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猪卵母细胞化学辅助手工去核及手工核移植胚胎发育能力因素的研究
被引量:
5
1
作者
任子利
赵彦玲
+3 位作者
杨小淦
陆阳清
卢晟盛
卢克焕
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第7期921-931,共11页
本研究在筛选猪化学辅助手工去核最佳脱羰秋水酰碱(Demecolcine,DC)浓度的基础上,探讨了各种因素对手工重构胚发育的影响,以期建立高效的猪手工体细胞核移植技术体系。观察不同成熟时间卵母细胞在不同DC浓度下的去核效率,并进一步比较...
本研究在筛选猪化学辅助手工去核最佳脱羰秋水酰碱(Demecolcine,DC)浓度的基础上,探讨了各种因素对手工重构胚发育的影响,以期建立高效的猪手工体细胞核移植技术体系。观察不同成熟时间卵母细胞在不同DC浓度下的去核效率,并进一步比较了化学辅助手工去核法和荧光染色去核法、不同类型的供体细胞(颗粒细胞、新生巴马肌肉成纤维细胞和胎儿成纤维细胞)和供体细胞的不同处理方法(70%~80%汇合、血清饥饿法和100%接触抑制法)对重构胚发育能力的影响。结果表明:(1)利用DC诱导去核,对体外成熟培养44h的卵母细胞以浓度0.4μg.mL-1作用0.5~1h为宜。(2)用DC化学辅助手工去核与用荧光染色去核的重构胚囊胚发育率差异不显著(13.11%vs 9.25%,P>0.05)。(3)以胎儿成纤维细胞、颗粒细胞和新生巴马小型猪肌肉成纤维细胞为供体构建的重构胚的融合率、卵裂率及囊胚率均差异不显著(P>0.05)。(4)用70%~80%汇合(对照组)组、接触抑制组和血清饥饿组的细胞作供体构建的重构胚,在融合率上,接触抑制组显著高于对照组(P<0.05);在分裂率与囊胚率上,各组之间均无显著差异(P>0.05)。研究结果表明,化学辅助手工去核法在实际生产中可以替代荧光染色去核法,能省去去核过程中荧光染色及紫外光照射去核等步骤,从而简化了猪手工体细胞核移植程序,提高了猪手工体细胞核移植效率,能为高效的猪手工体细胞核移植技术体系的建立提供参考。
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关键词
猪
化学辅助去核
脱羰秋水酰碱
手工体细胞核移植
下载PDF
职称材料
题名
猪卵母细胞化学辅助手工去核及手工核移植胚胎发育能力因素的研究
被引量:
5
1
作者
任子利
赵彦玲
杨小淦
陆阳清
卢晟盛
卢克焕
机构
广西大学动物繁殖研究所/亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室
西藏农牧学院动物科学学院
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第7期921-931,共11页
基金
国家自然科学基金项目(30860039)
农业部"转基因生物新品种培育重大专项":(2009ZX08010-023B)
+3 种基金
广西自然科学基金资助重点项目(2010GXNSFD013021)
西藏科技厅地区自然科学基金项目(2010年)
广西大学拔尖创新团队建设计划项目(2010年)
"211工程师资队伍建设项目(SZRC-211-01)"
文摘
本研究在筛选猪化学辅助手工去核最佳脱羰秋水酰碱(Demecolcine,DC)浓度的基础上,探讨了各种因素对手工重构胚发育的影响,以期建立高效的猪手工体细胞核移植技术体系。观察不同成熟时间卵母细胞在不同DC浓度下的去核效率,并进一步比较了化学辅助手工去核法和荧光染色去核法、不同类型的供体细胞(颗粒细胞、新生巴马肌肉成纤维细胞和胎儿成纤维细胞)和供体细胞的不同处理方法(70%~80%汇合、血清饥饿法和100%接触抑制法)对重构胚发育能力的影响。结果表明:(1)利用DC诱导去核,对体外成熟培养44h的卵母细胞以浓度0.4μg.mL-1作用0.5~1h为宜。(2)用DC化学辅助手工去核与用荧光染色去核的重构胚囊胚发育率差异不显著(13.11%vs 9.25%,P>0.05)。(3)以胎儿成纤维细胞、颗粒细胞和新生巴马小型猪肌肉成纤维细胞为供体构建的重构胚的融合率、卵裂率及囊胚率均差异不显著(P>0.05)。(4)用70%~80%汇合(对照组)组、接触抑制组和血清饥饿组的细胞作供体构建的重构胚,在融合率上,接触抑制组显著高于对照组(P<0.05);在分裂率与囊胚率上,各组之间均无显著差异(P>0.05)。研究结果表明,化学辅助手工去核法在实际生产中可以替代荧光染色去核法,能省去去核过程中荧光染色及紫外光照射去核等步骤,从而简化了猪手工体细胞核移植程序,提高了猪手工体细胞核移植效率,能为高效的猪手工体细胞核移植技术体系的建立提供参考。
关键词
猪
化学辅助去核
脱羰秋水酰碱
手工体细胞核移植
Keywords
porcine
chemical assisted handmade enucleation
demecolcine
handmade somatic cells nuclear transfer
分类号
S828 [农业科学—畜牧学]
S814.8 [农业科学—畜牧学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪卵母细胞化学辅助手工去核及手工核移植胚胎发育能力因素的研究
任子利
赵彦玲
杨小淦
陆阳清
卢晟盛
卢克焕
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
5
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