脱酰胺酶处理改善豌豆分离蛋白功能特性及风味的研究

豌豆分离蛋白(PPI)的功能性和豆类特有的不良风味,限制了其在食品工业中更大范围的应用。本文通过脱酰胺酶处理豌豆分离蛋白,当加酶量在0.30%时,相对于对照组,其氮溶指数(NSI)提升了44.1%,乳化性提升了41.7%。凝胶强度也有了明显提升。同时采用气相离子迁移谱仪(GC-IMS)检测其挥发性成分,对引起豆腥味的风味成分进行对比分析,结果表明,相对于对照组实验蛋白粉,实验组中造成豆腥味的己醛、E-2-壬烯醛、正戊醇等挥发性风味物质有了明显的降低。因此可采用脱酰胺酶适度处理的方法,改善豌豆分离蛋白的功能性指标和风味。

滑液囊支原体二氢硫辛酰胺脱氢酶的诱导表达及生物学特性

为了获得滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)二氢硫辛酰胺脱氢酶(PdhD)的蛋白表达产物,分析蛋白的免疫原性,采用DNAStar Protean软件分析PdhD的二级结构和主要抗原域。将PdhD基因的第593、731、1712、1833 nt处的A突变为G,使改造成功的基因能够在大肠杆菌BL21中正确表达;经IPTG诱导后获得约70 ku的蛋白。对PdhD蛋白的622个氨基酸进行二级结构的预测,Garnier-Robson法预测出18个α螺旋中心、12个β折叠区段和17个T转角区段,Chou-Fasman法预测出24个α螺旋中心、23个β折叠区段和37个T转角区段,Karplus-Schulz法预测出42个柔性区域。PdhD的主要抗原域为Gln27-Phe36、Vla38-Val51、Ala89-Ala99、Pro137-Asp159、Gly307-Ile336、Gly369-Gly386、Gly397-Gln416、Ala433-Val447、Ieu486-Tyr504、Ala541-Asn549。免疫原性分析发现,PdhD重组蛋白能与兔源Anti-MS血清发生强烈反应,与兔源Anti-MG血清和兔源血清Blank均不发生反应。PdhD具有免疫原性,可作为候选抗原用于亚单位疫苗的研发。

溶藻弧菌二氢硫辛酰胺脱氢酶基因克隆及其生物信息学分析

根据溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)二氢硫辛酰胺脱氢酶(dihydrolipoamide dehydrogenase,DLD)的基因序列设计1对特异性引物。PCR扩增结果显示,DLD(GenBank登录号AGK62253)全长1 428 bp,共编码475个氨基酸残基。根据推导的氨基酸序列预测其分子质量约为50.998 ku,等电点为5.51。细胞定位、SignalP 4.0、TMHMM Server 2.0和SoftBerry-Psite预测结果显示,DLD位于细胞质中,在第29至30个氨基酸之间存在信号肽,不存在跨膜区,氨基酸序列含有1个Asn-糖基化位点、5个蛋白激酶C磷酸化位点、6个酪蛋白激酶II磷酸化位点等多个活性位点。系统进化树结果显示,溶藻弧菌DLD与副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)聚为一簇。用Kyte-Doolittle亲水性参数、Karplus-Schulz柔韧性参数、Emini表面可及性参数和Jameson-Wolf抗原性参数分别预测,DLD可能的B细胞抗原优势表位分别是第5~10、106~110、120~125、158~163和175~180区段。利用SWISS-MODEL软件,模拟DLD亚基三维结构模型,结果显示其与大肠杆菌(Escherichia coli)DLD蛋白有相似构型。Kegg分析发现,其涉及糖酵解和糖异生等9条信号通路。从生物信息学角度验证了DLD作为弧菌共同抗原的可行性。

早产大鼠高氧肺损伤组织还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶的动态表达及其意义

目的探讨还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶亚单位1、2、5在早产大鼠高氧肺损伤组织中的动态表达及其意义。方法早产新生大鼠生后1d随机分为高氧和空气组,高氧组持续暴露于850mL/L氧气中,空气组置同一室内常压空气中。分别取二组大鼠高氧或空气暴露后1、4、7、10和14d肺组织标本,采用HE染色观察肺组织形态学改变,采用RT-PCR法在mRNA水平检测NADH脱氢酶亚单位1、2、5的表达。结果1.高氧暴露1、4d,早产大鼠肺组织形态较空气组无明显改变;高氧暴露7、10d,肺组织渐出现小血管充血扩张,肺泡腔内炎性细胞浸润,肺泡间隔增厚,肺泡数目减少、结构简单化和囊泡化等改变。2.空气组NADH脱氢酶亚单位1(ND1)和亚单位2(ND2)mRNA的表达随日龄增长渐降低,至7d时最低,随后其表达逐渐增高;空气组NADH脱氢酶亚单位5(ND5)mRNA的表达随日龄增长渐降低,至4d时最低,随后其表达逐渐增高。3.与同时间点空气组相比,高氧暴露后1、4和7dND1和ND5mRNA表达显著增强(Pa<0.05),随后其表达渐下降,10、14d时低于空气组,但二者相比差异无显著性意义(Pa>0.05);与同时间点空气组相比,高氧暴露后1、4d ND2 mRNA表达二组间差异无显著性意义(Pa>0.05),7d时较空气组极显著增强(P<0.01),10、14d时较空气组显著降低(Pa<0.05)。结论高氧可导致早产大鼠肺组织NADH脱氢酶表达改变,提示其可能参与高氧肺损伤的病理生理过程。

枯草芽孢杆菌胞外二氢硫辛酰胺脱氢酶的纯化

采用弱阴离子树脂DEAE-52和蓝色琼脂糖凝胶FF层析对枯草芽孢杆菌产生的胞外二氢硫辛酰胺脱氢酶的粗酶液进行2步纯化,得到电泳纯的二氢硫辛酰胺脱氢酶,纯化倍数为59.7,收率为46.9%。通过SDS-PAGE法测得其亚基分子质量为64.6 ku,Superdex 75法测得其分子质量为67.5 ku,表明枯草芽孢杆菌WY34产胞外二氢硫辛酰胺脱氢酶为单亚基蛋白质。本研究采用的二氢硫辛酰胺脱氢酶的纯化方法,简便且收率较高。

高浓度氧对早产大鼠肺组织中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚单位1表达的影响

目的探讨高浓度氧暴露对早产大鼠肺组织中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚单位1(ND1)表达的影响。方法早产SD新生大鼠生后1 d随机分为高氧组和空气组,高氧组持续暴露于≥85%氧气中,空气组置于同一室内常压空气中。分别取两组大鼠高氧或空气暴露后1、4、7、10和14 d肺组织标本,采用免疫组织化学和Western blot方法检测ND1蛋白的表达,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测ND1 mRNA的表达。结果①高氧组和空气组各时间点均有ND1蛋白表达;与空气组相比,高氧组在1、4和7 d ND1蛋白表达增高,随后其表达下降。②与同时间点空气组相比,高氧暴露后1、4和7 d ND1 mRNA表达显著增高(P<0.05),其后ND1 mRNA表达逐渐下降,10 d和14d时低于空气组,但两者相比差异无显著性意义(P>0.05)。③ND1蛋白的表达变化趋势与ND1 mRNA的表达变化趋势一致。结论高氧导致早产大鼠肺组织ND1表达改变,提示ND1可能参与了高氧肺损伤的病理生理过程。

猪链球菌二氢硫辛酰胺脱氢酶的原核表达及其粘附相关功能初探

目的:克隆、表达猪链球菌2型菌株ZY05719的膜蛋白二氢硫辛酰胺脱氢酶基因(hm6),分析其重组蛋白的生物学活性。方法:基于GenBank中S.suis P1/7SSU1634蛋白的基因序列设计引物,克隆ZY05719株的二氢硫辛酰胺脱氢酶基因并进行序列分析;构建pET28a-hm6原核表达质粒,在大肠杆菌BL21中诱导表达,重组HM6蛋白即二氢硫辛酰胺脱氢酶用His亲和层析镍柱纯化后,通过SDS蛋白电泳鉴定分析并利用新西兰大白兔制备抗血清,研究其酶活性及其在介导猪链球菌粘附HEp-2细胞中的作用。结果:克隆了1 761bp的二氢硫辛酰胺脱氢酶基因,纯化的70kD重组融合蛋白具有良好的酶活性和免疫原性,且在介导猪链球菌粘附HEp-2细胞中具有作用。结论:成功克隆、表达了ZY05719株的二氢硫辛酰胺脱氢酶基因,初步揭示了其生物学活性,为深入研究二氢硫辛酰胺脱氢酶在猪链球菌致病机制中的作用奠定了基础。

具有还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶功能的家蚕l(3)neo18基因的克隆与表达特征

果蝇l(3)neo18基因可以通过P转座子诱发致死突变,编码的蛋白质具有还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶(ND)的功能。利用生物信息学、cDNA末端快速扩增(RACE)和反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)等方法,克隆了家蚕l(3)neo18同源基因,分析了基因结构与表达谱。Bm-l(3)neo18基因(EU826676)的cDNA全长为868 bp,由573 bp的完整开放读码框(ORF)序列、25 bp的5′端非翻译区序列(5′-UTR)和251 bp的3′端非编码区序列(3′-UTR)组成,编码蛋白质为190个氨基酸残基,分子质量22.7 kD,pI 9.60。Bm-l(3)neo18基因由3个外显子和2个内含子组成,定位于家蚕第3染色体,位于nscaf2930的1 203.8-1 205.6 knt。Bm-l(3)neo18蛋白质在1-185氨基酸残基位置为ND的SGDH亚基保守区,在61-83氨基酸残基位置具有一个保守的跨膜区域。采用Clustal W进行多序列比对发现,Bm-l(3)neo18与埃及伊蚊等昆虫ND具有50%以上的蛋白质同源性,ND的保守区域高度一致,NJ法分子进化分析也显示Bm-l(3)neo18与昆虫ND进化上同源。该基因除在家蚕卵期的表达量较低外,在幼虫、蛹和蛾期均有较高表达,且存在组织差异性。

基于计算机模拟探究鱼类烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶源活性肽抗运动疲劳的功效

为了研究鱼类烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(Nicotinamide Adenine Dinucleotide Dehydrogenase,NADH Dehydrogenase)源活性肽抗运动疲劳的功效,该研究利用计算机模拟水解5种我国常见鱼类中的NADH Dehydrogenase蛋白亚基,将模拟水解得到的寡肽与乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)、肌酸激酶(Creatine Kinase,CK)分别进行分子对接,确定与LDH和CK具有超高亲和力的寡肽(对接分数≤-160),并利用Pymol、Ligplot+软件分析寡肽与LDH和CK分子间相互作用机制。结果显示,5种鱼类的7种不同NADH Dehydrogenase蛋白亚基经计算机模拟水解和分子对接后共获得72个超高亲和力寡肽,其中,与LDH、CK均具有超高亲和力的寡肽共36种,对接分数最高且出现次数最多的寡肽是PTIW(-198.762、-204.400)。研究结果为提升鱼类蛋白质的高值化利用以及开发抗疲劳功能食品提供理论参考。

脑组织硫辛酰胺脱氢酶组化染色初探

一氧化氮（ＮＯ）是一新的信使分子，由一氧化氮合酶（ＮＯＳ）催化Ｌ－精氨酸形成。在脑组织，已证实ＮＯＳ就是依赖还原型辅酶Ⅱ的硫辛酰胺脱氢酶（ＮＤ）。因此在脑组织，经济、简单而又实用的ＮＤ组化染色可以替代昂贵、繁琐的ＮＯＳ免疫组化染色来间接知道ＮＯ的分布。本文对改进了的ＮＤ组化染色方法及其影响的几个关键问题作了介绍和探讨。

还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶染色法术中快速诊断婴幼儿先天性巨结肠的价值

目的探讨还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)酶组织化学染色法在术中快速诊断婴幼儿先天性巨结肠的价值。方法选取2015年1月至2017年3月新疆乌鲁木齐儿童医院收治的37例先天性巨结肠患儿术中切除的肠管为观察标本,以同期因坏死性小肠结肠炎行结肠造瘘术患儿的切除肠管标本作为实验对照,将先天性巨结肠患儿的肠管标本分为扩张段和痉挛段,进行常规冰冻连续切片,采用NADPH-d进行染色(NADPH-染色组),显微镜下观察神经丛及神经节细胞的染色情况,并与术中快速苏木精-伊红(HE)染色法(HE染色组)进行配对比较。结果 37例患儿中,NADPH-d染色诊断阳性36例(97.3%),阴性6例(2.7%);HE染色诊断阳性34例(91.9%),阴性3例(8.1%);2种染色方法均诊断阳性或阴性者分别为34例、1例,另2例NADPH-d染色诊断阳性者HE染色诊断为阴性;2种染色方法的诊断结果比较差异无统计学意义(χ~2=0.059,P>0.05)。NADPH-d染色组扩张段标本低倍镜下可见呈串珠状分布的神经丛样结构,高倍镜下可见细胞质着紫蓝色、细胞核空白无着色的细胞,HE复染显示串珠状分布的紫蓝色组织为肌间神经丛,黏膜下未见着紫蓝色的神经丛;高倍镜下可清楚分辨核大、深染、细胞质略呈蓝色的神经节细胞。NADPH-d染色组痉挛段标本镜下背景清晰,无任何着色,未见神经丛及神经节细胞。HE染色组扩张段标本肌间神经丛内隐约可见神经节细胞,痉挛段肌间及黏膜下可见分布杂乱的神经丛,其间无神经节细胞。结论 NADPH-d染色法诊断婴幼儿先天性巨结肠快速、精确、易操作,NADPH-d法与术中快速HE染色法联用能提高诊断效率,准确判断病变段肠管的切除范围。

脊髓损伤铜死亡关键基因二氢硫辛酰胺脱氢酶的生物信息学分析

目的:运用生物信息学分析铜死亡关键基因二氢硫辛酰胺脱氢酶(DLD)在脊髓损伤患者中的表达差异,并探讨其与脊髓损伤免疫微环境、相关信号通路之间的关系。方法:通过高通量基因表达数据库(GEO)获取脊髓损伤患者的相关数据集,采用R语言分析该数据集中对照组患者和脊髓损伤组患者铜死亡关键基因的表达差异;根据美国脊髓损伤协会(ASIA)分级,将脊髓损伤患者分为脊髓损伤轻度组患者和脊髓损伤重度组患者,采用R语言分析对照组患者和不同脊髓损伤分级患者中DLD的表达差异。采用免疫细胞浸润分析探究DLD与脊髓损伤患者不同类型免疫浸润细胞之间的相关性;采用STRING数据库筛选与DLD作用的相关基因,并进行基因集富集分析(GSEA)。结果:DLD和金属调节转录因子1(MTF1)在脊髓损伤组(1.51±0.12、1.83±0.14)中的表达明显高于对照组(1.24±0.11、1.47±0.13,t=8.58、9.12,P<0.05);脂酰转移酶1(LIPT1)、硫辛酰合成酶(LIAS)、谷氨酰胺酶(GLS)和铁氧还蛋白(FDX1)在脊髓损伤组(0.97±0.09、0.17±0.02、0.81±0.08、0.69±0.06)中的表达明显低于对照组(1.21±0.10、0.30±0.03、1.02±0.07、0.94±0.07,t=7.67、14.72、7.88、11.21,P<0.05)。脊髓损伤轻度组患者(1.44±0.12)的DLD表达水平明显高于对照组患者(1.24±0.11,t=6.83,P<0.05);脊髓损伤重度组患者(1.62±0.14)的DLD表达水平明显高于脊髓损伤轻度组患者(1.44±0.12,t=6.35,P<0.05)。相关性分析结果显示,DLD与M2巨噬细胞水平呈明显的正相关(R=0.36,P=7.5e-03);与CD8^(+)T细胞、初始CD4^(+)T细胞水平呈明显的负相关(R=-0.42,P<0.05;R=-0.40,P<0.05)。结论:DLD在脊髓损伤患者中高表达,且与脊髓损伤的严重程度和免疫微环境密切相关。

中国汉族人依赖还原型辅酶Ⅰ/Ⅱ醌氧化还原酶基因多态性

目的：确定中国汉族人依赖还原型辅酶Ⅰ／Ⅱ［ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ：］醌氧化还原酶（ＮＱＯ１）基因ｃＤＮＡ的６０９位点Ｃ→Ｔ（Ｃ６０９→Ｔ）突变的频率分布。方法：利用聚合酶链反应限制性片段长度多态性（ＰＣＲＲＦＬＰ）技术分析了８１名正常中国汉族人ＮＱＯ１基因ｃＤＮＡ的６０９位点的多态性。结果：中国汉族人ＮＱＯ１基因的Ｃ６０９→Ｔ的频率为０４２６；基因型Ｔ６０９／Ｔ６０９、Ｃ６０９／Ｃ６０９与Ｃ６０９／Ｔ６０９的比率分别为０１７、０３２和０５１。结论：该结果提示中国汉族人ＮＱＯ１基因的Ｃ６０９→Ｔ位点的多态性分布规律与西方人有明显的差异。

大鼠肺一氧化氮合酶阳性神经结构

以还原型尼克酰腕腺嘌呤二核苷酸磷酸硫辛酰胺脱氢酶组织化学技术研究大鼠肺一氧化氮合酶阳性神经结构。结果表明:(1):气管、支气管树系统壁内神经节部分神经细胞为一氧化氮合酶阳性神经细胞;(2)部分强阳性神经细胞的突起穿越神经节延向管壁粘膜组织或肺组织;(3)在各级肺动、静脉及肺组织内分布有不同密度的一氧化氮合酶阳性神经纤维。

脑组织一氧化氮合成酶的特性及其与NADPH－diaphorase相关性研究

采用Ｌ－~３Ｈ精氨酸转化法实验，建立了一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）测定法，并对大鼠和牛脑组织ＮＯＳ的生化特性以及大鼠脑组织ＮＯＳ的分布进行研究。结果表明：大鼠和牛小脑提取液ＮＯＳ酶活性存在时间和剂量依赖性，大鼠小脑ＮＯＳ底物Ｌ－Ａｒｇ的Ｋｍ值为１．６μｍｏｌ／Ｌ，Ｖｍａｘ为２３．９ｐｍｏｌ·ｍｇ^（－１），ｍｉｎ^（－１）；大鼠小脑ＮＯＳ依赖于Ｃａ^（２＋）、钙调蛋白（ＣａＭ）、尼克酰胺脱氢酶Ⅱ（ＮＡＤＰＨ）和四氢生物喋呤（ＢＨ＿４），其ＥＣ＿（５０）分别为０．５５ｍｍｏｌ／Ｌ、３３ｎｍｏｌ／Ｌ、３２．５μｍｏｌ／ Ｌ、０．４３μｍｏｌ／Ｌ。３ｍｍｏｌ／ＬＥＧＴＡ可以完全抑制大鼠小脑提取液ＮＯＳ活性；１ｍｍｏｌ／ＬＣａＭ拮抗剂三氟啦嗪（ＴＦＰ）能完全抑制ＮＯＳ活性，其ＩＣ＿（５０）为１．７２μｍｏｌ／Ｌ；ＮＯＳ抑制剂ＮＧ－甲基－Ｌ－精氨酸（Ｌ－ＮＭＡ）能够竞争性抑制ＮＯＳ活性，其ＩＣ＿（５０）为１．５６μｍｏｌ／Ｌ。对与ＮＯＳ具有同源性尼克酰胺脱氢酶Ⅱ黄递酶（ＮＡＤＰＨ－ｄ）活性进行研究，发现ＮＯＳ仅是ＮＡＤＰＨ－ｄ活性的一部分。大鼠神经组织中小脑ＮＯＳ活性最高，其次为嗅球、下丘脑和纹状体，而脊髓最低；大鼠神经组织?

高浓度氧暴露对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸表达的影响

目的探讨高浓度氧(高氧)暴露对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)-脱氢酶亚基4(ND4)表达的影响。方法原代培养早产Sprague-Dawley(SD)大鼠AECⅡ,待其在含50mL/L二氧化碳(CO2)培养箱中生长至接近融合状态时随机分为高氧组和空气组。高氧组持续暴露于常压高浓度氧中,氧体积分数>900mL/L,CO2体积分数为50mL/L;空气组仍置于含50mL/L CO2培养箱中。二组分别于高氧或空气暴露6、12、24h提取细胞RNA,采取半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定ND4 mRNA的表达;采用免疫细胞化学染色法检测细胞爬片ND4蛋白的表达。结果与空气组比较,免疫细胞化学结果显示高氧暴露6、12h ND4的表达无显著性差异(Pa>0.05),高氧暴露24h ND4的表达显著减弱(P<0.05);RT-PCR检测显示高氧暴露6h ND4 mRNA表达无显著性差异(P>0.05),高氧暴露12、24h ND4 mRNA表达显著减弱(Pa<0.05)。结论高氧暴露下调早产SD大鼠AECⅡ ND4 mRNA和蛋白水平的表达,这种改变可能参与高氧肺损伤的发病过程。

大鼠乌头碱中毒心肌酶的研究(Ⅲ)——线粒体NADHD的组织化学和细胞化学研究

本文用组织化学和细胞化学方法分别对乌头碱染毒后不同时间组大鼠心肌NADHD进行了光镜和电镜观察。结果表明:乌头碱染毒后30分钟,2小时和4小时的大鼠心肌NADHD活性明显降低并有定位改变,而染毒后12、24小时的心肌NADHD活性有所回升。证实产能较多的NADH氧化呼吸链在乌头碱中毒时受到抑制。

一氧化氮合酶在大鼠杏仁基外侧核传入神经元内的分布

目的:研究一氧化氮合酶(NOS)在大鼠杏仁基外侧核(BLA)传入投射神经元中的分布。方法:采用霍乱毒素B亚单位(CTb)逆行追踪和还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)组织化学双重染色相结合的方法。结果:双标神经元(NADPH-d/CTb)主要分布在孤束核、蓝斑、臂旁内侧核、中缝背核、中央灰质背侧部、丘脑室旁核、下丘脑室旁核、下丘脑室周核、下丘脑腹内侧核以及杏仁内侧核等神经核团。结论:NOS在大鼠BLA传入投射神经元中主要分布于上述核团,并且提示NO参与BLA的功能调节。

磷化氢的毒理及害虫对磷化氢的抗性机制研究进展

近60年来,熏蒸剂磷化氢被广泛用于储藏物害虫的防治。但是,长期、不合理地使用磷化氢,导致储藏物害虫抗药性的广泛产生。了解磷化氢的毒理机制可以为磷化氢抗性机制研究提供思路。早期的研究发现,磷化氢通过干扰神经传导、抑制能量代谢和破坏氧化还原系统,引起害虫死亡;但近年的研究表明,磷化氢致死害虫的主要机制是抑制能量生成和通过干扰氧化还原系统来增加氧化损伤。早期的研究发现,害虫对磷化氢的抗性机制主要包括主动排斥磷化氢、保护性昏迷和增强解毒酶活性。近年来,随着基因组学、蛋白组学和代谢组学的应用,相继出现一些新的磷化氢抗性机制,如穿透抗性、磷化氢作用靶标敏感性降低、能量代谢模式调整。越来越多的研究表明,靶标二氢硫辛酰胺脱氢酶突变以及抗氧化酶和解毒酶活性增强是主要的抗性机制,而能量代谢模式调整可能是抗性形成初期抵抗磷化氢不良影响的重要机制。采用基因渐渗的方法研究害虫磷化氢抗性突变的适合度代价可以更精准地预测抗性突变的进化方向。研究害虫的磷化氢抗性机制和抗性突变的进化潜力不仅有助于理解害虫抗药性的形成和生物的进化,同时对害虫的磷化氢抗性监测和治理有重要的意义。

铜绿假单胞菌二氢硫辛酸酰胺脱氢酶的重组表达及其与脂蛋白(a)的相互作用

【目的】二氢硫辛酸酰胺脱氢酶(Dihydrolipoamide dehydrogenase,Lpd)是铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)表面的一种纤溶酶原(Plasminogen,Plg)受体,旨在研究Lpd与脂蛋白(a)[Lipoprotein(a),Lp(a)]以及Plg之间的相互作用。【方法】用大肠杆菌表达rLpd及其突变分子(rLpd K476A、rLpd K477A、rLpdΔKKR),用酶联免疫吸附实验(ELISA)、亲和色谱层析及Western blot等技术检测rLpd及其突变分子与Lp(a)、Plg的相互作用。【结果】ELISA及亲和色谱层析实验结果表明,rLpd可以与Lp(a)结合但不与LDL结合,Lp(a)与rLpdΔKKR的结合能力显著低于其与rLpd的结合能力。1 mmol/L的赖氨酸类似物6-氨基己酸(EACA)对rLpd与Lp(a)的结合有显著的抑制作用。1 000μg/L的Lp(a)对rLpd与Plg的结合起到显著的抑制作用。【结论】Lpd能够与Lp(a)特异性结合,其476和477两个相邻的赖氨酸残基是与Lp(a)结合的主要位点,Lp(a)可以竞争性地抑制rLpd与Plg的结合。