腐质霉属真菌分类的研究进展

腐质霉属(Humicola)真菌常见而广布,具有重要的经济学及生态学价值。对该类群真菌的分类简史、分子系统学研究进展及目前分类系统存在的弊端进行综述,并依据NCBI中该属现有ITS序列构建系统进化树,同时指出在形态学基础上利用多基因系统发育技术进行该属分类学研究是未来研究的发展趋势。

特异腐质霉Humicola insolens(YH-8)纤维素酶的催化性质研究

对诱变后的特异腐质霉Humicolainsolens(YH-8)纤维素酶的催化性质进行了研究。结果表明:该酶的最适催化温度和pH值分别为65℃和6.0,在50℃以下酶的稳定性较好,70℃条件下底物对酶有较强的保护作用,该酶的pH稳定性范围为6.0￣9.0,Zn2+、K+、Li+对酶活有促进作用,Mn2+、Ca2+、Mg2+、Co2+、Fe2+、Fe3+对酶活起抑制作用,其中Fe3+对酶的抑制作用非常强,酶对CMC和水杨素有分解作用,而几乎不分解脱脂棉、微晶纤维素和滤纸。

棕黑腐质霉(Humicola fuscoatra)导致真菌性腹膜炎1例

报道1例由棕黑腐质霉属(Humicola fuscoatra)导致的真菌性腹膜炎。此菌分离自1名长期腹膜透析患者的腹水。腐质霉属在自然界广泛存在,棕黑腐质霉导致的人类感染罕见。现对棕黑腐质霉的真菌学特点进行研究,并进行分子测序。体外药物敏感性试验结果对伊曲康唑的MIC为0.008μg/mL,伏立康唑的MIC为0.016μg/mL,两性霉素B的MIC为1.5μg/mL。患者拔除腹透管,改行血液透析。口服伊曲康唑0.1 g/12 h,28 d后病情明显改善,出院。

特异腐质霉纤维素酶的分离纯化与性质

特异腐质霉Humicola insolens（YH-8）能高效合成高稳定性的纤维素酶。由该菌株所产的纤维素酶粗液经过1．5倍酒精沉淀、DEAE-SephadexA-50离子交换层析，SephadexG-100凝胶过滤，得到电泳纯的纤维素酶组分一个。对这个组分的催化性质（以羧甲基纤维素为底物）进行了研究，该酶的最适催化温度60℃，pH值为5．5，在50℃以下酶的稳定性较好，70℃条件下底物对酶有较强的保护作用，该酶的pH稳定性范围为4～8，Zn^2＋，Ca^2＋，Mg^2＋，K^＋，Li^＋对酶活有促进作用，Mn^2＋、Co^2＋、Fe^2＋、Fe^3＋对酶活起抑制作用，酶对CMC-Na和水杨素有分解作用，而不分解脱脂棉和滤纸。

产中性纤维素酶特异腐质霉H31-3复合诱变研究

中性纤维素酶在纺织、食品、饲料和制药行业均具有广泛的应用。采用离子束注入技术对中性纤维素酶产生菌特异腐质霉(Humicolainsolens)H31-3进行诱变,经发酵筛选获得较高酶活力且传代稳定的正突变菌株H14,制备其原生质体后进行紫外诱变。筛选后得到正突变菌株H14-2,最终CMC酶、滤纸酶活力分别达82.56IU/mL和5.77IU/mL,较原始菌株提高了78.57%和106.81%。

特异腐质霉中性内切葡聚糖酶Ⅱ基因的克隆及表达

利用RT-PCR的方法,以特异腐质霉(Humicolainsolens)H31-3总RNA为模板,克隆到中性内切葡聚糖酶Ⅱ基因egl2的cDNA,将其插入到表达载体pGAPZαA中,重组质粒经线性化,电击转化毕赤酵母(Pichiapastoris)菌株GS115,筛选到分泌表达重组EGⅡ的毕赤酵母工程菌株。SDS-PAGE检测结果表明,重组EGⅡ在酵母中得到了特异性表达,表达产物的表观分子量约为55kD,同时对工程菌株的发酵条件和重组EGⅡ的性质进行了初步研究。

一株特异腐质霉纤维素酶高产突变株的鉴定分析

高温真菌特异腐质霉(Humicola insolens)具有强大的纤维素酶分泌和纤维素降解能力,因此在生物质能源、饲料和纺织工业等领域中具有良好的应用前景。在特异腐质霉T-DNA随机插入突变体库中筛选得到一株纤维素酶高产菌株T53。在纤维素诱导培养条件下,突变株T53发酵上清中的滤纸酶活力、内切β-1,4葡聚糖酶活力、纤维二糖水解酶活力、β-葡萄糖苷酶活力以及木聚糖酶活力较野生型菌株分别提高了40%、60%、90%、10%、60%。蛋白电泳结果显示,T53菌株的胞外总蛋白特别是纤维素酶与半纤维素酶的分泌量较野生型菌株有显著提高。TAIL-PCR克隆鉴定了T53菌株中的T-DNA插入位点侧翼序列,结果表明T-DNA插入位点位于一个可能的C2H2型锌指蛋白类转录因子编码基因的上游启动子区域。这为揭示突变株T53中纤维素酶的高产分子机制奠定了重要基础,有助于理解特异腐质霉中纤维素酶的表达调控机制,为特异腐质霉纤维素酶高产工程菌的构建奠定了理论和技术基础。

特异腐质霉角质酶在大肠杆菌中的表达和发酵优化

应用大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)BL21(DE3)表达系统实现特异腐质霉(Humicola insolens,H.insolens)来源角质酶的重组表达。对重组角质酶进行酶学性质研究,发现其最适pH为8.5、最适温度为80℃,并有良好的pH稳定性和温度稳定性。经3L发酵罐中扩大培养并进行发酵条件优化,其最佳发酵条件:发酵前期控制菌体生长pH 7.0、温度37℃,培养时间12~14h;菌体浓度OD600达到50时进入诱导期,调节温度降至30℃,恒速流加0.2g/(L·h)的乳糖溶液进行诱导,总发酵周期为36h,最高酶活2 233U/mL,是摇瓶水平酶活的13倍。

特异腐质霉内切葡聚糖酶Ⅱ基因在毕赤酵母中的表达及酶学性质

【目的】在毕赤酵母中表达特异腐质霉Humicola insolens的中性内切葡聚糖酶Ⅱ,并对其性质加以研究。【方法】利用RT-PCR的方法,以特异腐质霉(Humicola insolens)NC3总RNA为模板,克隆到中性内切葡聚糖酶Ⅱ基因(egⅡ)的cDNA。将其插入表达载体pPIC9K,重组质粒经线性化后电击转化毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株GS115。【结果】SDS-PAGE和酶活的检测结果均表明:egⅡ基因在毕赤酵母中成功表达。重组酶的部分酶学性质研究表明,该酶的最适反应温度为70°C,且在65°C以下具有较好的热稳定性。最适反应pH为6.5,在pH 6.0?7.0之间有较好的稳定性。【结论】用重组毕赤酵母可高效表达外源中性内切葡聚糖酶,为其今后在工业应用奠定了基础。

特异腐质霉葡糖化酶催化生淀粉一步糖化的酶学特征

从北京西郊森林土壤中分离到产生糖化生淀粉的葡糖化酶的特异腐质霉Humicola insolens HG‐618菌株。优化的产酶培养基如下:6%麦麸、2%玉米粉、0.7%磷酸氢二铵和1%玉米浆,p H 8.0,250m L三角瓶装40m L培养基,在40℃和280r/min培养90h。以生玉米淀粉为底物,发酵液中葡糖化酶活力为180U/m L。酶学性质试验表明,该酶的最适反应p H为6.0,最适反应温度为65℃;在p H 6.0–9.0范围酶活力稳定;酶热稳定性强,在60℃和p H 6.0保温8h,酶活力仍保留83%。一步糖化生玉米粉试验表明,在50m L 30%浓度生玉米粉浆和270U HG‐618葡糖化酶的反应体系中,采用自然p H 6.7,在55℃和100r/min条件下糖化40h。获得的糖化液还原糖浓度为17.1%(由酶产生的还原糖浓度为15.9%),生玉米粉中所含淀粉的糖化率为90%,且产生的糖全部为葡萄糖。因此,该葡糖化酶具有良好的一步糖化生玉米粉前景,它也可以用于生大米粉、生小麦粉和生马铃薯粉的直接糖化。

河南郑州玉米田4种暗色丝孢真菌的鉴定

[目的]鉴定河南郑州周边地区玉米田的4种暗色丝孢真菌。[方法]从郑州市周边玉米田分时期采集典型土样24份。结果]分离鉴定出4种暗色丝孢菌,分别是腐质霉、穗状平脐蠕孢、黑细基格孢和葡萄穗霉,对其进行了详尽的形态描述,并讨论了他们与近似种的关系,所研究玻片标本与活菌种,均保存于河南农业大学菌物学标本室。[结论]为该地区玉米病害的生物防治奠定基础。

中性纤维素酶外切葡聚糖酶CBHⅡ的异源表达

利用聚合酶链式反应(PCR)技术,从本实验室保存的1株特异腐质霉EIM-50上克隆到中性纤维素酶外切葡聚糖酶基因(CBHⅡ)全长序列,大小约为1 586 bp。将其克隆到pPIC9K上,成功构建重组质粒pPIC9K-CBHⅡ,并经电转化引入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,进行异源表达。SDS-PAGE银染结果表明,该重组质粒在毕赤酵母中获得了异源表达。gel pro Analyser软件分析其表达蛋白的表观分子量约为62.548ku。用BandScan软件分析其蛋白表达量为2.3%,即0.738μg/mL(mg/L)。

Comparison of hydroxyl radical-scavenging abilities between white rot fungus Lentinula edodes and five mildews on lignocellulose substance

The hydroxyl radical（-OH）-scavenging ability of culture filtrates from submerged culture of Lentinula edodes AX3 and five mildews on lignocellulose substance was analysed. Only L. edodes AX3 showed significant -OH-scavenging ability which reached 52.2% at about the 48th hour. All mildews could hardly scavenge -OH under the experimental conditions. -OH-scavenging ability is considered related to the mode and ability of lignocellulose degradation of a strain. The degradation or bioconversion products might be the substance base for.this effect.

雅鲁藏布江谷地的土壤暗色丝孢菌

笔者从采自雅鲁藏布江谷地的29份土样中,分离获得59个暗色丝孢菌分离物,经鉴定分别属于18属中的27种。其中包括2个新种:浅色平脐蠕孢Bipolaris pallescens和光滑腐质霉Humicola levis。对新种进行了详尽的描绘,对其他25个中国已报道种亦作了分离地点和生境的引证。研究过的标本(干制培养物)与活菌种存放在山东农业大学植物病理学标本室(HSAUP)。