次氯酸钠溶液和钴-60辐照对脱细胞结膜基质中病毒灭活效果的研究

目的验证猪源脱细胞结膜基质中病毒灭活工艺的灭活效果。方法用不同浓度次氯酸钠溶液对猪睾丸(ST)细胞和牛肾(MDBK)细胞行细胞毒性实验;选择猪眼结膜、脱细胞结膜基质各3个批号,用ST细胞和MDBK细胞进行次氯酸钠灭活处理和钴-60(25 kGy)辐照处理后的样品/终止产物的细胞毒性实验;以猪细小病毒(PPV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)为指示病毒,采用细胞病变法分别测定次氯酸钠工艺和钴-60(25 kGy)辐照工艺对猪脱细胞结膜基质(中间品)病毒灭活效果,并进行细胞盲传实验。结果次氯酸钠溶液稀释至质量浓度100.00 mg/L(1.0‰)时,ST细胞增殖率大于70%;质量浓度50.00 mg/L(0.5‰)次氯酸钠溶液的MDBK细胞增殖率大于70%。1.0‰次氯酸钠溶液处理的猪眼结膜样品在10倍体积稀释后,对ST细胞和MDBK细胞均无抑制作用。脱细胞结膜基质辐照处理,经100倍体积稀释后对MDBK细胞无毒性,经10倍体积稀释后对ST细胞无毒性影响。3个批号猪眼结膜样品经过次氯酸钠溶液处理30 min后,PPV和BVDV的灭活平均降低系数分别为≥4.542 logs和≥4.333 logs;负载PPV病毒样品的盲传3代为阳性,即仍能检测到PPV。3个批号脱细胞结膜基质样品经钴-60辐照后,PPV和BVDV的灭活平均降低系数分别为≥4.792 logs和≥3.667 logs,负载BVDV的3个批号样品盲传结果为阴性,负载PPV病毒的3个批号样品盲传结果为阳性。结论用次氯酸钠溶液和钴-60辐照两个工艺分别处理脱细胞结膜基质(中间品)后的病毒灭活降低系数累加为:BVDV总降低系数大于8 logs,PPV总降低系数大于9 logs。两个工艺联合可以有效灭活猪源脱细胞结膜基质中污染的PPV和BVDV。

脱细胞技术及其在眼表重建组织工程中的应用研究

严重眼表疾病的治疗一直是困扰眼科医师的难题,目前认为组织工程学方法可解决这一难题。组织工程可重建眼表并恢复眼表功能,而脱细胞支架是构建组织工程的关键环节之一。可采用化学法、物理法以及生物法制备脱细胞支架,但单一的制备方法很难获得良好的去细胞效果,因而大部分学者建议采用联合的方法制备,其在最大化脱细胞的前提下,可更多地保存细胞外基质的生理结构和生物活性,减少不良反应。目前用于眼表疾病的脱细胞支架包括脱细胞角膜基质和脱细胞结膜基质,并已在试验中取得了一定的效果。