脱细胞脊髓天然支架的制备及形态学观察

[目的]采用化学脱细胞方法去除细胞和髓鞘成分制作细胞外基质支架,为桥接脊髓损伤缺损提供理想的天然神经支架。[方法]取SD大鼠胸段脊髓约2cm,运用冻融+化学萃取(3%脱氧胆酸钠和1KU/mlDNaseI、RNaseA)的组织工程学方法处理大鼠脊髓组织,并对处理后的脊髓支架分别进行组织学检查,了解脱细胞情况及细胞外基质支架形态。[结果]经过脱细胞处理后,光镜下HE染色脊髓横断面呈网状结构,未见细胞成分存留,纵切面上呈互相交错的管状通路;未见轴突、髓鞘和细胞核。髓鞘染色可见髓鞘脱除彻底,未见髓鞘成分。[结论]本实验采用冻融+化学萃取的组织工程学方法可制备出理想的天然脊髓支架,该支架与脊髓三维组织结构具有高度相似性,有望作为脊髓损伤后桥接物和神经组织工程种子细胞的支架,本实验结果显示3%脱氧胆酸钠和1KU/mlDNa-seI、RNaseA进行脱细胞处理两次是较为合适的,能较为彻底去除细胞及髓鞘成分并较为完整地保留细胞外基质的三维结构。

2种去细胞方法制备大鼠脱细胞脊髓支架效果的对比研究

目的比较脱氧胆酸钠+Triton X-100和脱氧胆酸钠+DNA+RNA酶2种脱细胞方法制备脱细胞的同种异体脊髓支架的效果。方法取成年SD大鼠胸段脊髓2 cm,运用冻融+化学萃取的组织工程学方法(脱氧胆酸钠+Triton X-100和脱氧胆酸钠+DNA+RNA酶)处理大鼠脊髓组织,对处理后的脊髓支架分别进行HE染色,髓鞘染色和扫描电镜观察。结果2种方法均较为完全地脱去了细胞和髓鞘成分,脊髓横断面上呈网状结构,未见细胞成分存留,纵切面上呈互相交错的管状通路;未见轴突、髓鞘和细胞核。结论采用冻融+化学萃取的2种组织工程学方法均可制备出理想的天然脊髓支架,该支架与脊髓三维组织结构具有高度相似性,有望作为脊髓损伤后桥接物和神经组织工程种子细胞的支架。

关节软骨脱细胞支架材料的制备

目的:探讨脱细胞关节软骨支架材料的制备方法,制备软骨理想的组织工程支架材料。方法:实验于2005-12/2006-08在兰州大学第二医院骨科研究所实验室完成。实验方法:利用冷冻干燥、化学去污剂等方法制备脱细胞的兔关节软骨。在无菌状态下取青紫蓝兔的新鲜兔关节软骨,剪成3.5mm×3.5mm,厚度0.2～2.0mm,在冷冻干燥器中冻干12h。在10g/L Triton X-100、Tris-HCl液内加入蛋白酶抑制剂-苯甲基黄酰氟,持续振荡48h后标本以双蒸馏水连续冲洗后置于DNase I酶和RNase A酶混合液中消化。置于10g/L Triton X-100、Tris-HCl液中洗脱。实验评估:①大体观察:肉眼观察脱细胞后关节软骨的外观形态。②组织学观察:将制备的脱细胞关节软骨行石蜡包埋切片,行苏木精-伊红染色、Massion三色染色并在光镜下观察。③扫描电镜观察:将制备的脱细胞关节软骨以戊二醛-锇酸双固定后,行扫描电镜观察。结果:①脱细胞后关节软骨外观形态:肉眼下可见正常关节软骨呈白色或淡黄色,脱细胞后关节软骨色呈灰白,半透明状,无光泽,外形与软骨相似并且仍维持了关节软骨的结构。②脱细胞后关节软骨的组织学变化:苏木精-伊红染色显示,软骨细胞消失,软骨巢分辨不清,在巢内没有蓝染的核物质,核细胞碎屑,只有红染为残留的细胞外基质。Massion三色染色显示,脱细胞后关节软骨内主要含有胶原纤维。③脱细胞后关节软骨的超微结构:扫描电镜下显示,脱细胞后关节软骨陷窝呈蜂窝状,未见到残余的细胞核、细胞器,残余的空穴高低不平。结论:经冷冻干燥、化学去污剂等方法可完整去除软骨中的细胞成分,保留胶原纤维等细胞外基质。

脱细胞脊髓支架的成分分析

目的探讨同种异体脱细胞脊髓支架的制备方法并分析其可能含有的有效成分。方法采用冻融+化学萃取方法制备脱细胞脊髓支架,光镜及扫描电镜观察其结构特征;用免疫组织化学法分析脱细胞支架的主要成分。结果正常的大鼠脊髓组织经脱细胞处理后,清除了所有的细胞成分及髓鞘和轴突,扫描电镜显示保存了细胞外基质成分构成了三维支架结构。成分分析结果显示,存留的支架结构中含有层黏连蛋白(laminin,LN)、纤连蛋白(fibronectin,FN)、Ⅳ型胶原等诱导和促进神经再生、促进细胞黏附和增殖的重要成分。结论脱细胞异体脊髓具有三维支架结构,含有诱导和促进神经再生的相关蛋白,有利于受损神经的再生及移植细胞的存活和增殖。

脊髓脱细胞支架对大鼠脊髓缺损修复的影响

目的用振荡法制备脊髓脱细胞支架修复同种异体大鼠脊髓缺损,观察术后大鼠行为学及组织再生情况。为脊髓缺损后修复提供新的研究思路。方法将30只SD大鼠脊髓分别用50 ml 3%聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)和2%脱氧胆酸钠溶液在摇床上做振荡处理,对比处理前后细胞残留情况及组织的空间结构,了解支架本身的组织构成。将90只SD大鼠随机分成空白对照组、单纯脊髓缺损组和支架移植组。切除单纯脊髓缺损组和支架移植组大鼠腰椎9~10节段,移植脱细胞支架至支架移植组大鼠。术后饲养12周,期间进行行为学评分观察,分别在4、8及12周时取大鼠损伤部位的脊髓进行HE染色及神经再生相关蛋白免疫荧光检测。结果通过HE、Masson、甲苯胺蓝染色显示,脱细胞处理后的脊髓脱细胞支架上神经细胞及轴突彻底清除,保留了脊髓细胞外基质。扫描电子显微镜观察发现,支架保留一定多孔网状支架结构。脱细胞支架在体实验中,Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分显示,移植有脱细胞支架的大鼠后肢运动功能恢复优于单纯损伤组大鼠。组织学HE染色显示,脱细胞支架能够填补缺损的脊髓节段,加快损伤脊髓的修复过程。免疫荧光显示,支架移植组大鼠的损伤部位有一定轴突再生。结论脊髓脱细胞支架保留了细胞外基质并具有一定空间结构,能够一定程度加快脊髓缺损修复,对神经再生具有一定的促进作用。

两种细胞洗涤剂制备脱细胞同种生物带瓣管道支架的研究

目的 比较去氧胆酸钠(deoxycholic acid,DOA)和十二烷基硫酸钠(sodium dodecylsulphate,SDS)两种细胞洗涤剂制备脱细胞的同种生物带瓣管道(homograft bioprosthetic tube valved,HBTV)支架的效果,为体外构建组织工程瓣(tissue- engineering heart valve,TEHV)提供同种生物瓣支架材料。 方法 对同种带瓣主动脉管道和带瓣肺动脉管道,分别用含0 .5 % DOA或0 .0 3% SDS的Tris低渗缓冲液共同孵育4 8h,脱去经液氮保存、具有活性的HBTV表面的内皮细胞,固定剂固定后分别进行HE、胶原纤维和弹力纤维染色的光镜观察,以及扫描电镜观察,摄片。 结果 两种洗涤剂均完全地脱去了HBTV表面的内皮细胞,中心部位的成纤维细胞有部分存留;细胞外基质,如胶原纤维和弹力纤维等均较完整地保留下来,其形态结构与脱细胞前无明显改变。 结论 0 .0 3%～0 .1% SDS或0 .5 % DOA的低渗缓冲液对制备HBTV脱内皮细胞支架效果均较佳,有利于HBTV再内皮化时种植细胞的黏附和扩增,可进一步应用于体外构建TEHV的研究。对于脱主动脉壁的细胞,SDS浓度应增至0 .1%为佳。

大鼠骨髓间充质干细胞与脱细胞脊髓支架体外共培养

目的评价脱细胞脊髓支架在大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)体外培养中的作用,探索最佳接种浓度。方法分离、培养及鉴定SD大鼠BMSCs,诱导BMSCs向神经元样细胞分化。制备脱细胞脊髓支架,将第3代BMSCs同脱细胞脊髓支架共培养,MTT法检测细胞增殖活性,比较与普通培养的差异;取第3代BMSCs以不同浓度[(0.5、1、2、3、4)×106/mL]接种于支架(脊髓支架修整0.5cm小段),检测细胞在支架上的粘附率及上架细胞数,建立接种浓度与细胞粘附率、上架细胞数的关系回归方程;扫描电镜观察脱细胞脊髓支架形态以及细胞与支架的粘附情况。结果成功实现BMSCs的分离及培养,BMSCs流式鉴定CD29、CD90阳性表达,向神经元诱导胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、巢蛋白(Nestin)呈阳性表达;与普通培养相比,BMSCs在支架上细胞增殖活力显著提高(P<0.05);细胞与支架的粘附率在接种浓度为2×106/mL最高,达到(79.6±2.7)%,单位体积上架细胞数达到(1.364±0.047)×106/cm3;扫描电镜观察支架空间结构良好,细胞与支架粘附良好,共培养第3天较第1天细胞数量明显增加。结论脱细胞脊髓支架具有多通道的空间结构,适合BMSCs粘附、存活、增殖,该支架是良好的天然脊髓组织工程材料。当粘附率及细胞上架数基本达到最大时的最佳接种浓度为2×106/mL。

脱细胞脊髓基质支架的研究进展

应用组织工程学技术进行脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）的修复已成为神经医学领域内的研究热点。支架构建作为组织工程学研究的基本要素,在进行组织水平的脊髓重构研究中具有极其重要的意义。如何构建符合脊髓组织解剖和生理需要的组织工程脊髓支架,

神经干细胞与脊髓脱细胞支架体外共培养的可行性

目的观察大鼠神经干细胞(NSCs)在脊髓脱细胞支架(SCAS)上黏附、生长和分化情况,评价其构建脊髓组织工程的可行性。方法新生Sprague-Dawley大鼠大脑皮质来源NSCs传代培养并鉴定;Sprague-Dawley雌性大鼠脊髓组织改良物理振荡结合化学萃取法制备SCAS,并行基础评估;将第三代NSCs种植在SCAS上,体外共培养,免疫荧光、免疫组化和扫描电镜观察支架上细胞形态。结果共培养的细胞为能增殖、分化的NSCs。制备的SCAS孔隙率、含水率、酶解率都明显高于正常脊髓(|t|>4.679,P<0.01);SCAS基质结构呈疏松网络状,基质上可见极少量残留细胞核。NSCs在SCAS上黏附、生长良好,可分化为神经元和神经胶质细胞。结论制备的SCAS脱细胞较彻底,具有多通道空间结构,适合NSCs黏附、生长和分化,可用于脊髓组织工程。

脱细胞支架联合电针对坐骨神经损伤大鼠脊髓前角运动神经元的保护作用

目的 :探讨脱细胞支架(AS)联合电针对坐骨神经损伤(SNI)大鼠脊髓前角运动神经元的保护作用。方法 :首先制备AS,用于桥接损伤的神经。其次切除大鼠右侧坐骨神经10 mm,建立大鼠SNI模型。将SNI模型大鼠随机分为模型组(M)、AS桥接组(AS)和AS联合电针治疗组(AST)。模型组不予任何干预,AS组将支架桥接于两断端处,AST组在支架桥接术后2 d给予电针进行治疗,采用20 Hz、1 mA疏密波相间的电流,针刺穴位为环跳和阳陵泉,每次电针15 min,7 d 1个疗程。电针4周后,用电生理记录仪检测各组大鼠坐骨神经传导速度和波幅,用尼氏染色观察各组大鼠脊髓前角运动神经元的形态结构,用免疫印迹检测各组大鼠脊髓脑源性神经营养因子(BDNF)和神经生长因子(NGF)蛋白的表达。结果 :AST组大鼠坐骨神经传导速度和波幅明显高于AS组;尼氏染色显示AST组脊髓前角运动神经元胞体形态较完整,尼氏体呈蓝紫色、斑块状,偶见部分核移位现象,尼氏体的数量明显多于AS组和模型组;免疫印迹结果显示AST组脊髓内BDNF和NGF蛋白表达量均高于AS组和模型组。结论 :脱细胞支架联合电针不仅可增加大鼠坐骨神经传导速度及波幅,还可阻止脊髓前角运动神经元中尼氏体肿胀与溶解,并可上调脊髓内BDNF和NGF蛋白的表达,对SNI所致的脊髓前角运动神经元损伤有保护作用。

人关节软骨脱细胞基质制备实验(英文)

背景:对天然的细胞外基质进行处理,剔除其抗原成分,保留了组织结构的完整性,这种材料具有良好的生物相容性,能为细胞创造尽可能接近体内的培养环境,因此应是组织工程中细胞培养支架的首选。目的:制备人关节软骨脱细胞基质,为进一步研究关节软骨基质作为细胞外支架材料提供方法学资料。设计:以骨组织标本为实验对象,单一样本研究。单位:解放军总医院骨科研究所。材料:实验于2004-01/05在解放军总医院骨科研究所完成。材料来自因股骨颈头下型骨折行关节置换而切除的股骨头。方法:切取人关节软骨,剪裁成3.5mm×4.5mm×2.0mm大小共10块,冻干处理12h,采取化学去污剂TritonX-100及DNA酶和RNA酶等试剂制备脱细胞的人关节软骨。用苏木精-伊红、番红O及软骨蛋白聚糖免疫组化染色等方法进行关节软骨脱细胞定性检测。主要观察指标:脱细胞关节软骨的组织学观察以及软骨蛋白聚糖免疫组织化学染色结果。结果:①苏木精-伊红染色、番红O染色均显示细胞陷窝内已无细胞结构。②软骨蛋白聚糖免疫组织化学染色阳性,提示脱细胞关节软骨基质内仍存在软骨蛋白聚糖。结论:人关节软骨冻干后,经去污剂-酶等处理方法可脱去软骨的细胞成分,成功制备人关节软骨脱细胞基质。其中保留的软骨蛋白聚糖可能仍存在原有的耐压特性。

脱细胞脐静脉基质制备及其与上皮细胞的共培养

目的:探讨脐静脉脱细胞组织基质的制备,以及与上皮细胞共培养后支架材料与细胞间的亲合性能。方法:实验于2004-03/07在第四军医大学唐都医院实验中心完成。采用去污剂脱细胞法,加以改进,取新生儿脐静脉,用区拉通X-100及苯甲基磺酸氟在碱性缓冲液中处理,彻底去除细胞成分,保存弹性蛋白和胶原蛋白等无免疫源性的大分子物质,获得血管脱细胞组织基质,并与上皮细胞共培养。①根据血管支架的组织学要求,观察不同时间脱细胞的程度。②脱细胞血管支架与细胞共培养情况。结果:①脱细胞程度:多步骤血管组织脱细胞方法去除了细胞成分,大分子成分主要是维持血管张力的胶原蛋白和弹性蛋白等间质成分。其抗原性很低,是维持血管强度的主要成分,并且有促进细胞附着和生长的特殊生物信息。②支架结构:经过4d左右处理的支架可达到最佳效果,超过24h后可观察到部分间质发生断裂,最大负载明显下降。③细胞与支架复合情况:倒置显微镜观察上皮细胞与支架材料共同培养48h后,细胞在支架表面贴附,并生长。培养液在一两天内pH下降,表明细胞生长旺盛。细胞开始生长后沿支架表面爬行,并向基底层浸润。说明支架材料与细胞间有良好的亲合性。结论:脐静脉脱细胞基质的制备是可行的。适宜于上皮细胞的共培养,可以进行动物实验进一步验证。

大鼠脱细胞脊髓的形态学观察

目的:观察大鼠脱细胞脊髓的形态特点,探讨其作为脊髓组织工程支架的可行性。方法:取11条SD大鼠脊髓,采用冻融+化学萃取法进行脱细胞处理,其中2条采用HE染色观察脱细胞情况,立春红2R-亮绿SF染色观察脱髓鞘情况;3条取颈、胸、腰段横切片行Mallory三色胶原染色和透射电镜检查,3条取颈、胸、腰段纵切片行Mallory三色胶原染色,3条取颈、胸、腰段贴片行扫描电镜检查,观察其形态构成等参数,比较不同部位材料内部结构的差异。结果:经脱细胞处理的脊髓呈乳白色扁长条状,干燥,体积较处理前略变小,韧性及强度增加,表面脊膜包裹完好,无异味。HE染色显示脊髓内未见细胞残留;丽春红2R-亮绿SF染色证实神经细胞轴突脱髓鞘完全。颈、胸及腰段脊髓横断面均呈网格状结构,纵断面均呈平行管状结构。颈、胸及腰段横断面网格大小及纵断面平行管状结构间距行统计学两两比较,颈段网格长径明显大于胸段(P<0.05),胸段网格短径明显小于腰段(P=0.05),其余均无统计学差异(P>0.05)。结论:SD大鼠脊髓经脱细胞处理后颈、胸和腰段脱细胞彻底,保留了原脊髓的主体结构,可作为脊髓组织工程的支架。

脱细胞基质制备方法及其在涎腺组织工程中的应用

背景:由脱细胞基质组成的生物支架被广泛应用于动物及临床研究,以修复和重建组织与器官,但所有的脱细胞方法都会在一定程度上破坏基质结构与功能。目的:综述脱细胞基质制备方法、优缺点及其在涎腺组织工程研究中的应用。方法:应用计算机检索CNKI数据库、中国生物医学文献数据库、PubMed数据库及Elsevier数据库2008至2019年发表的相关文献,检索词为“脱细胞基质,制备方法,涎腺,组织工程,再生;decellularization,preparation method,parotid gland tissue engineering”,共纳入74篇文献。结果与结论:大部分组织与器官脱细胞基质制备方法需要化学、生物(酶)、物理及以上几种方法联合使用,具体方法取决于组织与器官的厚度、组成和性质。虽然不是所有脱细胞方法均可去除组织与器官中的细胞成分,但完全去除细胞的组织与器官具有重塑组织特异性的优势,为接种细胞的增殖和分化提供有利的微环境。由于涎腺结构复杂和组织工程化在临床应用中的挑战,应用于患者的临床移植进展有限,该领域的体内研究仅限于动物,而基于颌下腺脱细胞基质生物支架材料方面的应用有望为涎腺组织工程提供有利的来源。

脱细胞神经支架对周围神经缺损修复的研究进展

周围神经缺损的修复治疗是临床工作中的一大难题,特别是〉3cm的长段神经缺损。各国学者着手于周围神经缺损的神经替代物和修复方法等方面的研究,目前研究的神经替代物主要有人工合成材料、自体神经、脱细胞神经支架等。除自体神经移植外,用于临床治疗的神经替代物其疗效多是不可预测或不能取得满意效果。

EDC交联结合化学萃取制备脱细胞脊髓支架及其生物学特性研究

[目的]采用EDC(碳化二亚胺)交联结合化学萃取法制备脱细胞脊髓支架,探讨脱细胞脊髓支架制备效率,分析支架的生物学特性,观察支架能否保留细胞外基质黏多糖成分。[方法]采用EDC交联结合化学萃取法(液氮结合42℃恒温水浴反复冻融6次+1%Triton X-100+1%脱氧胆酸钠+EDC交联+液氮结合42℃恒温水浴反复冻融6次+1%Triton X-100+1%脱氧胆酸钠)处理正常脊髓20根,得到脱细胞脊髓支架(支架组);对照于正常大鼠脊髓组织(对照组)。通过HE染色检验支架组脱细胞效果,统计脱细胞脊髓支架的等级评分"优"、"良"、"一般"、"差"的百分比;选取HE染色脱细胞彻底、评分为"优"的脊髓支架,DAPI染色验证其内部细胞残留情况的等级评分是否一致为"优";通过电镜扫描观察两组内部三维结构并分析其孔径;分析脊髓组织脱细胞处理前后的含水率、孔隙率、抗酶解性的变化;通过免疫组化的方法,观察两组材料细胞外基质中黏多糖分布情况。[结果]支架组通过HE染色观察到脱细胞彻底、评分为"优"的百分比为80%;HE染色观察评分为"优"支架经DAPI染色验证其内部细胞残留量评分也为"优";其三维结构完整,其孔径均值为9.07μm;含水率为(228.14±19.39)%;孔隙率为(71.82±2.10)%;在胰酶中,第20 h的酶解率平均为(35.904±1.911)%;免疫组化分析鉴定细胞外基质中包含一定的黏多糖。对照组中正常脊髓经HE染色和DAPI染色观察到大量细胞;三维网孔状结构,孔径均值为40.7μm;含水率和孔隙率分别为(109.32±12.44)%和(61.18±4.19)%;在胰酶中,第20 h的酶解率平均为(25.704±1.030)%;细胞外基质中包含大量的黏多糖成分。[结论]EDC交联结合化学萃取法制备的支架脱细胞彻底、制备效率高,具有三维网状结构、良好的含水率、空隙率、抗酶解性,一定程度上保留细胞外基质中黏多糖成分,符合组织工程学支架制备要求,为脊髓支架提供了一种新的选择。

京尼平交联大鼠脱细胞脊髓支架的制备及其生物力学特性研究

目的 构建京尼平交联大鼠脱细胞脊髓支架,探讨京尼平交联改性对大鼠脱细胞脊髓支架抗酶解能力、生物力学性能及细胞毒性的影响. 方法 采用化学萃取法制备大鼠脱细胞脊髓支架,再用5 g/L京尼平溶液进行化学交联改性.采用HE染色及扫描电镜观察未交联和京尼平交联大鼠脱细胞脊髓支架的微观结构,测量基质孔径大小.分别检测交联前后大鼠脱细胞脊髓支架的孔隙率、含水率以及在2.5 g/L胰酶溶液中的失重率.在Instron生物力学测试仪上检测正常大鼠胸段脊髓、未交联及京尼平交联大鼠脱细胞脊髓支架的极限牵张应力和弹性模量.将大鼠骨髓间充质干细胞分别在未交联和京尼平交联大鼠脱细胞脊髓支架浸提液中培养,采用MTT法检测细胞相对生长率,评价支架的细胞毒性. 结果 未交联和京尼平交联大鼠脱细胞脊髓支架拥有相似的三维网状孔隙结构,孔径大小约30 μm,孔隙率超过80％,两组间差异无统计学意义（P＞0.05）；京尼平交联支架的含水率为（229.7±12.5）％,显著低于未交联支架的（283.4±11.2）％（P＜0.05）；京尼平交联大鼠脱细胞脊髓支架在胰酶溶液中各时相点的失重率明显低于未交联支架（P＜0.05）,生物力学测试其极限牵张应力和弹性模量则显著增强（P＜0.05）；未交联和京尼平交联大鼠脱细胞脊髓支架均未观察到明显的细胞毒性. 结论 京尼平交联大鼠脱细胞脊髓支架拥有与未交联支架相似的结构,但生物力学性能和抗酶解能力明显增强,且无明显细胞毒性,在脊髓损伤修复的组织工程研究中具有良好的应用前景.

超声辅助脱细胞脊髓支架的生物学特性研究

目的采用超声振荡结合化学萃取法制备大鼠脱细胞脊髓支架，观察其三维结构及生物学特性，为脊髓组织工程研究提供理想的支架材料。方法采用超声振荡结合化学萃取（体积分数2％TritonX-100＋体积分数2％脱氧胆酸钠）方法对大鼠脊髓进行脱细胞处理（脱细胞脊髓组），对照正常大鼠脊髓组织（对照组），观察该脱细胞脊髓支架的大体形态、组织学及超微三维结构特点，并检测该支架材料的孔径大小、孔隙率、含水率、酶解率、在水溶液中稳定性等。结果脱细胞脊髓组原有的细胞成分被有效去除，具有（94．57±3．45）％的孔隙率和（88．62±1．0）％的含水率以及良好的三维空间结构（平均孔径为46μm），该支架在胰酶溶液中逐步降解，在第20小时达到（69．03±2．19）％，在双蒸水中逐步崩解，在第8天可达（62．55±1．70）％。正常脊髓组织结构紧密，含大量神经细胞及髓鞘，孔隙率和含水量分别为（0．04±0．02）％、（62．4±1．5）％，扫描电镜下未见明显孔隙结构，该支架在胰酶溶液中逐步降解，在第20小时达到（37．62±0．99）％，在双蒸水中逐步崩解，在第8天可达（40．97±0．81）％。结论超声振荡＋化学萃取所制备的脱细胞脊髓支架细胞成分去除彻底，细胞外基质成分保存完整，具有良好三维空间网状结构、良好的孔隙率和含水量，符合组织工程脊髓支架的理论要求，为组织工程脊髓支架提供理想的选择。

不同浓度曲拉通X-100对制备颌下腺脱细胞基质的影响

目的 探讨制备颌下腺脱细胞基质生物衍生支架材料过程中曲拉通X 10 0的最佳浓度。方法 用3组不同浓度的曲拉通X 10 0试剂对3 0个颌下腺腺体进行脱细胞处理,并通过光镜、透射电镜及扫描电镜观察。结果 0 .5 %和1%曲拉通X 10 0组脱细胞后,光镜下见大部分细胞轮廓存在,呈拥挤状态。透射电镜下见细胞膜破损,细胞器破碎,形成多个散在的碎块。扫描电镜下见细胞膜被破坏,表面呈丰窝状改变。而3 .0 %曲拉通X 10 0组脱细胞后,光镜下见颌下腺细胞成分完全消失,胶原纤维呈网状排列。透射电镜下见细胞器及细胞核消失,只见残留的细胞轮廓。扫描电镜下见细胞完全消失,只残留空虚的陷窝,基质胶原纤维粗细不等,相互交错呈网状结构。结论 在制备颌下腺脱细胞基质时曲拉通X 10 0试剂的最佳浓度是3 .0 %。

兔阴茎海绵体脱细胞基质的构建

组织工程支架——脱细胞海绵体基质筛选方法有待于进一步研究。本研究旨在检测脱细胞过程中形态学和组织学的变化，探讨阴茎海绵体脱细胞基质制备。