脲梯度电泳方法的技术关键

介绍在应用丙烯酸胺－脲梯度电泳技术进行蛋白质折叠、去折叠研究工作中的实验步骤和技术关键，并在文献方法的基础上作了改进。通过加入１５％～０％的甘油，抵消在凝胶中由于脲浓度不同而引起的溶液粘度变化，保证在凝胶上脲浓度不同的部位对蛋白质保持同样的电泳阻力，防止前沿偏斜．采用核黄素光照催化合脲凝胶的聚合，以防止凝胶在梯度灌制完成前发生聚合．加浓缩胶和样品梳于脲梯度胶上可较好地克服边缘效应，获得好的样品迁移图谱．

脲梯度体积排阻色谱复性并同时纯化rhSCF

目的:用脲梯度体积排阻色谱(SEC)复性并同时纯化在大肠杆菌中高表达的人干细胞因子.方法:采用脲梯度SEC,根据蛋白质与小分子物质分离过程的迁移速度不同的原理,在色谱过程中通过脲浓度的线性梯度洗脱方式脱除变性剂脲而达到蛋白复性并同时纯化.结果:用脲梯度SEC复性重组人干细胞因子(rhSCF)能够使复性蛋白的产率提高,色谱过程中洗脱长度、流速以及蛋白浓度的变化对蛋白复性效率都有不同的影响.结论:用脲梯度SEC复性rhSCF可以使复性产率提高,其质量回收率从35.2%提高到51.4%.

脲梯度扩张床吸附层析复性重组人γ-干扰素

针对固定床吸附层析技术用于蛋白质体外重折叠复性时,折叠聚集中间体易聚集造成床层堵塞等问题,将扩张床吸附层析技术应用于重组人γ-干扰素包涵体蛋白质的复性研究,并与脲浓度线性梯度法相结合,考察了脲梯度长度和脲终浓度对重组人γ-干扰素复性的影响.复性后的重组人γ-干扰素的纯度达90%;较长的脲梯度长度和合适的脲终浓度有利于蛋白质的复性;在较优的实验条件下,复性后的重组人γ-干扰素收率为53.7%,比活达9.75×106IU/mg.脲梯度扩张床吸附层析法具有处理量大的优点,能有效地复性重组人γ-干扰素包涵体,并能实现复性和分离包涵体蛋白质过程的集成化.

一种脲梯度电泳的简便方法

目的与方法：介绍了一种应用国产ＤＹＹ－Ⅲ小型电泳槽进行脲梯度电泳的方法。结果与结论：该法操作简便，普适性好，能获得好的样品迁移图谱。可用于蛋白质变性／复性的研究及原核基因工程产品复性工艺的探索。

抗肿瘤血管抗体AA98功能片段V_H/κ的脲浓度梯度柱复性

利用稀释法、凝胶过滤、脲浓度梯度凝胶过滤 3种方法研究了抗肿瘤血管抗体功能片段VH/κ的体外复性 .通过考察复性液中还原型谷胱甘肽 /氧化型谷胱甘肽 (GSH/GSSG)比例、精氨酸浓度、pH值、洗脱速度、变性液中蛋白质浓度、凝胶过滤脲梯度长度等因素 ,发展了脲梯度凝胶过滤柱复性VH/κ的方法 .结果表明 ,与传统的稀释法和柱复性法相比 ,脲梯度法复性获得的VH/κ的活性回收率和相对亲和力均有显著提高 .

蛋白质的层析折叠复性

针对包涵体蛋白质复性回收率低，容易凝集的难点，探讨了利用各种层析如：金属鳖合层析，亲和层析，离子交换层析和凝胶过滤层析进行蛋白质折叠复性的原理及应用。在前人工作的基础上发展了一种变性剂浓度梯度凝胶过滤复性蛋白质的新技术。该技术避免了以往凝胶过滤层析复性中变性剂浓度的突然变化。在将其应用于溶菌酶的折叠复性中收到了很好的效果。可以在高蛋白质浓度下得到较高的活性回收率，显示了很大的优越性。为蛋白质层析复性技术的发展提供了新的手段。