小鼠脾集落形成期基质细胞在体外扩增脐带血CD34^+细胞中的作用

目的研究来源于小鼠脾脏的基质细胞在体外扩增脐血CD34+细胞中的作用;方法取γ射线照射后小鼠脾集落形成期的脾细胞经人重组单核细胞集落刺激因子(rhM-CSF)的激发培养,获得贴壁脾基质细胞,经丝裂霉素处理后作为滋养细胞,与多种造血细胞生长因子共同应用,体外扩增经免疫磁珠阳性选择法纯化的人脐血CD34+细胞,用体外集落形成及流式细胞仪分析扩增细胞的集落形成能力和表型。结果1)rhM-CSF能有效地刺激小鼠脾基质细胞的生长;2)所获的小鼠脾基质细胞具有支持脐血CD34+细胞的集落形成能力,与多种造血细胞生长因子共同应用后,能有效地扩增CD34+细胞,扩增2周后的细胞数达100倍,且仍具有多向分化能力。结论rhM-CSF能刺激小鼠脾集落形成期基质细胞的增殖,该类基质细胞具有有效支持人脐血CD34+细胞的体外扩增作用。

几种细胞因子对骨髓基质成纤维细胞集落形成的影响及意义

目的 :观察细胞因子粒 巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)、干细胞因子 (SCF)、白细胞介素 3(IL 3)、肿瘤坏死因子 (TNF)及其联合应用对骨髓基质成纤维细胞集落生成单位 (CFU F)形成的作用。方法 :应用体外骨髓基质细胞贴壁培养的方法 ,分别加入不同的细胞因子 ,进行培养 2周时的CFU F计数和培养 4周时贴壁细胞的增殖状态观察。结果 :GM CSF、SCF及TNF对骨髓基质细胞的增殖有明显的促进作用。结论 :体外加入某些细胞生长因子对骨髓基质细胞具有明显的扩增作用 ,提示基质细胞在体外适当细胞因子作用下扩增后进行回输 。

墓头回诱导脐血基质细胞生长促粒-单系和红系造血祖细胞集落形成的研究

目的研究中药墓头回对脐血基质细胞促粒-单系和红系造血祖细胞集落形成的影响。方法收集12例脐血单个核细胞(MNC),加入不同浓度的墓头回水提物共培养14天,基质细胞层形成后,消化,计数;收集基质细胞最多浓度的上清液(MTH-PSCS),以不同比例与MNC共同加入集落培养基中共培养14天,计数粒-单系和红系造血祖细胞集落数。结果0.01μg/ml的墓头回与MNC共孵育14天后,基质细胞的数量(14±2.8)×105/ml明显多于对照组(9±2.2)×105/ml。0.01μg/ml的MTH-PSCS以0、5、10、20比例作用后,脐血粒-单系造血祖细胞集落数分别为17±6、121±24、268±27、114±31、68±11,10%的MTH-PSCS作用最为明显;脐血红系造血祖细胞集落数分别为38±12、72±23、81±9、159±45、90±32,其中以20%的MTH-PSCS作用最为明显。结论中药墓头回可诱导脐血基质细胞的生长,可以促进粒-单系和红系造血祖细胞集落的形成。

体外培养的小鼠骨髓基质细胞对血细胞集落形成的支持

为探讨骨髓基质细胞在液体条件下支持造血的能力,对小鼠骨髓有核细胞体外培养,在液体培养基中形成基质细胞贴壁层,更换培养液,再种植骨髓有核细胞。结果在贴壁的基质细胞上形成了细胞集落。按细胞形态特征分为两类:一类为基质细胞集落,仅为偶见。另一类为造血细胞集落,数量较多,并且集落通过一定的结构与贴壁的基质细胞连接。结果提示,造血细胞集落的形成,需要有与骨髓基质细胞接触的微环境,并可对基质细胞的生长发育有一定的反作用。本文提出了造血细胞集落的液体培养法。

不同培养条件对小鼠脾脏成克隆基质祖细胞（CFU一F）集落形成的影响

本文观察到脾脏ＣＦＵ一Ｆ集落形成受滋养骨髓细胞数、血清浓度及脾细胞数的影响。优选脾ＣＦＵ一Ｆ最佳培养条件为２０％小牛血清、滋养骨髓细胞数为每孔３×ｌ０６，脾细胞数为每孔４×１０５。

不同来源血清和细胞因子对骨髓基质细胞成纤维细胞集落形成的影响

目的观察SD大鼠骨髓基质细胞(BMSC)体外培养的生物学特性并加以鉴定,并探讨不同来源血清和细胞因子对其成纤维系祖细胞(CFU-F)产率的影响。方法取SD大鼠骨髓,进行BMSC原代培养,传代后分别观察其生长特性,绘制贴壁率,测定生长曲线,并应用流式细胞仪鉴定细胞表型;采用体外长期液体培养法观察CFU-F的产率。结果原代培养的BMSCs生长良好,倍增时间约为40小时,传代后12小时贴壁率达85%以上;胎牛血清较脐血清和马血清能促进CFU-F的增值和分化。与未加细胞因子对照组相比,单用细胞因子SCF,SDF-1均可促进CFU-F的增殖,但二者之间差异无显著性(P>0.05),同时加入SCF,SDF-1可明显的促进CFU-F的增殖,并优于单用SCF和SDF-1(P<0.05)。结论体外培养的BMSCs生长稳定,传代后细胞适应性强;胎牛血清中可能较脐血清和马血清存在较多的对CFU-F有促进作用的生长因子;SCF可协同SDF-1促进CFU-F的增殖。

联合应用粒细胞集落刺激因子和骨髓基质干细胞治疗急性心肌缺血的实验研究

目的探讨粒细胞集落刺激因子和自体骨髓基质干细胞(MSCs)移植共同应用对心肌缺血的治疗作用。方法采用MSCs在体外培养扩增。在结扎冠状动脉造成急性心肌缺血后,把被5溴-2脱氧尿苷(BrdU)标记后的MSCs移植到自体的缺血心肌中,同时腹腔注射粒细胞集落刺激因子5d。4周后通过激光共聚焦显微镜验证移植后的MSCs是否向心肌细胞分化,通过心脏彩超和多导生理记录仪测定缺血心肌在移植自体MSCs后是否能提高心功能。另外,用Masson氏三色染色法从左室中断面切片量化心肌梗死范围。结果移植4周后,MSCs向心肌细胞分化,表达出α-横纹肌肌动蛋白和存在于心肌闰盘中的connexin43,联合应用粒细胞集落刺激因子和MSCs的治疗组左心室收缩功能恢复较好,心肌梗死面积最小,单独应用MSCs移植的治疗组次之,对照组心肌左室收缩功能恢复较差,心肌梗死面积最大。结论MSCs移植后可以向心肌细胞分化,粒细胞集落刺激因子可以动员机体内自体MSCs到心肌缺血区域,二者联合应用对于缺血心肌有协同治疗作用。

当归补血汤载药血清干预后骨髓基质细胞中粒细胞集落刺激因子和白细胞介素3的分泌(英文)

背景:实验表明,当归补血汤的有效成分多糖对造血干细胞和造血祖细胞的增殖分化存在显著的促进作用,对造血微环境具有重要的调控作用。目的:观察当归补血汤载药血清干预后小鼠骨髓基质细胞中粒细胞集落刺激因子和白细胞介素3的分泌状况。方法:分离骨髓基质细胞,于96孔板培养,在相差显微镜下观察细胞形态和生长状况;将细胞分4组,加含有不同剂量的当归补血汤载药血清进行干预,采用MTT法检测各组细胞的增殖活性,ELISA法检测粒细胞集落刺激因子和白细胞介素3的表达情况。结果与结论:当归补血汤载药血清可明显促进骨髓基质细胞的增殖,促进骨髓基质细胞分泌粒细胞集落刺激因子和白细胞介素3,呈剂量依赖性,含等效剂量载药血清组促增殖作用和促分泌作用优于其他各组,浓度过高可减弱细胞的增殖分泌效应。

论神经细胞外基质与中医脾土相关及其对脑缺血保护的启示

缺血性卒中具有发病率高、致残率高、病死率高的“三高”特点,是威胁人类尤其是中老年人健康的常见病、多发病。在联合国世界卫生组织调查的57个国家中死于脑血管病者占11.3%,其中40个国家脑血管病占死因前3位。我国卫生部卫生统计信息中心《2006年中国卫生事业发展情况统计公报》显示，脑血管病的死亡率为105．5／10万，居死亡原因第2位。

银屑病患者骨髓基质细胞白介素-8、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子分泌水平的实验研究

目的:通过比较银屑病患者与正常对照组骨髓基质细胞分泌白介素(IL)-8和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)水平的差异,揭示银屑病患者骨髓造血微环境的异常。方法:采用密度梯度离心法分离患者与对照组骨髓单一核细胞,通过贴壁法培养骨髓基质细胞,收集传至3代后又培养72 h的骨髓基质细胞及培养上清,用流式细胞仪鉴定细胞表面标志物,并用ELISA法检测上清液中IL-8和GM-CSF的水平。结果:90%以上分离培养的细胞表面高表达CD29,而CD34、CD45及人白细胞抗原(HLA)-DR表达阴性,即骨髓基质细胞纯度在90%以上;患者组骨髓基质细胞分泌IL-8显著低于对照组(P<0.05),而GM-CSF的分泌水平两组间无统计学差异(P>0.05)。结论:银屑病患者骨髓基质细胞分泌的IL-8存在异常,表明患者骨髓造血微环境可能存在异常。

应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱和N端测序鉴定重组人粒/巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)的结构

目的 :应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 (MALDI -TOF -MS)和N端测序方法鉴定重组人粒 /巨噬细胞集落刺激因子 (rhGM -CSF)的结构。方法 :1 用Edman降解法进行N端测序。 2 应用MALDI-TOF -MS测定分子量并鉴定纯度。 3 通过还原、烷基化确定rhGM -CSF分子中二硫键数目。 4 通过蛋白内切酶Glu -C酶切的肽质量指纹谱确证氨基酸序列并确证其中两对二硫键的配对。结果 :1 测定的rhGM -CSFN端 15个氨基酸序列与从cDNA推导的序列一致。 2 测定的rhGM -CSF分子量与理论计算值一致。 3 证明rhGM -CSF没有自由巯基 ,含有两对二硫键 ,与理论值一致。 4 证明rhGM -CSF的氨基酸序列是正确的 ,并确证其中的两对二硫键配对正确。结论 :确证重组人粒 /巨噬细胞集落刺激因子 (rhGM -CSF)的结构是正确的 ,没有修饰、变异和氨基酸的丢失。应用的方法灵敏、准确。

银屑病患者骨髓基质细胞分泌干细胞因子和粒细胞集落刺激因子的水平

背景:课题组在前期研究中发现银屑病患者骨髓造血细胞活性存在异常。目的:观察银屑病患者骨髓基质细胞分泌干细胞因子和粒细胞集落刺激因子的水平。设计、时间及地点:病例-对照观察,于2007-10/2008-08在太原市中心医院皮肤科实验室完成。对象:选择太原市中心医院皮肤科临床及病理确诊为寻常型银屑病的门诊患者24例,男16例,女8例;年龄16～59岁;另取血液科骨穿后经筛选的正常骨髓20例作为对照组,性别、年龄与银屑病患者匹配。方法:采用密度梯度离心法分离银屑病患者与对照组骨髓单一核细胞,通过贴壁法培养骨髓基质细胞,收集传了3代后又培养72h的骨髓基质细胞及培养上清。主要观察指标:流式细胞仪检测细胞表面标志并用ELISA法检测上清液中干细胞因子和粒细胞集落刺激因子的水平。结果:流式细胞仪检测结果显示,90%以上细胞表面抗原高表达CD29,而CD34、CD45及HLA-DR表达阴性,即骨髓基质细胞纯度在90%以上。银屑病组骨髓基质细胞培养上清液的干细胞因子和粒细胞集落刺激因子表达均显著高于对照组(P<0.01)。结论:银屑病患者骨髓基质细胞分泌干细胞因子和粒细胞集落刺激因子存在异常,提示银屑病患者骨髓造血微环境发生了改变。

混输脾基质细胞与骨髓细胞悬液在小鼠大剂量辐射损伤修复中的作用

Ｃ５７ＢＬ／６／小鼠经６０Ｃｏγ射线一次整体照射８Ｇｙ后，分成三组：（１）单纯照射８Ｇｙ组。（２）照射后单纯骨髓移植组，（３）照射后混输脾基质细胞（ＳＳＣ）与骨髓细胞（ＢＭＣ）组，以观察骨髓移植和回输脾基质细胞对大剂量照射后受体存活率及造血干细胞（ＣＦＵ－Ｓ）的影响，并初步探讨其可能的机理。结果表明：单纯骨髓移植组受体存活率比单纯照射组高出２７％；而照射后混输ＳＳＣ组之存活率比单照射组高４７％，比单纯骨髓移植组高２２％（Ｐ＜０．０５）。混输ＳＳＣ可明显提高脾ＣＦＵ－Ｓ、ＣＦＵ－Ｆ及ＡＮＡＥ染色（＋）（－）细胞数。在体外混合培养中脾基质细胞对实质细胞增殖起支持与调节作用。

重组人粒细胞集落刺激因子动员的骨髓基质干细胞经皮移植促进兔骨折愈合的实验研究

目的探讨重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)动员的骨髓基质干细胞(BMSCs)经皮注射对兔桡骨骨折愈合的促进作用。方法对56只白兔施行骨折模型,随机分为第1批(用药组A组、空白对照组B组)和第2批(纯化注射组C组、实验对照组D组)。骨折模型术后14,28 d取材进行影像学、组织学、组织形态计量学检测与分析。结果两个批次的实验组新生血管、骨小梁形成均明显优于同批对照组,4种骨痂记分、外骨痂厚度均高于对照组。结论通过rhG-CSF动员的BMSCs经皮注射后有明显的促进骨折愈合作用。

联合应用粒细胞集落刺激因子和骨髓基质干细胞治疗急性心肌缺血的实验研究

目的:探讨粒细胞集落刺激因子和自体骨髓基质干细胞移植共同应用对心肌缺血的治疗作用。方法:采用自体骨髓基质干细胞(MSCs)在体外培养扩增。在结扎冠状动脉造成急性心肌缺血后,把被5溴-2脱氧尿苷(BrdU)标记后的MSCs移植到自体的缺血心肌中,同时腹腔注射粒细胞集落刺激因子5d。4周后通过激光共聚焦显微镜验证移植后的MSCs是否向心肌细胞分化,通过心脏彩超和多导生理记录仪测定缺血心肌在移植自体MSCs后是否能提高心功能。另外,用Masson氏3色染色法从左室中断面切片量化心肌梗死范围。结果:移植4周后,MSCs向肌细胞分化,表达出α-横纹肌肌动蛋白(α-sarcomeric actin)和存在于心肌闰盘中的connexin43,粒细胞集落刺激因子和自体骨髓基质干细胞移植结合应用的治疗组,左心室收缩功能明显强于单独应用自体骨髓基质干细胞移植的治疗组,移植后心肌左室收缩功能明显强于对照组,并且心肌梗死范围最小。结论:MSCs移植后可以向心肌细胞分化,粒细胞集落刺激因子可以动员机体内自体MSCs到心肌缺血区域,两者共同应用对于缺血心肌有协同治疗作用。

粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子对人内皮细胞基质金属蛋白酶分泌及活性的影响

为探讨粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子对人内皮细胞基质金属蛋白酶分泌及活性的影响 ,体外培养人脐静脉内皮细胞 ,分别应用蛋白印迹法和酶谱法检测基质金属蛋白酶 2的含量和活性。结果发现 ,与对照组相比 ,不同浓度 (5、2 5和 5 0 μg/L)粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子可使人内皮细胞基质金属蛋白酶 2的蛋白表达和活性增强 ,且随粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子剂量增加而增强。提示粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子可通过刺激人内皮细胞基质金属蛋白酶 2蛋白的表达 ,并增强其活性 ,促进内皮细胞对细胞外基质的降解 ,从而易于动脉粥样硬化斑块内炎性细胞的渗入 ,内皮细胞的迁移及新血管的形成 。

腺苷对博莱霉素所致肺纤维化以及脾与骨髓等基质细胞坏死的影响

目的 应用双哌达莫 (DPM)、腺苷 (ADO)与 ADO拮抗剂茶碱 (TH)治疗博莱霉素 (BL E)肺纤维化小鼠 ,观察肺、脾等病理变化 ,探讨肺纤维化发病机理。方法 实验第 1天 10 0只小鼠经气管注入 BL E8.5 mg· kg- 1 ,随机分 BL E、 DPM、 ADO和 TH四组 ,第 2天起分别给予 NS (10 0μl· d- 1 )、 DPM、 ADO和 TH ,剂量均为 5 0 mg· kg- 1 · d- 1 ,共 7天 ,第 4～ 30天内处死动物 ,组织化学法观察肺内纤维变化与脾、胸腺、骨髓病理学改变。结果 BL E组和 TH组第 4～ 6天脾、胸腺髓质与骨髓中许多基质细胞坏死导致组织严重疏松。BL E组第 2 0天后脾与胸腺逐渐萎缩 ,肺与脾内网状纤维大量增加。DPM组与 ADO组第 4～ 6天脾、骨髓坏死基质细胞较少 ,第 30天肺未发生纤维化 ,淋巴器官未萎缩。结论 BL E能致脾、骨髓等基质细胞大量坏死与严重组织疏松。内、外源性 ADO能轻度减少基质细胞坏死 ,促进淋巴组织与造血组织增生 ,抑制 BL E诱导的肺纤维化与淋巴器官萎缩。

益肾健脾、活血利水方药对肾小球系膜细胞增殖及其细胞外基质影响

１材料与方法１１实验血清制备：１）中药血清：以仙灵脾、川芎、云苓组成具有益肾健脾、活血利水作用的中药复方，水煎浓缩后，灌饲大耳白兔连续１２天，在服最后１剂后２小时心脏采血、分离血清。２）雷公藤多甙血清：以雷公藤多甙片灌饲大耳白兔连续１２天，如上法分...

M21170应用粒细胞集落刺激因子体外扩增脂肪基质干细胞

目的探讨粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor,G-CSF)对大鼠脂肪基质干细胞(adipose stromal cells,ASCs)体外扩增能力的影响。方法取10只SD大鼠腹膜后脂肪组织,差异贴壁法分离培养ASCs。检测第3代ASCs常规培养与加入G-CSF条件下体外扩增能力与细胞周期分布情况。结果①实验组ASCs形态与对照组比较无明显变化。②实验组大鼠ASCs培养18d后,细胞集落数目(14.9±4.6),细胞总数(3.9±0.8)×104;对照组细胞集落数目(7.7±3.8),细胞总数(2.4±0.6)×104。实验组与对照组比较,ASCs细胞集落数目与细胞总数差异均有统计学意义(P<0.05)。③实验组ASCs细胞G0-1细胞比例相对常规培养组低(P<0.05)。结论G-CSF可促进ASCs进入细胞增殖周期,增加其体外扩增能力。

尾静脉注射骨髓基质细胞和腹腔注射粒细胞集落刺激因子治疗大鼠脑梗死

背景:骨髓间充质干细胞具有成神经分化特性,有很多试验也证实粒细胞集落刺激因子可以用于改善脑梗死后的神经功能。目的:比较静脉移植骨髓间充质干细胞和腹腔注射粒细胞集落刺激因子动员干细胞来治疗大脑中动脉闭塞模型大鼠疗效。方法:实验以改良的Zea-longa线栓法阻断大脑中动脉建立SD大鼠脑梗死模型,造模24h后分别通过尾静脉注射骨髓间充质干细胞或腹腔注射粒细胞集落刺激因子。结果与结论:两种治疗方法均可改善脑梗死模型大鼠的运动和认知功能,且粒细胞集落刺激因子对脑梗死模型大鼠的运动和认知功能的改善比尾静脉注射骨髓间充质干细胞明显,移植后第7,14天,粒细胞集落刺激因子组梗死面积小于骨髓间充质干细胞组(P<0.05),粒细胞集落刺激因子组BrdU阳性细胞数多于骨髓间充质干细胞组(P<0.05)。提示粒细胞集落刺激因子动员骨髓干细胞治疗脑梗死的疗效可能优于骨髓间充质干细胞静脉注射的移植方法。