉,采用酶消化法分别得到内皮细胞和平滑肌细胞,于体外培养、扩增,获得足够量的种植细胞;另取羊主动脉,经多步骤脱细胞处理,获得羊脱细胞组织基质;将培养的猪内皮细胞和平滑肌细胞分别种植于羊脱细胞组织基质,体外培养3周后移植至细胞供体猪。结果培养、扩增的细胞经鉴定,内皮细胞和平滑肌细胞的特异性标志分别呈阳性反应;脱细胞组织基质中胶原纤维和弹性纤维保持原来的形态和结构,力学性能良好;细胞种植后移植至细胞供体猪,3个月后处死,见移植物内表面光滑,无血栓形成,无钙化,内膜层与周围组织连续分布,显微镜下见大量生长细胞,弹力纤维数量与正常血管壁相似。结论体外培养的自身细胞和异种动物脱细胞组织基质可作为构建组织工程移植物的良好材料。

本期专题：脱细胞组织基质来源的生物材料（本刊中文部）

推荐理由：传统方法多采用平滑肌细胞和移行上皮细胞构建组织工程膀胱，并进行支架材料的双面种植，但由于平滑肌细胞取材培养困难，且体外传代有限，双面种植较为困难。文章拟验证以骨髓间充质干细胞及膀胱脱细胞基质构建组织工程膀胱的可行性。实验采用去污剂洗涤法制备猪膀胱脱细胞基质，并测定其纯度及特性。将第3代骨髓间充质干细胞接种到膀胱脱细胞基质上，

脱细胞组织基质材料生物补片治疗6至18岁腹股沟疝患者的疗效分析

目的探讨脱细胞组织基质材料生物补片在6～18岁腹股沟疝患者治疗中应用的价值。方法选择2009年6月至12月间60例符合入选标准的6～18岁腹股沟疝患者，随机分为试验组和对照组，每组各30例。试验组应用脱细胞组织基质材料生物补片行腹股沟疝Lichtenstein平片无张力修补术，对照组行传统的单纯疝囊高位结扎术治疗。记录两组患者手术前后的临床参数，观察并分析术后并发症发生情况及疝复发情况。结果试验组手术时间（39±4）min，术后24h目测类比疼痛评分法（VAS）评分为（2．8±0．9）分，术后留院时间（31±8）h；对照组手术时间（36±4）min，术后24hVAS评分（2．6±1．0）分，术后留院时间（34±11）h。试验组手术时间长于对照组（t=3．357，P=0．001），而两组术后24hVAS评分和术后留院时间无差异（P〉0．05）。两组随访观察14～20个月，未出现生物材料过敏病例，未出现伤口感染、慢性疼痛或局部异物感。试验组术后出现阴囊积液3例，无复发；对照组出现阴囊积液2例，复发2例。结论在6—18岁儿童和青少年腹股沟疝患者的治疗中，应用生物补片行平片无张力疝修补手术效果良好．不增加术后相关并发痒。

猪小肠黏膜下层脱细胞组织基质材料的制备与体内相容性的检验

目的构建猪小肠黏膜下层脱细胞组织基质(SIS)材料,并与美国COOK公司的Surgisis产品进行对比,评估SIS材料的生物相容性检验。方法按照文献中报道的方法制作SIS材料,并与美国COOK公司的Surgisis产品进行大鼠体内植入的对比,观察并记录动物术后的一般情况,并于术后3、7 d、2、4、8周处死大鼠(每次2只),分别切取SIS及Surgisis补片并包含周围部分正常的肌肉筋膜组织,观察材料-肌肉交界处局部炎症反应、组织增生及微血管形成的情况。结果所有动物均存活至既定处死时间点,组织学观察可见,术后早期,SIS及Surgisis结构完整,呈现膜片状或条索状致密红染结构,植入部位可见大量炎性细胞浸润;随着时间的延长,SIS及Surgisis逐渐降解,结构松散,炎性细胞逐渐减少。结论 SIS植入大鼠体内后具有良好的生物相容性,未出现明显的排斥反应。

脱细胞血管组织基质的制备和平滑肌细胞的种植

目的 组织工程血管的研制成功将为先天性心脏病外科提供一种新的理想的修补材料 ,本文研究血管脱细胞组织基质的制备 ,平滑肌细胞的体外培养和种植方法。方法 取成年羊胸主动脉 ,用胰酶消化去除细胞成分 ,保存弹性蛋白和胶原蛋白 ,获得血管脱细胞组织基质 ,经点状注射法 ,种植体外培养的小牛平滑肌细胞。结果 羊主动脉经脱细胞处理 ,得到的组织基质最大负载下降 2 0 % ,最大伸长无显著改变 ;脱细胞组织基质的胶原蛋白含量与新鲜主动脉相似 ;基质的纤维结构完整 ,为网状或多孔状 ;种植的小牛平滑肌细胞生长良好。结论 采用多步骤方法获得的血管脱细胞组织基质可用作为制备组织工程血管的支架 ,适宜于血管平滑肌细胞的生长。

脱细胞组织基质在整形外科领域的应用进展

脱细胞组织基质是由同种异体或异种皮肤经处理后获得的细胞外基质成分。最初应用于心脏瓣膜领域,至今已有近40年历史。20世纪80年代开始用于烧伤创面覆盖,此后广泛应用于整形外科领域,包括乳房再造、面部整形、颈部缺损修复、腹壁重建、瘢痕治疗等。近年来,关于脱细胞组织基质的应用越来越广泛,现就其在整形外科领域的应用进展作一综述。

脱细胞脐静脉基质制备及其与上皮细胞的共培养

目的:探讨脐静脉脱细胞组织基质的制备,以及与上皮细胞共培养后支架材料与细胞间的亲合性能。方法:实验于2004-03/07在第四军医大学唐都医院实验中心完成。采用去污剂脱细胞法,加以改进,取新生儿脐静脉,用区拉通X-100及苯甲基磺酸氟在碱性缓冲液中处理,彻底去除细胞成分,保存弹性蛋白和胶原蛋白等无免疫源性的大分子物质,获得血管脱细胞组织基质,并与上皮细胞共培养。①根据血管支架的组织学要求,观察不同时间脱细胞的程度。②脱细胞血管支架与细胞共培养情况。结果:①脱细胞程度:多步骤血管组织脱细胞方法去除了细胞成分,大分子成分主要是维持血管张力的胶原蛋白和弹性蛋白等间质成分。其抗原性很低,是维持血管强度的主要成分,并且有促进细胞附着和生长的特殊生物信息。②支架结构:经过4d左右处理的支架可达到最佳效果,超过24h后可观察到部分间质发生断裂,最大负载明显下降。③细胞与支架复合情况:倒置显微镜观察上皮细胞与支架材料共同培养48h后,细胞在支架表面贴附,并生长。培养液在一两天内pH下降,表明细胞生长旺盛。细胞开始生长后沿支架表面爬行,并向基底层浸润。说明支架材料与细胞间有良好的亲合性。结论:脐静脉脱细胞基质的制备是可行的。适宜于上皮细胞的共培养,可以进行动物实验进一步验证。

脱细胞基质生物补片在嵌顿性腹股沟斜疝中的应用

目的探讨脱细胞组织基质生物补片在嵌顿性腹股沟斜疝病人治疗中的应用价值。方法选择2014年6月至2017年5月间共36例符合入选标准的嵌顿性腹股沟斜疝病人,使用脱细胞基质生物补片行腹股沟疝Lichtenstein平片无张力修补术,记录病人手术前后的临床参数,观察并分析术后并发症及复发情况。结果术后随访观察12~48个月,未出现生物材料过敏病例,出现伤口渗液2例,伤口感染1例,阴囊积液2例,无慢性疼痛和局部异物感,无复发病例。结论在嵌顿性腹股沟斜疝病人的治疗中应用脱细胞基质材料的生物补片行平片无张力疝修补手术,效果良好,不增加术后相关并发症,具有一定应用前景。

影响脂肪组织工程中细胞外基质支架的相关因素研究进展

支架作为组织工程三要素之一,它主要是作为细胞临时附着点,其降解速度应与组织再生速度相匹配,待组织重建后支架可降解排泄,不对人体造成任何损害。目前研究的组织工程支架主要有天然可降解高分子材料、人工合成的可降解高分子材料、无机材料等,脂肪组织脱细胞基质支架作为近年来的研究热门,因其来源丰富、取材方便,受到研究者们的青睐,本文就影响脂肪组织细胞外基质支架的相关因素综述如下。

眼部脱细胞修复材料的制备与鉴定

目的:以不同方法制备脱细胞硬脑膜和巩膜,比较不同方法、浓度、作用时间对硬脑膜和巩膜脱细胞效果的差异,找到适合硬脑膜和巩膜的脱细胞方法。方法:将取自8只新西兰大白兔的硬脑膜和巩膜组织剪成小块,每种组织块均分为8组,每组含有硬脑膜和巩膜两种组织,4组用以5,10,20,50mL/L Triton X-100为主,辅以DNase、RNase的方法处理,另外4组用2.5g/L胰蛋白酶和1g/L SDS分别处理12h+12h,12h+24h,24h+12h,24h+24h。完成后分别从大体观察8组的外观,HE染色比较脱细胞后的细胞残留数,透射电镜观察胶原纤维的超微结构。结果:以Triton X-100处理后的组织外观与处理前相似,2.5g/L胰蛋白酶处理后的组织肿胀增厚。20,50mL/LTriton X-100两组和2.5g/L胰蛋白酶+1g/L SDS处理时间≥36h的三组组织内的细胞残留平均数都小于2个/高倍镜视野。电镜结果证实,硬脑膜和巩膜经过脱细胞处理后,胶原纤维结构同处理前相同,未受到破坏。结论:以Triton X-100处理的硬脑膜和巩膜结构紧凑,胶原纤维保存完好,其中20mL/L Triton X-100浓度处理过的组织残留细胞少,处理前后外观改变少,是适合硬脑膜和巩膜进行脱细胞处理的方法。

骨髓间质干细胞和脱细胞基质构建组织工程血管的动物实验

目的以骨髓细胞作为种子细胞,血管脱细胞组织基质作为支架、构建组织工程血管。方法分离小猪骨髓单个核细胞,分别置于内皮细胞培养液和平滑肌细胞培养液中培养,观察分化细胞的抗原标志;多步骤法制备犬血管脱细胞组织基质,将未经分化的骨髓单个核细胞种植于脱细胞基质构建组织工程血管,移植至骨髓供体小猪,代替部分肺动脉血管。结果小猪骨髓细胞经内皮细胞培养液或平滑肌细胞培养液培养后,分别出现成熟内皮细胞或平滑肌细胞的形态学改变,并分别表达内皮细胞或平滑肌细胞的特异性抗原;组织工程血管移植100 d 后管腔通畅,无血栓、钙化或动脉瘤形成,内皮细胞和平滑肌细胞分化、增殖良好;移植血管的最大负载为2.76 N,最大伸长度为20.31 mm。结论骨髓单个核细胞复合脱细胞基质可成功构建组织工程血管。

脱细胞基质材料生物补片在青少年(6～18岁)患者腹股沟疝修补术中应用的研究

目的探讨脱细胞组织基质材料生物补片在青少年(6～18岁)腹股沟疝患者治疗中应用的价值,为这一特定人群腹股沟疝修补手术的治疗提供新的思路与材料。方法选择2009年7月至2009年12月间共30例符合入选标准的青少年腹股沟疝患者,使用广东冠昊公司生产的脱细胞基质材料生物补片行腹股沟疝Lichtenstein平片无张力修补术,记录患者手术前后的临床参数,观察并分析术后并发症及复发情况。结果术后随访观察12～18个月,未出现生物材料过敏病例,未出现伤口感染,术后阴囊积液3例,无慢性疼痛和局部异物感,无复发病例。结论在青少年腹股沟疝患者的治疗中应用脱细胞基质材料的生物补片行平片无张力疝修补手术,效果良好,不增加术后相关并发症,理论上可更好地预防复发,具有一定应用前景。

天然生物材料在组织工程和再生医学中的应用

简要介绍了天然生物材料的特性及其对组织工程与再生医学研究的重要性,通过查阅相关文献,重点阐述了蛋白质类生物材料、多糖类生物材料、脱细胞组织衍生生物材料的特性以及它们在组织工程和再生医学中的应用,最后指出了天然生物材料具有的优势及存在的不足,为天然生物材料从基础研究到临床应用转化以及未来的发展提供了参考。

脱细胞基质材料生物补片在腹股沟疝修补术中的应用研究

目的探讨脱细胞基质材料生物补片在腹股沟疝修补术的应用效果。方法回顾性分析2015年12月至2017年9月,山东大学附属济南市中心医院301例(372侧)腹股沟疝修补手术患者的临床资料。按照术中使用补片不同,分为2组。试验组患者117例(141侧),术中使用生物补片;对照组患者184例(231侧),术中使用合成补片。对照分析2组的疗效和并发症等的差异。结果在腹腔镜腹股沟疝修补术中试验组手术时间较对照组长,差异有统计学意义(P<0.01);2组感染、复发、慢性疼痛、浆液肿发生情况比较,差异无统计学意义(P>0.05)。开放疝修补中试验组和对照组手术时间、感染、复发、慢性疼痛、合成补片及浆液肿比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。2组补片价格及异物感比较,差异有统计学意义(P<0.05);术后住院时间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论脱细胞基质材料生物补片可以安全有效的修补疝环缺损<3cm的腹股沟疝,但是费用较高。

不同生物补片材料与盆底重建:应用与作用

背景:近年来,可应用于盆底修补和重建的补片类型越来越多,但其选择和应用方法临床还没有统一的标准,对其安全及可行性还需要有更清晰的了解。目的:分析不同生物补片材料在盆底重建中应用的可行性,并对其在盆底修补和重建中的并发症进行熟练掌握,以明确其安全性。方法:运用计算机检索CNKI数据库、Pub Med数据库近10年文献,中英文检索关键词分别为"补片、盆底重建"和"biological Patch,reconstructive pelvic surgery",选取内容与补片类型、材料学特点及其应用效果有关的文章,同一领域文献选择权威杂志发表的文章或近期发表的文章,依据纳入标准纳入36篇文献进行归纳总结。结果与结论:盆底修复及重建材料能够替代薄弱受损的盆底筋膜组织,属于盆底组织的替代物。生物材料补片分为自体、同种异体、异体材料,现阶段脱细胞组织基质是主要的同种及异种移植材料,其不含特异识别位点,不易引发受者免疫排斥反应,促进了组织相容性的有效增加及感染率的极大降低,同时可能有某种复合生长因子存在,能够对细胞的生长和分化进行调节。临床也已经广泛应用了合成材料(聚丙烯)补片,但其可能引发并发症,如感染、侵蚀等,而生物材料补片一定程度避免了这些并发症,具有较高的可行性,但其安全性等还需要进一步研究。

Study on Characteristics of Acellular Bovine Pericardium Crosslinked with Genipin

The study used a naturally occurring crosslinking reagent-genipin to chemically modify acellular bovine pericardium, prepare cardiac valve tissue engineering scaffold material,and evaluated genipin crosslinked acellular matrix of bovine pericardium by investigating the physical and chemical properties of the tissues, such as the surface properties, crosslinking characteristics, mechanical properties, resistance to enzymatic capacity in vitro, and hemolysis tests. The results showed that acellular bovine pericardium matrix erosslinked with genipin was strong hydrophilicity, high crosslinking index, and stable structure, which can maintain good mechanical properties. As a kind of scaffold material for valve tissue engineering, it has wide application prospect.

生物来源皮肤组织工程支架的研究进展

生物来源组织支架材料具备良好的物理和机械特性,可为细胞提供良好的纳米和微观结构,激活细胞所需的各类生物因子,从而促进细胞附着、增殖和分化。天然生物来源支架材料的特性,特别是细胞外基质材料脱细胞脂肪组织基质,在干细胞传递及损伤组织修复等方面有优势及不足,有希望用于皮肤组织工程进行软组织缺损的注射及填充。