脱细胞羊膜支架复合Scleraxis慢病毒转染的人羊膜间充质干细胞促进兔腱-骨愈合

背景:脱细胞羊膜支架是一种天然支架,具有良好的生物相容性,已经广泛应用于组织工程的相关领域。Scleraxis能够促进人羊膜间充质干细胞向人韧带细胞分化,进而促进腱-骨愈合。目的:探讨脱细胞羊膜支架复合Scleraxis慢病毒转染的人羊膜间充质干细胞能否促进兔腱-骨愈合。方法:①体外分离培养人羊膜间充质干细胞,经过传代培养后观察细胞的形态;②体外构建Scleraxis慢病毒然后以最适感染复数转染第3代人羊膜间充质干细胞,q-PCR检测其转染效率;③用酶消化法制备脱细胞羊膜支架,然后体外将转染Scleraxis慢病毒的人羊膜间充质干细胞接种到脱细胞羊膜支架上面,鬼笔环肽染色观察细胞在支架上的生长情况;④将脱细胞羊膜支架复合转染Scleraxis慢病毒的人羊膜间充质干细胞包裹新西兰大白兔跟腱,然后移植到骨隧道内,观察其对腱-骨愈合的影响。结果与结论:①第3代人羊膜间充质干细胞呈贴壁生长,细胞生长状态良好;②Scleraxis慢病毒转染后96 h表达稳定的绿色荧光,Slclerxis的m RNA表达水平明显提高,说明转染成功;③脱细胞羊膜支架的上皮细胞基本消失,证明脱细胞比较彻底,同时其基底层完整保留,细胞外基质成分仍然存在;④通过鬼笔环肽染色发现细胞在脱细胞羊膜支架上生长良好,增殖未受到影响;⑤体内实验结果提示:人脱细胞羊膜支架复合Scleraxis慢病毒转染的人羊膜间充质干细胞具有促进腱-骨愈合的作用。

脱细胞人羊膜支架材料对羊膜源性干细胞增殖作用的影响

目的研究脱细胞人羊膜支架材料的制备及其对羊膜源性干细胞增殖作用的影响。方法利用38~40周孕妇剖宫产术后的羊膜,洗净后用物理及酶消化的方法清除羊膜细胞成分,得到脱细胞人羊膜支架材料,并制备了不同浓度的包被培养皿。剥离剖宫产后的羊膜利用流式细胞分选技术从中分离干细胞,并在包被培养皿上探讨细胞增殖活性,与其他生物材料包被培养皿做比较。结果羊膜源性干细胞在脱细胞人羊膜支架材料的包被培养皿上增殖速度明显增强,且与包被浓度明显相关。与常用的支架材料相比其对干细胞增殖效果更强,差异显著。结论脱细胞人羊膜支架材料有望成为干细胞研究与再生医疗领域中的新型生物材料。

HAAM支架复合兔BMSCs促进关节软骨修复的实验研究

目的探究人脱细胞羊膜(HAAM)支架复合兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)是否能够促进兔关节软骨损伤的修复,为临床治疗软骨损伤提供新的思路和实验依据。方法取健康成年新西兰大白兔15只,体重2.5~3.0 kg,雌雄不限,分为空白对照组、HAAM组、HAAM+BMSCs组,每组5只。空白对照组未做特殊处理;HAAM组用制备的HAAM支架填充在缺损的软骨部位;HAAM+BMSCs组用HAAM复合BMSCs填充在缺损的软骨部位。术后3个月处死兔子,进行大体观察并做苏木素-伊红(HE)染色、甲苯胺蓝染色观察缺损处软骨修复的情况。结果成功制备了HAAM支架,将BMSCs种植到HAAM支架上可见细胞在支架上生长情况良好,形态和增殖未见明显变化。体内实验结果提示HAAM+BMSCs组软骨缺损处可见新生的软骨组织,较其他两组修复效果更好,新生的软骨组织与正常软骨组织相差不大。结论HAAM是一种性能良好的天然支架,无细胞毒性,细胞能在上面生长;HAAM复合BMSCs对关节软骨的修复具有一定的促进作用。