同种异体软骨脱细胞基质在关节软骨缺损中的应用研究

目的:探索使用同种异体软骨脱细胞基质( DCM)修复关节软骨缺损的效果及可能机制。方法:原代培养新西兰大白兔耳软骨细胞和骨髓间充质干细胞( BMMSCs),软骨细胞扩增后诱导形成软骨细胞膜片,将细胞膜片脱细胞处理后制作为DCM,冷冻干燥备用。将BMMSCs 附和在DCM 表面共培养,SEM 观察材料微观形态以及BMMSCs 与材料的附和情况。qPCR检测DCM 对BMMSCs 软骨向分化的影响。使用同种异体DCM 修复兔膝关节软骨缺损,3个月后使用HE 染色和免疫组织化学染色检测缺损修复效果。结果:成功培养出复层软骨细胞膜片并制作出DCM;在SEM 下观察可见BMMSCs 与DCM结合良好;并发现DCM 可诱导BMMSCs 分泌细胞外基质。qPCR检测发现DCM 促进BMMSCs 表达COL-II 和SOX-9 表达,抑制COL-I 和COL-X 表达,不影响Aggrecan 表达。动物实验显示DCM + BMMSCs 组关节软骨缺损的修复程度优于对照组。结论:同种异体DCM 可能是通过SOX-9 通路诱导BMMSCs 的软骨向分化,促进软骨缺损的修复。

骨髓间充质干细胞复合脱细胞软骨和富血小板血浆的体内成骨实验

目的:研究骨髓间充质干细胞(BMSCs)和富血小板血浆(PRP)复合物中加入脱细胞软骨碎块(DCM)后的成骨能力。方法:全骨髓贴壁法分离培养兔BMSCs;采集兔新鲜动脉血制备PRP;剪取新鲜兔耳碎化后用化学法脱细胞制备DCM,将BMSCs与PRP和DCM混合后注射到裸鼠皮下,8周后取材观察成骨情况。结果:体外实验显示本实验分离培养的BMSCs有较强的成骨、成脂分化能力,软骨碎块脱细胞效果理想,8周裸鼠体内结果取材苏木精-伊红染色(HE)和改良Massons染色显示类骨质和骨质较多,甲苯胺蓝(TB)染色显示剩余软骨成分较少。结论:BMSCs-PRP-DCM复合物诱导软骨内成骨。