桃果实中脱落酸受体ABAR/CHLH结合区蛋白的原核表达、纯化及复性

为了剖析桃果实中脱落酸受体ABAR/CHLH蛋白的结合活性,从桃果实中提取总RNA,采用RT-PCR方法,以桃果实RNA逆转录的cDNA为模板,扩增出ABAR/CHLH基因的结合区功能片段C369,回收目的片段并测序,基因片段长度为1 121 bp,编码369个氨基酸残基,分子量约为40 kD。利用BamHⅠ和NotI酶切位点将该片段编码区插入原核表达载体pET-28a(+)中,构建ABAR/CHLH基因片段原核表达载体pET28a-C369,经菌落PCR和测序确证后,转化E.coliRosetta(DE3),通过IPTG诱导其表达His-CHLH融合蛋白。通过SDS-PAGE检测及Ni-NTA琼脂糖树脂亲和层析柱纯化目的蛋白,并用纯化复性的His-CHLH C369融合蛋白制备抗体。

玫瑰香葡萄果实中脱落酸受体ABAR/CHLH基因的克隆及其表达分析

为了探讨脱落酸受体ABAR/CHLH是否参与葡萄果实成熟的调控,以玫瑰香葡萄花后8～11周的果实为试材,结合RT-PCR和3’-RACE技术首先克隆了脱落酸受体ABAR/CHLH同源基因。该基因在基因组中以单拷贝形式存在,并编码了1个含有1 381个氨基酸的多肽。生物信息学分析表明,ABAR/CHLH含有3个跨膜区,在进化上高度保守。围绕果实花后8～11周ABAR/CHLH基因转录水平以及ABA含量分析表明,随着果实的退绿,在着色前基因转录水平和ABA含量都迅速增加,此后基因表达量迅速降低,而ABA含量继续缓慢上升至现红后才缓慢降低。因此,玫瑰香葡萄果实的成熟启动不仅依赖于ABA含量快速积累,而且还依赖于其受体基因表达水平迅速增加。

脱落酸受体及其信号转导

扼要介绍RNA结合蛋白FCA、编码Mg离子螯合酶的H亚基ABAR/CHLH和G蛋白偶联受体GCR2三种脱落酸受体的生物化学和分子生物学特性以及受体信号转导途径的研究进展。

草莓果实中脱落酸受体基因FaABAR/CHLH表达变化及其影响因素分析

为了探讨脱落酸调控草莓果实成熟的信号识别机制,以‘北农香’草莓花后1~4周的果实为试材,在克隆脱落酸受体基因FaABAR/CHLH的基础上,通过荧光定量PCR研究了果实发育过程中该基因表达量的变化及其影响因素。结果表明,草莓果实中脱落酸受体FaABAR/CHLH基因编码一个含有1381个氨基酸的蛋白,且该蛋白含有一个金属离子螯合酶H亚基超家族保守区。在果实发育的前期（小绿、大绿和浅绿果期）,FaABAR/CHLH基因表达量维持较高水平;随着果实的加速褪绿,其表达量迅速降低,至白果期降到最低点;随着果实着色启动,其表达量又迅速上升。ABA和高pH能促进FaABAR/CHLH基因在转录水平上的表达,而蔗糖则抑制该基因转录水平。草莓果实中脱落酸受体基因FaABAR/CHLH表达水平的变化进一步揭示了ABA在调控果实成熟中的重要作用。