白藜芦醇对热应激诱导肉鸡脾脏淋巴细胞增殖及凋亡的作用研究

本试验旨在研究白藜芦醇对热应激诱导肉鸡脾脏淋巴细胞增殖及凋亡的作用。本试验通过分离和消化白羽肉鸡脾脏组织,成功培养出原代淋巴细胞,并能稳定传代。通过构建正常细胞模型(37℃)和热应激细胞模型(42℃培养3 h),培养鸡脾脏淋巴细胞,并分别添加不同剂量的白藜芦醇(15、30、60μg/mL)。运用CCK8法测定热应激对脾脏淋巴细胞存活率的影响;取脾脏淋巴细胞上清液,用乳酸脱氢酶(LDH)法测量LDH活性;采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)染色法检测脾脏细胞凋亡水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测凋亡蛋白的含量;提取总RNA,用实时荧光定量PCR法测量热休克蛋白70(HSP70)基因相对表达量的变化;提取总蛋白,用Western blot法检测HSP70、肿瘤抑制因子53(p53)、凋亡激活因子-1(APAF-1)、肿瘤抑制因子65(p65)、核因子κB抑制蛋白(IκB)、肿瘤抑制因子38(p38)蛋白表达量。结果表明:热应激处理导致淋巴细胞增殖显著下降(P<0.05),LDH活性显著增加(P<0.05)。用15、30、60μg/mL白藜芦醇处理脾脏淋巴细胞并热应激培养时,细胞增殖呈剂量依赖性增加(P<0.05),LDH活性显著下降(P<0.05)。热应激会造成淋巴细胞凋亡和损伤,添加白藜芦醇后显著降低了细胞凋亡率(P<0.05)。热应激导致淋巴细胞的p53含量和p53蛋白表达量显著增加(P<0.05),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)含量显著降低(P<0.05),Bcl-2相关X蛋白(Bax)含量显著增加(P<0.05)。热应激时添加或正常条件下添加白藜芦醇会使Bcl-2含量显著增加(P<0.05),Bax含量显著降低(P<0.05),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(Caspase 9)含量显著降低(P<0.05),APAF-1的蛋白表达量显著降低(P<0.05)。热应激时添加白藜芦醇对p53蛋白表达量没有显著影响(P>0.05)。综上所述,白藜芦醇可以剂量依赖性增加细胞增殖、减轻细胞凋亡等,从而减轻热应激导致的脾脏淋巴细胞的损伤。

饲粮维生素E缺乏对雏鸡生长性能及脾脏淋巴细胞凋亡的影响

试验旨在研究饲粮中维生素E缺乏对雏鸡生长性能、脾脏组织和脾脏淋巴细胞形态结构、脾脏淋巴细胞凋亡相关蛋白和基因表达水平的影响。选取1日龄雄性雏鸡160羽,随机分为2组,饲粮维生素E缺乏试验组的预混料中不添加维生素E,对照组额外添加维生素E(30 mg/kg),每组各80羽,每组10个重复,每个重复8羽,试验期40 d。结果表明:试验组雏鸡平均日增重低于对照组(P<0.05),耗料增重比高于对照组(P<0.05);试验组雏鸡脾脏组织和脾脏淋巴细胞中维生素E含量低于对照组(P<0.05);试验组雏鸡脾脏组织和脾脏淋巴细胞结构出现损伤;试验组雏鸡脾脏淋巴细胞中Caspase-3活性高于对照组(P<0.05);试验组雏鸡脾脏淋巴细胞中Bcl-2的mRNA表达量低于对照组(P<0.05),p53和Caspase-3的mRNA相对表达量高于对照组(P<0.05)。由此可见,饲粮中维生素E缺乏将导致雏鸡生长性能显著降低;维生素E缺乏通过提高脾脏淋巴细胞中Caspase-3活性,影响Bcl-2、p53和Caspase-3基因表达诱导脾脏淋巴细胞凋亡。

中药成分对培养的鸡脾脏淋巴细胞增殖的影响

为筛选增强免疫作用较好的中药成分和研制新型复方中药成分免疫增强剂,比较了4种浓度的当归多糖(CAPS)、黄芪多糖(APS)、板蓝根多糖(IRPS)、淫羊藿多糖(EPS)、蜂胶多糖(PPS)、淫羊藿黄酮(EF)、蜂胶黄酮(PF)、黄芪皂苷(AS)和人参皂苷(GS)9种中药成分对培养的鸡脾脏淋巴细胞增殖的影响。结果表明,多数中药成分能促进淋巴细胞增殖,其中APS、EPS、GS和AS等在一定浓度既能单独又能协同ConA或LPS刺激淋巴细胞增殖,以EPS和APS作用最强。同时根据浓度试验结果,选出各药的合适浓度,进一步比较它们作用的差异,发现EPS和GS效果最好。这些中药成分可以作为复方中药成分免疫增强剂的组分药。

板蓝根多糖对体外培养的猪脾脏淋巴细胞增殖及分泌细胞因子和NO的影响

用MTS比色法测定了不同质量浓度的板蓝根多糖对体外培养的猪脾脏淋巴细胞增殖的影响,分别用ELISA法和硝酸还原酶法测定了板蓝根多糖对猪脾脏淋巴细胞分泌IL-2,IL-4,IFN-γ和NO的影响.结果表明,板蓝根多糖能显著促进猪脾脏淋巴细胞的增殖,同时又能协同ConA或LPS诱导的猪脾脏淋巴细胞增殖(P<0.05);能显著促进由ConA诱导的猪脾脏淋巴细胞分泌IFN-γ,抑制IL-2的分泌,对IL-4分泌的影响不明显;低剂量板蓝根多糖能显著促进NO的分泌(P<0.01).

不同桑叶提取物对小鼠脾脏淋巴细胞增殖能力的影响

试验旨在比较不同桑叶提取物对小鼠脾脏淋巴细胞增殖作用的影响。用不同浓度乙醇醇沉桑叶水提物,制备桑叶粗多糖MLP-1、MLP-2、MLP-3、MLP-4、MLP-5,采用苯酚硫酸法测定各提取物多糖含量。以5种桑叶粗多糖和桑叶水提物(MLAE)为试验药物,采用MTT法比较多糖含量分别在15.625、31.25、62.5、125、250μg/mL浓度时各提取物单独刺激及协同LPS、PHA共同刺激小鼠脾脏B、T淋巴细增殖的变化。结果显示,多糖浓度在15.625~250μg/mL范围内,各提取物无论单独还是协同LPS和PHA时均能促进小鼠脾脏B、T淋巴细胞的增殖,其中,MLP-1多糖含量在低浓度时能显著刺激脾脏B淋巴细胞增殖(P<0.05);MLP-3和MLP-5在低浓度时表现出较强的刺激T淋巴细胞增殖的能力;MLAE协同LPS在大部分浓度点的脾脏B淋巴细胞的增殖能力均显著高于细胞对照组和LPS对照组,可显著提升体液免疫功能(P<0.05)。

偏头痛肝阳上亢型大鼠脾脏淋巴细胞的比较蛋白质组学分析

目的筛选与偏头痛肝阳上亢型相关的蛋白质,进一步揭示偏头痛肝阳上亢证的分子机制。方法用电刺激SD大鼠三叉神经节,并灌服附子汤的方法制造偏头痛肝阳上亢型模型。采用双向凝胶电泳(2-DE)技术分离偏头痛肝阳上亢型大鼠脾脏淋巴细胞的总蛋白,PDQuest7.0图像分析软件识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱得到相应的肽质量指纹图,搜索数据库鉴定蛋白质。结果鉴定到的10个差异蛋白分别为:氯通道蛋白-1、硫氧还蛋白过氧化物酶-Ⅰ、硫氧还蛋白过氧化物酶-Ⅱ、专利蛋白WO979348序列、Rho GDP解离抑制因子α、肌动蛋白2/3复合物、神经微丝轻肽、蛋白酶体、热休克蛋白-27、膜联蛋白-A1。结论这些蛋白可能与偏头痛肝阳上亢证的形成有关,本实验为进一步揭示偏头痛肝阳上亢证的发病机制提供了新的线索。

马尾藻多糖对鸡脾脏淋巴细胞增殖及氧化应激影响的实验观察

马尾藻具有很高的食用和药用价值,分离提取马尾藻多糖(Sargassum polysaccharides,SP),对其理化性质进行分析;研究马尾藻多糖对氧化应激态鸡脾脏淋巴细胞内谷胱甘肽(GSH)和一氧化氮(NO)分泌水平及淋巴细胞体外增殖的影响。结果表明:马尾藻多糖提取率为152.8 g/L;马尾藻多糖浓度为100、200、400 mg/L时,能显著促进体外培养的鸡脾脏淋巴细胞增殖;H2O2浓度为50μmol/L时,能诱导体外培养的鸡脾脏淋巴细胞处于氧化应激状态。马尾藻多糖浓度为400 mg/L,与细胞共孵育4 h或12 h,能显著增加氧化应激态细胞内GSH含量;共孵育培养8 h,能显著降低氧化应激态细胞的NO水平。马尾藻多糖能促进鸡脾脏淋巴细胞增殖,并通过调节细胞内GSH和NO水平,提高免疫细胞的抗氧化能力,发挥免疫调节作用。

铁皮石斛对免疫抑制模型小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖的影响

为了探究不同浓度的铁皮石斛对环磷酰胺(Cyclophosphamide,Cy)所致免疫抑制模型小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖的影响,选取6周龄清洁级KM小鼠50只,体重18~22 g,全为雌性,随机分为对照组、免疫抑制组。每组各设5个重复,每个重复5只小鼠。免疫抑制组给予腹腔注射环磷酰胺(100 mg/kg·bw),对照组给予腹腔注射等量的生理盐水。1日1次,隔天注射,连续15 d。结果:铁皮石斛在终质量浓度5~135μg/mL范围内促进效果显著,其中作用48 h增殖幅度明显。对于小鼠脾脏T淋巴细胞而言,铁皮石斛浓度为20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL均能促进免疫抑制小鼠T淋巴细胞的增殖(P<0.05),尤以浓度为20μg/mL时最佳。铁皮石斛浓度为80μg/mL时对于正常小鼠脾脏T淋巴细胞分裂增殖显著(P<0.05)。对于小鼠脾脏B淋巴细胞而言,铁皮石斛浓度为40μg/mL时对免疫抑制小鼠脾脏B淋巴细胞增殖效果最佳。各浓度铁皮石斛OD值均高于单纯LPS刺激,且细胞增殖情况差异显著(P<0.05),但对照组中3个铁皮石斛浓度差异不显著(P>0.05)。结论:铁皮石斛浓度在40μg/mL、80μg/mL时能有效协同Con A、LPS刺激小鼠脾脏T、B淋巴细胞的增殖。

蛹虫草多糖对鸡脾脏淋巴细胞的影响

试验将7种浓度蛹虫草多糖（CMP）单独或与刀豆蛋白A（ConA）、脂多糖（LPS）同时加入鸡脾脏淋巴细胞的培养体系中,培养48 h时用MTT法测定淋巴细胞增殖（A570值）的变化;将5种浓度的CMP 40％乙醇提取物（CMP40）、CMP 50％乙醇提取物（CMP50）分别与ConA加入到鸡脾淋巴细胞的培养体系中,培养24 h后收集细胞培养上清液,测定白细胞介素-2（IL-2）和γ-干扰素（IFN-γ的含量.结果显示,CMP在31.25～2 000 μg/mL时,CMP40＋ConA组的A570值显著高于ConA对照组;CMP在31.25～500μg,/mL时,CMP50＋ConA组A570值显著高于ConA对照组,CMP40＋LPS组、CMP50＋LPS组的A570值显著高于LPS对照组;CMP40在125～1 000μg/mL时、CMP50在500 μg/mL时,各多糖组的A570值显著高于细胞对照组;CMP40和CMP50在250～1 000 μg/mL时,各多糖组的IL-2和IFN-γ浓度显著高于对照组.结果表明,CMP40和CMP50在合适的剂量能单独或协同ConA、LPS刺激鸡的T、B淋巴细胞增殖,促进淋巴细胞分泌IL-2和IFN-γ,从而增强鸡的细胞免疫能力.

病毒性心肌炎脾脏淋巴细胞的活化与凋亡

目的 :探索病毒性心肌炎 (VMC)发病的脾脏机制。方法 :运用DNA缺口末端标记法、免疫组化技术检测实验组 (VMC猝死者 ,8例 )及对照组 (非心性死亡者 ,4例 )脾组织中细胞凋亡及主要组织相容性复合物 (MHC)Ⅱ类抗原的表达情况。结果 :实验组脾组织内可见大量的凋亡细胞 ,脾组织MHCⅡ类抗原高表达 ,动脉周围淋巴鞘MHCⅡ类抗原阳性细胞显著多于对照组 ;对照组脾组织内罕见凋亡细胞 ,MHCⅡ类抗原阳性细胞较少 ,主要位于动脉周围淋巴鞘外围。结论 :VMC患者脾脏免疫细胞的活化与凋亡相伴存在 。

镉致鸡脾脏淋巴细胞DNA损伤的研究

应用片段化DNA定量分析法和碱性单细胞凝胶电泳法,检测了10μmol/L镉对体外不同时间培养的鸡脾脏淋巴细胞DNA损伤的情况,结果表明:10μmol/L的镉能够明显损伤鸡脾脏淋巴细胞DNA,并且呈现时间效应。提示镉致淋巴细胞DNA损伤是镉对禽类免疫毒性的重要机制之一。

蕨麻多糖对小鼠脾脏淋巴细胞NADPH氧化酶活性的影响

为探讨蕨麻多糖对体外培养的小鼠脾脏淋巴细胞NADPH氧化酶活性的影响,作者应用超氧阴离子荧光探针HE标记脾脏淋巴细胞后,借助激光扫描共聚焦显微镜,对脾淋巴细胞内HE荧光强度的变化进行了检测。结果经H2O2诱导处理的脾细胞中NADPH氧化酶活性显著降低,蕨麻多糖能使脾淋巴细胞内荧光强度增强。表明蕨麻多糖(PAP)能够拮抗由H2O2引起的酶活性降低,促进细胞NADPH氧化酶的活性的恢复,从而影响免疫细胞呼吸爆发功能。

高分压氧体外抑制大鼠脾脏淋巴细胞功能及N-乙酰半胱氨酸的预防作用

目的 :观察高分压氧体外暴露对脾淋巴细胞功能的影响及 N-乙酰半胱氨酸 (NAC)的预防作用。 方法 :分离成年大鼠脾脏淋巴细胞 ,制成细胞悬液 ,置于压力舱内以 4 0 0 k Pa氧气 (含 1.5 % CO2 )培养 4 h。 NAC预防组在培养液中加入 30mm ol/ L NAC。用流式细胞术测定淋巴细胞亚型 ,3H- Td R掺入法测定淋巴细胞增殖反应及 EL ISA法测定细胞经刀豆球蛋白(Con A )刺激后分泌的 IL - 2水平。 结果 :经高分压氧处理后 ,脾淋巴细胞 CD3+ 、CD4 + CD3+ 及 CD8+ CD3+ 比例均显著下降(P<0 .0 1,P<0 .0 5 ) ,CD4 + CD3+ / CD8+ CD3+ 比值未有变化 ;淋巴细胞增殖率及经 Con A刺激后的 IL - 2分泌量显著减少(P<0 .0 1,P<0 .0 5 )。培养液中添加 30 mm ol/ L NAC后 ,各指标值的下降程度均明显减轻 (P<0 .0 1,P<0 .0 5 )。 结论 :高分压氧对离体大鼠脾淋巴细胞功能有直接抑制作用 ,NAC能部分预防该抑制作用。

4种多糖对鸡脾脏淋巴细胞增殖和一氧化氮分泌的影响

将5种浓度的黄芪多糖(APS)、板蓝根多糖(IRPS)、牛膝多糖(ARPS)和山药多糖(CYPS)分别加入到培养的鸡脾脏淋巴细胞中,培养48 h时用MTT法测定淋巴细胞增殖的变化。将3种浓度的APS、IRPS、ARPS和CYPS分别加入到培养的淋巴细胞中培养24 h时收集细胞培养上清液,测定一氧化氮含量和一氧化氮合酶的活力。结果表明,适宜浓度的4种多糖均能提高细胞培养液中一氧化氮的含量、一氧化氮合酶的活力和促进淋巴细胞增殖,且4种多糖效果相当,这可能是多糖提高细胞免疫功能的机理之一。

苍术挥发油对小鼠体外脾脏淋巴细胞增殖的影响

对苍术挥发油活性部分进行筛选,以评价苍术挥发油对机体免疫的调控机制。通过建立小鼠脾脏淋巴细胞增殖模型和热应激模型,采用MTT法对热应激中脾脏淋巴细胞增殖情况进行测定。苍术不同提取物中以苍术挥发油对脾脏淋巴细胞增殖效果最佳,对高温下小鼠体外脾脏淋巴细胞增殖的最佳浓度为200μg/mL。苍术挥发油对热应激后小鼠脾脏淋巴细胞具有较强的上调作用,通过体外脾脏淋巴细胞热应激模型,对高通量、快速筛选中药有效部分和药效学评价进行新的探索。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇与玉米赤霉烯酮联合暴露对体外培养鸡脾脏淋巴细胞内环境稳态的影响

本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)与玉米赤霉烯酮与(ZEA)联合暴露对体外培养鸡脾脏淋巴细胞内环境稳态的影响。分别以0.012 50μg/mL DON+0.006 25μg/mL ZEA、0.050μg/mL DON+0.025μg/mL ZEA、0.2μg/mL DON+0.1μg/mL ZEA、0.8μg/mL DON+0.4μg/mL ZEA对体外培养鸡脾脏淋巴细胞进行联合暴露培养,48 h后测定细胞膜ATP酶(Ca^(2+)-ATP酶、Na^+/K^+-ATP酶)活性以及细胞内pH、Ca^(2+)水平和钙调蛋白(CaM)的mRNA表达水平。同时设不添加毒素的空白对照组。结果表明:添加毒素的各试验组间,细胞内Ca^(2+)水平、CaM mRNA表达水平随毒素浓度的升高而增加,且添加毒素的各试验组均显著或极显著高于空白对照组(P<0.05或P<0.01)。细胞内pH以及细胞膜Ca^(2+)-ATP酶与Na^+/K^+-ATP酶活性均随毒素浓度的升高而降低,且添加毒素的各试验组均显著或极显著低于空白对照组(P<0.05或P<0.01)。由此得出,DON、ZEA联合暴露导致体外培养鸡脾脏淋巴细胞内酸化、离子平衡失调等一系列细胞内环境稳态失衡,且呈剂量依赖性。

一氧化氮在硒缺乏致鸡脾脏淋巴细胞凋亡中的作用

本文旨在研究一氧化氮(NO)在硒缺乏致鸡脾脏淋巴细胞凋亡中的作用。选择1日龄健康海蓝褐雏鸡80只,随机分为对照组和缺硒组2个组,每组4个重复,每个重复10只鸡,对照组鸡饲料中硒含量为0.282 mg/kg,缺硒组鸡饲料中硒含量为0.032 mg/kg。分别于30、45、60和75日龄每组随机抽取10只鸡采样,测定脾脏和血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、NO含量、一氧化氮合酶(NOS)活性以及脾脏和全血中硒含量的变化;检测脾脏中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达量变化和淋巴细胞的凋亡情况。结果表明,与对照组比较,缺硒组鸡脾脏和全血中硒含量降低;脾脏和血清中GSH-Px活性降低;NO含量、NOS活性及iNOS mRNA表达量升高;脾脏淋巴细胞DNA出现降解,呈现梯形条带,电镜下细胞核皱缩,核染色质边聚、固缩,线粒体肿胀,嵴溶解甚至消失,内质网排列紊乱、肿胀等呈现典型的细胞凋亡现象。本试验结果提示硒缺乏可引起鸡脾脏及血清NO代谢发生改变,导致脾脏淋巴细胞发生凋亡,表明NO在硒缺乏致鸡脾脏淋巴细胞凋亡中具有重要作用。

五种侗药植物提取物对大鼠脾脏淋巴细胞增殖的影响

研究多穗柯、翻白草、显齿蛇葡萄、灰毡毛忍冬、羊耳菊等五种侗药植物对大鼠脾脏淋巴细胞增殖的影响。方法 :以70%乙醇为溶剂超声提取五种植物;将提取物按一定浓度添加到淋巴细胞培养基中并与大鼠脾脏淋巴细胞悬液混合,用MTT法检测大鼠脾脏淋巴细胞增殖的影响。结果 :5种药用植物提取物对脾脏淋巴细胞均具有较强增殖效应。结论 :五种侗药植物乙醇提取物均存在免疫调节作用。

8301多糖对小鼠脾脏淋巴细胞产生白细胞介素－2能力的影响

８３０１多糖对小鼠脾脏淋巴细胞产生白细胞介素－２能力的影响胡庭俊，樊斌堂，黄庆州孟宪松（中国农业科学院中兽医研究所兰州７３００５０）（中国农业科学院）８３０１多糖是一种具有多种生物活性的多糖，人医界做为升白、抗化疗及放射损伤等应用于临床。兽医方面将其...

淫羊藿多糖对鸡脾脏淋巴细胞的调节作用研究

为研究淫羊藿多糖(EPS)体外增强免疫活性,采用酶学检测法测定淫羊藿多糖活性及对鸡脾脏淋巴细胞的增殖作用。根据活性检测结果,选择用50%的乙醇醇沉的淫羊藿多糖进行安全浓度试验;根据安全浓度检测结果,选择2 500.00μg/mL、1 250.00μg/mL、625.00μg/mL、312.50μg/mL、156.25μg/mL 5个浓度,用MTT法测定淫羊藿多糖单独和协同LPS刺激对鸡脾脏淋巴细胞增殖率的影响。结果显示:不同浓度乙醇醇沉的淫羊藿多糖均具有良好的活性,但乙醇浓度为50%醇沉的淫羊藿多糖活性最佳。淫羊藿多糖对鸡脾脏淋巴细胞的安全浓度为2 500.00μg/mL。淫羊藿多糖无论是单独还是协同LPS刺激脾脏淋巴细胞,均显示出不同程度增强脾脏淋巴细胞的活性,且均在浓度为1 250.00μg/mL时显示出较强的体外增强鸡脾脏淋巴细胞增殖的能力,说明淫羊藿多糖在安全浓度范围内可刺激鸡脾脏淋巴细胞增殖,从而实现调节免疫功能的作用。