基于脾脏脱细胞支架构建组织工程肝脏的体内植入策略

目的体外构建基于脾脏脱细胞支架的组织工程肝脏,并探索其理想的体内植入策略。方法获取健康SD大鼠脾脏,采用低温冻融结合十二烷基硫酸钠灌注法制备脾脏脱细胞支架(DSM)。Seglen改良两步胶原酶灌注法获取大鼠原代肝细胞,经脾动脉再植入DSM内体外构建组织工程肝脏。以SD大鼠为受体,比较异位血管吻合移植、肝断面缝合移植、肝内嵌入移植以及肠系膜包裹移植4种策略的优缺点。结果肝细胞支架种植率为(74.5±7.7)%,HE染色与扫描电镜显示细胞状态良好,免疫荧光染色证实细胞正常表达ALB、G6Pc。异位血管吻合移植手术难度高,围手术期死亡率高达33.3%,术后6 h支架内形成大量血栓;肝断面缝合无法迅速建立充分血供,术后3 d未见成形移植物;肝内嵌入移植法细胞最长可存活14 d;肠系膜包裹移植术后14 d时支架内细胞存活率为(38.3±7.1)%。结论利用DSM构建的组织工程肝脏能部分表达肝细胞特异性功能,肠系膜包裹移植策略简单安全有效,是目前可行的体内移植方式。