基于NF-κB通路探讨疏肝健脾含药血清对LPS刺激下大鼠肝细胞、Kupffer细胞炎症损伤保护作用机制研究

目的基于核转录因子kappa B（nuclear transcription factor-kappa B,NF-κB）信号通路探讨脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）刺激大鼠肝细胞及Kupffer细胞炎症损伤以及疏肝健脾含药血清的保护作用。方法通过体外培养以及免疫荧光鉴定SD大鼠肝细胞及Kupffer细胞,利用LPS刺激大鼠肝细胞及Kupffer细胞产生炎症反应,酶联免疫法检测肝细胞及Kupffer细胞培养上清液中白介素-1（interleukin-1,IL-1）、人血清淀粉样蛋白（serum amyloid A,SSA）的表达,Western blot法检测大鼠肝细胞及Kupffer细胞NF-κB通路相关蛋白的表达。结果每只大鼠通过纯化后获得肝细胞数量1.5×108~2.0×108个,Kupffer细胞数量0.5×107~1.0×107个,Typan blue染色测定肝细胞及Kupffer细胞活力均可达到95%以上。LPS组肝细胞及Kupffer细胞较空白血清组IL-1、SSA水平均有显著升高（P〈0.01）。而与LPS组比较,药物干预组可显著降低（P〈0.01）。肝细胞、Kupffer细胞的蛋白表明,与空白血清组比较,LPS组肝细胞及Kupffer细胞NF-κB、IκB及磷酸化IKKβ蛋白表达均有显著升高（P〈0.01）;与LPS组比较,疏肝健脾方药含药血清能显著下调肝细胞IκB及p-IKKβ蛋白的蛋白表达水平（P〈0.01）,但NF-κB蛋白表达水平无显著差异（P〉0.05）,疏肝健脾含药血清能下调Kupffer细胞NF-κB、IκB及p-IKKβ蛋白表达（P〈0.01）。结论疏肝健脾含药血清能够对LPS刺激大鼠肝细胞、Kupffer细胞炎症损伤产生保护作用,其机制可能与NF-κB信号通路相关。

不同电针刺激频率和频度对小鼠免疫功能的作用

目的在小鼠上探讨不同电针(EA)刺激频率和频度对其免疫功能的作用。方法应用细胞生物学和MTT方法,检测不同电针刺激频率和频度对小鼠脾指数、NK细胞活性和T细胞增殖能力等免疫学指标的影响。结果电针1次后,分别在0,24和48h时间点检测小鼠的脾指数、脾脏NK细胞活性及T细胞增殖能力,2 Hz、100 Hz和2/100 Hz EA刺激均无明显影响。连续电针3 d(每天1次)后,2Hz、100Hz和2/100 Hz EA对脾指数均无明显影响;100Hz EA显著降低NK细胞活性(P<0.05),2/100 Hz EA明显升高NK细胞活性(P<0.05),而2Hz EA无明显影响;2Hz EA显著升高脾脏T细胞增殖能力(P<0.01),而100Hz和2/100 Hz EA均无明显影响。结论电针对小鼠脾指数、NK细胞活性和T细胞增殖能力的作用存在频率和频度的特异性,这将为临床应用电针治疗与免疫相关疾病提供理论和实验依据。

中药肠炎康对溃疡性结肠炎大鼠免疫功能的影响

目的 :探讨溃疡性结肠炎 ( UC)发病过程中的免疫异常机制及中药肠炎康 ( CYK)口服液对本病的治疗机理。方法 :通过免疫方法成功复制 UC大鼠模型 ,应用 CYK口服液及对照药物柳氮磺胺吡啶 ( SASP)分别灌胃治疗 5 0 d,观察并分析治疗前后脾细胞 Con A刺激指数、LPS刺激指数、IL- 2、IFN- r水平及 NKc杀伤活性变化。结果 :模型组大鼠脾细胞 Con A刺激指数、NKc杀伤活性明显下降 ( P<0 .0 1 ) ,IL- 2、IFN- r水平也有下降 ( P<0 .0 5 ) ;而脾细胞 LPS刺激指数明显升高( P<0 .0 5 )。治疗后 ,CYK组大鼠脾细胞 Con A刺激指数、IL- 2、IFN- r水平及 NKc杀伤活性同模型组比较均有明显提高 ;但脾细胞 LPS刺激指数同模型组比较差异无显著性 ( P>0 .0 5 )。SASP组大鼠脾细胞 LPS刺激指数同模型组比较明显下降 ( P<0 .0 5 ) ;其 IL- 2、IFN- r水平及 NKc杀伤活性同模型组比较差异无显著性 ( P>0 .0 5 )。结论 :溃疡性结肠炎大鼠细胞免疫功能减退 ,体液免疫增强。CYK能促进 UC大鼠肠粘膜溃疡修复及炎症消退 ,在恢复其细胞免疫功能方面 ,优于 SASP,但对 UC大鼠体液免疫的抑制作用不及 SASP。

低剂量粒细胞巨噬细胞集落刺激因子诱导的小鼠骨髓未成熟树突状细胞抗成熟特性的研究

目的 观察内毒素 /脂多糖 (LPS)、肿瘤坏死因子α(TNF α)、干扰素γ(IFN γ)等促成熟物质对低剂量粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (rmGM CSF)诱导的小鼠骨髓未成熟树突状细胞 (DC)成熟特性的影响。 方法 制备小鼠骨髓细胞 ,分别用不同剂量rmGM CSF培养 ,6d后收集悬浮细胞进行检测。用LPS、TNF α、IFN γ与小剂量rmGM CSF培养获得的DC(GMlowDC)共同孵育 3d后 ,行混合淋巴细胞反应 ,观察其诱导未致敏脾淋巴细胞增殖的情况 ,并与大剂量rmGM CSF培养获得的DC(GMhighDC)进行比较。 结果 GMlowDC不能激活未致敏脾淋巴细胞 ,且在与LPS、TNF α和IFN γ共同培养 3d后 ,仍不能有效诱导未致敏脾淋巴细胞增殖 ,刺激指数 (SI)均 <2 .0 0 ;而GMhighDC刺激未致敏脾淋巴细胞增殖的能力较强 ,SI为 4 .71。 结论 GMlowDC具有对LPS、TNF α和IFN γ刺激不敏感的抗成熟特性。

胎盘感染小鼠巨细胞病毒对孕鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响

目的:观察小鼠巨细胞病毒(MCMV)胎盘感染后孕鼠脾淋巴细胞增殖反应的变化。方法:用ELISA法筛选无MCMV感染史性成熟期小鼠,雌雄同笼受孕。孕龄12.5天时,模型组胎盘显微注射MCMV,对照组注射细胞维持液。在孕龄18.5天处死母鼠。通过正交实验筛选MTT实验最佳条件,以MTT比色法检测小鼠脾淋巴细胞刺激指数。结果:对照组刺激指数(1.395±0.064),模型组刺激指数(0.975±0.029),两组差异具有统计学意义(P<0.01);两组变异系数分别为4.6%及2.9%,均小于5%。结论:MTT法是评价脾淋巴细胞增殖反应的稳定方法。胎盘感染MCMV明显降低孕鼠脾淋巴细胞的增殖活力。

红党参多糖对免疫力低下模型小鼠免疫功能的影响

目的研究红党参多糖对免疫力低下模型小鼠免疫功能的调节作用。方法将50只SPF级昆明种小鼠采用随机数字表法分为空白组、模型组、阳性对照组、党参多糖组、红党参多糖组5组,每组10只。各组灌胃相应药物混悬液或蒸馏水,每天灌胃1次,连续灌胃10 d。给药第4天,除空白组外,其余各组小鼠均腹腔注射环磷酰胺50 mg/kg,连续注射3 d,复制免疫力低下小鼠模型。给药结束后,比较各组小鼠的碳粒廓清指数K值、吞噬指数α值、脾指数、胸腺指数、脾细胞增殖刺激指数。结果与空白组比较,模型组碳粒廓清指数K值、吞噬指数α值、脾指数、胸腺指数、脾细胞增殖刺激指数均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,阳性对照组、党参多糖组、红党参多糖组吞噬指数α值、脾指数、胸腺指数、脾细胞增殖刺激指数均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),阳性对照组、红党参多糖组碳粒廓清指数K值均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);除脾指数外,红党参多糖组其余各项指标均明显高于党参多糖组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论红党参多糖能提高免疫力低下模型小鼠的免疫功能,且其作用优于党参多糖。