多主棒孢菌对乙霉威和腐霉利敏感基线的建立及抗药性监测

为明确我国山东和辽宁地区多主棒孢菌对乙霉威和腐霉利的抗药性现状,采用菌丝生长速率法,测定了多主棒孢菌对乙霉威和腐霉利的敏感性,建立了敏感基线;采用区分剂量法,测定了多主棒孢菌对乙霉威和腐霉利的抗药性。结果表明,乙霉威和腐霉利对多主棒孢敏感菌株的平均EC50值分别为(0.22±0.06)μg·mL^(-1)和(2.75±0.91)μg·mL^(-1),两者的敏感性频率均呈连续性单峰曲线,总体呈正态分布,可作为多主棒孢菌对乙霉威和腐霉利的敏感基线。对采集自山东和辽宁地区的828株多主棒孢菌进行抗性水平监测,发现多主棒孢菌对乙霉威和腐霉利的抗性水平不断升高,山东地区多主棒孢菌对乙霉威和腐霉利抗性频率从2017年的58.06%和43.55%上升到2021年的91.30%和78.99%,辽宁地区多主棒孢菌对乙霉威和腐霉利抗性频率从2017年的67.44%和53.49%上升到2021年的82.14%和83.33%。表明多主棒孢菌对乙霉威和腐霉利具有高度的抗性风险,建议在黄瓜生产中乙霉威和腐霉利与其他类型杀菌剂交替或者混合应用,延缓抗药性的发展。

腐霉利及其代谢产物在百合上的残留行为研究

目的:为研究腐霉利的安全使用,明确腐霉利及其代谢物3,5-二氯苯胺在百合上的残留行为,进行了腐霉利及其代谢产物在百合植株中的消解动态和百合鳞茎中的最终残留试验。方法:乙腈提取,GC-MS分析百合中中腐霉利及其代谢产物残留量。结果:腐霉利在百合植株中的消解半衰期为21.29 d, 3,5-二氯苯胺在百合植株中的半衰期为33.55 d,两者在百合植株上的残留消解符合一级反应动力学方程。结论:该方法简单快速,可同时测定腐霉利及其代谢物,上述结果可为今后安全、合理、高效使用百菌清提供一定的参考价值。

2023年佛山市禅城区果蔬中腐霉利残留及膳食风险评估

目的:调查掌握佛山市禅城区市售不同种类果蔬的腐霉利残留情况,及时发现食品安全隐患,进行风险预警,为开展食品安全风险评估、食品安全标准制(修)订和采取针对性控制措施提供科学依据。方法:在佛山市禅城区4个镇街道不同销售流通环节随机采集6种果蔬样品共200份,使用QuEChERS法进行净化处理,参照GB 23200.113-2018采用气相色谱质谱联用法测定腐霉利的含量,根据检测结果运用急性和慢性膳食风险评价法以及食品安全指数法对其残留情况和由其引发的居民健康风险进行评价。结果:采集的样品中,43份样品检出腐霉利,检出率为21.50%,不同类型样品中腐霉利检出率差异具有统计学意义(χ^(2)=46.735,P<0.01);不同流通环节样品中的腐霉利检出率差异不具有统计学意义(χ^(2)=3.251,P=0.196>0.05);4个镇街道采集到的蔬菜水果腐霉利检出数总体上无显著性差异(χ^(2)=7.436,P=0.063>0.05);经急性和慢性膳食风险评价,受检产品的%ARfD和%ADI值均小于100%,表示摄入风险可接受;食品安全指数法评价本次受检农产品的结果为质量安全风险处在可接受范围。结论:佛山市禅城区果蔬农产品尚未发现腐霉利超标情况,食品安全风险可控,但有关部门需持续开展动态监控。

一种腐霉利衍生物的设计与合成

含羧基基团的腐霉利衍生物,其羧基能够与蛋白质分子发生酰化或重氮化反应,能够对农药残留快速进行分析检测,在食品安全领域具有潜在应用价值。以2-氯丙酸甲酯和甲基丙烯酸甲酯为原料,通过亲核取代、酯水解、脱水反应、烷基化、硝基还原、氨基酰基化、酸胺缩合和三氟乙酸水解8步反应合成了腐霉利半抗原衍生物,其结构经^(1)H NMR,^(13)C NMR和MS(ESI)表征,并对其关键的合成工艺进行优化。结果表明:2-氯丙酸甲酯和甲基丙烯酸甲酯的反应时间为96 h时,亲核取代反应的收率最高为70%。硝基还原过程中,以二氯亚锡水合物作还原剂,且二氯亚锡水合物与中间体8的物质的量之比为4.0∶1.0时,硝基还原反应收率最高为63%。当化合物5和化合物9的物质的量之比为1.5∶1.0,且反应温度为85℃时,氨基酰基化反应最高收率为50%。

腐霉利的合成及密度泛函理论研究

我们以3,5-二氯苯胺、1,2-二甲基环丙烷-1,2-二甲酸甲酯(以下简称二甲酯)为原料制备得到了腐霉利。以降低原料消耗量,减少“三废”排放以及提高经济效益为目标,对腐霉利制备中的投料比、反应温度、溶剂进行了优化,确定了最佳反应条件。当使用水作为溶剂,3,5-二氯苯胺与二甲酯的摩尔比为1∶1,反应温度100℃时,以高收率低消耗得到腐霉利。同时,将密度泛函计算与前线轨道理论相结合,对腐霉利可能的衍生方式进行研究。

气相色谱法测定韭菜中腐霉利含量的不确定度评估

本实验采用QuEChERS前处理,气相色谱法(QuEChERS-GC-ECD)检测韭菜中的腐霉利含量,并做出不确定度评估。以JJF 1059.1—2012《测量不确定度评定与表示》和CNAS-GL006《化学分析中不确定度的评估指南》为指导,通过分析梳理各个检测环节,找出可能影响检测结果准确性的多个不确定因素,并对其做出系统分析、科学评估和量化处理。结果显示,引入本法不确定度的环节包括:标准溶液配置(标准物质及定容过程)、样品前处理(样品称量及试剂移取过程)、样品的重复性测定过程及仪器本身性能引入的不确定度。得到了韭菜中腐霉利含量测定的合成相对标准不确定度为0.335 mg/kg,扩展不确定度为0.670 mg/kg,本实验测得的腐霉利含量结果可表示为(8.24±0.670)mg/kg,k=2。建立了该分析方法的数学模型,为提高该法测定结果的准确性、科学性、稳定性提供了技术支撑。

韭菜中腐霉利标准样品的均匀性和稳定性评估

本文的研究对象为分装成最小单元的韭菜中腐霉利标准样品,对韭菜中腐霉利标准样品的均匀性和稳定性进行了研究。均匀性和稳定性监测结果分别经F值、t检验表明,单元内和单元间均匀程度以及标准样品的稳定性均达到标准样品的制备要求。

寡雄腐霉生防机制及其在农业中的应用进展

寡雄腐霉作为一种重要的生防微生物,具有广谱、高效和环保的防治特性,同时还能够促进作物生长和增产,为当今绿色农业生产、环保生态、可持续发展提供了新的研究方向。通过概述寡雄腐霉的生物学特性和对植物病虫害的生防机制,包括竞争、重寄生和分泌抗生物质等作用,以及寡雄腐霉在与植物互作中促进植物生长和诱导植物抗性的机制,并论述和展望寡雄腐霉在农业生产中的应用,包括其在田间试验的实际效果以及对可持续农业发展的潜在贡献。寡雄腐霉作为一种潜在微生物农药有着重要的应用前景,有利于减少化学农药的使用,推动植物病害绿色生物防治进程,促使现代农业可持续发展。

冷季型草坪腐霉枯萎病的防治

在城市生活中,草坪已经成了不可或缺的一部分,不仅为人们的生活增添了色彩,还为城市带来了源源不断的生机和活力。然而,冷季型草坪极易受到腐霉枯萎病的困扰,严重影响了草坪的健康、美观。为此,针对冷季型草坪腐霉枯萎病探索出一系列针对性的防治措施切实可行。基于此,围绕冷季型草坪腐霉枯萎病展开综述,结合冷季型草坪、腐霉枯萎病相关概述,分析了冷季型草坪腐霉枯萎病的病害处理,提出了冷季型草坪腐霉枯萎病的防治措施,以期为相关地区日后科学化种植冷季型草坪提供新思路、开辟新路径。

天水市草坪腐霉枯萎病的防治策略探析

腐霉枯萎病是禾本科草坪上一类重要的真菌性病害,这种病害在全国各地均有发生,可对所有类型的草坪造成严重影响,冷季型草坪受害最为严重。腐霉枯萎病不仅会降低草坪的景观效果,还会使其生态功能随之降低。为提供有效的腐霉枯萎病防治策略,以甘肃省天水市为例,介绍腐霉枯萎病的症状及发生规律,并详细说明改善草坪土壤条件、选择合适品种、选择合适建坪材料等建坪相关要点,以及水分管理、合理修剪、肥料管理、药剂防治等科学养管策略。

基于纳米抗体的胶体金免疫层析法快速检测蔬菜中腐霉利

为探索纳米抗体在小分子有害物胶体金免疫层析方法(colloidal gold immuno-chromatography assay,GICA)应用的可行性,以农药腐霉利为模型,系统研究胶体金标记参数、胶体金工作缓冲液以及样品前处理方法等对GICA的影响。结果表明:胶体金颗粒大小、标记pH值及抗体用量是保证纳米抗体-金标探针稳定性的关键因素。在最佳工作条件下,纳米抗体GICA检测腐霉利的检出限、半抑制浓度和可视检出限分别为0.44、6.29μg/L和200μg/L,其灵敏度比基于传统单克隆抗体的GICA提高了4.1倍。采用QuEChERS对韭菜、黄瓜、番茄等样品进行前处理,利用纳米抗体优良的有机溶剂耐受性,省去了有机溶剂吹干程序,加标样品平均回收率介于80.1%~109.6%之间,且对实际样品的检测与标准气相色谱-质谱法结果一致。本研究表明纳米抗体作为一种新型原料可替代传统抗体用于小分子有害物的快速检测,所建立的腐霉利GICA方法具有灵敏、准确、快速和简便等优势,可用于蔬菜腐霉利残留的快速筛查。

寄生玉米的6种腐霉及其致病性研究

从国内12省、自治区、直辖市玉米植株上分离出腐霉菌菌株,依据形态特征、培养性状、生长抑制温度,以及产生的有性与无性器官,鉴别出6个腐霉种:棘腐霉(Pythium acanthicum Drechsler),瓜果腐霉(P.aphanidermatum(Edson)Fitzpatrick),强雄腐霉(P. arrhenomanes Drechsler),禾生腐霉(P.graminicola Subramaniam),肿囊腐霉(P.inflatum Matthews),寡雄腐霉(P.oligandrum Drechsler),其中肿囊腐霉出现频率高,分布广泛。回接玉米表明,腐霉能够侵染玉米并引起病害,肿囊腐霉、禾生腐霉、强雄腐霉、棘腐霉是玉米青枯病的重要致病菌;瓜果腐霉能够引起玉米中部茎节腐烂;寡雄腐霉虽寄生玉米,但对玉米成株无致病力。

寡雄腐霉对禾谷镰刀菌防效及其产孢诱导剂筛选

寡雄腐霉(Pythium oligandrum)是一种对作物具有防病促生效果的生防真菌。为进一步从病害防控及产孢诱导2个方面拓展其应用潜力,以小麦致病菌禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)PH1为研究对象,通过平板对峙和活体抑菌试验研究寡雄腐霉PO-1的抑菌防病效果,并设计正交试验筛选产孢诱导剂配方,以提高寡雄腐霉卵孢子产量。结果表明,离体条件下PO-1可抑制PH1菌丝生长并降低其生活力,延缓病原菌孢子萌发和芽管伸长;在接种病原菌孢子液的小麦苗上喷洒PO-1卵孢子悬浮液能显著降低发病率和病斑长度;为进一步提高寡雄腐霉的产孢效率,以卵孢子产量为指标,通过正交试验筛选出了PO-1产孢诱导剂组合物,即在V8培养基中加入30 mg/L钼酸钠、150 mg/L硫酸铵及1000 mg/L EDTA铁钠,20℃培养5 d后产孢量达7.04×105个/mL,是普通培养条件下产孢量的3倍以上,上述结果可为寡雄腐霉生防菌剂研发提供理论依据和关键技术支撑。

腐霉利核酸适配体的筛选与鉴定

本文通过氧化石墨烯-体外指数富集配体系统进化技术,筛选并获得靶向腐霉利的核酸适配体Pr-A06和Pr-A08,通过二级结构预测,两种核酸适配体形成茎环结构和分子内G-四链体,结构稳定。使用胶体金法初步鉴定Pr-A06和Pr-A08,研究结果表明Pr-A06和Pr-A08解离常数(K d)分别为42.94±8.142 nmol/L、27.01±6.519 nmol/L,亲和力较好,并且特异性良好。Pr-A06浓度在0.1~1μg/mL之间有良好的线性范围,检测限为0.153μg/mL,Pr-A08浓度在0.05~1μg/mL之间有良好的线性范围,检测限为0.115μg/mL。本研究筛选的适配体为腐霉利的快速检测提供了新条件。

群结腐霉细胞壁降解酶的活性检测及基因表达分析

群结腐霉(Pythium myriotylum)是一种死体营养型病原菌,可侵染生姜引起茎基腐病,造成生姜产量损失,严重危害该产业发展。群结腐霉含有大量植物细胞壁降解酶(plant cell wall-degrading enzymes,PCWDEs),然而PCWDEs在群结腐霉侵染生姜过程中的功能和特性却鲜有报道。运用生物信息学手段预测群结腐霉细胞壁降解酶的种类和数量,并以生姜粉末和葡萄糖为碳源,比较菌丝生长的情况,利用转录组分析比较PCWDEs基因在不同碳源条件下的表达差异情况,同时对培养液中主要PCWDEs进行酶活检测。转录组数据显示,与葡萄糖培养基相比,生长在生姜粉末培养基上的群结腐霉中12个PCWDEs编码基因显著上调表达,利用CAZymes网站预测PCWDEs的底物主要为淀粉和纤维素;酶活检测发现,其中α-葡萄糖苷酶和β-葡萄糖苷酶活性较高,分别降解淀粉和纤维素。结果表明,群结腐霉在生姜粉末上生长过程中的PCWDEs以淀粉降解酶和纤维素降解酶为主。

紫菜腐霉拮抗菌的筛选和鉴定

生物防治广泛用于农作物的病害防治,该方法在藻类病害防控方面尚未有相关的报道。腐霉(Pythiumsp.)是引起紫菜(Neopyropia)赤腐病(redrotdisease)的主要病原,本研究的目的是筛选和鉴定对紫菜腐霉有拮抗能力的细菌。从养殖藻类及其养殖环境中分离鉴定了385株细菌,通过平板对峙法筛选到9株对腐霉有拮抗作用的细菌,进一步通过含毒介质法筛选到3株胞外产物对腐霉具有抑制活性的细菌(P3、P6和P19)。3株拮抗菌对8株腐霉均有拮抗活性,对腐霉生长的抑制率分别为52.09%~97.95%(P3)、26.81%~78.04%(P6)、10.47%~41.91%(P19)。通过16S rRNA鉴定和多位点序列进化分析(16Sr RNA-dnaA-dnaN-recA),将P3和P6鉴定为杀鱼假交替单胞菌(Pseudoalteromonaspiscicida),P19鉴定为解肽假交替单胞菌(Pseudoalteromonaspeptidolytica)。本研究筛选得到的拮抗菌为下一步建立紫菜赤腐病的生物防治方法奠定了基础。

伯克氏菌对群结腐霉引起的花生果腐病的生防潜力

花生果腐病是一种世界性的花生病害,群结腐霉是其主要致病菌之一,在花生生产过程中造成重大经济损失,生物防治是一种有效的绿色防控手段。为了控制花生果腐病的发生,从健康的花生植株上分离获得39株内生细菌,并筛选出5株对群结腐霉菌具有明显拮抗活性的菌株。结果表明,基于16S核糖体RNA序列和RecA序列,有5个菌株均被鉴定为洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderia cepacia),其中,菌株PRI08对群结腐霉菌菌丝生长显示出较强的拮抗活性。通过温室和田间试验,接种洋葱伯克霍尔德菌PRI08后,再用群结腐霉侵染花生植株,发病率分别降低了29.5%和11.83%。此外,洋葱伯克霍尔德菌PRI08对花生有明显的促生作用,增加主茎高、侧枝长、荚果数量、饱果率和荚果产量,分别为20.44%,19.98%,26.61%,20.36%和21.52%。本研究表明,洋葱伯克霍尔德菌PRI08具有作为花生果腐病生物防治剂和花生生长促进菌的潜力。

GC-MS法测定黄瓜中腐霉利的不确定度评估

依据GB 23200.113—2018标准方法,使用气相色谱-串联质谱法检测黄瓜中腐霉利农药残留,参照JJF 1059.1—2012要求对人员、设备和仪器等产生的不确定度进行分析,评估测定过程的不确定度。结果表明,95%置信区间下,k=2,黄瓜中腐霉利的添加量为0.200 mg·kg^(-1),最终测量值为0.19497 mg·kg^(-1),其扩展不确定度为0.005148 mg·kg^(-1);各项不确定来源中对检测结果影响最大的是样品定容。

腐霉利和烯酰吗啉在甘肃省平凉市设施番茄中膳食暴露风险评估

甘肃省平凉市农产品质检中心承担的2017—2021年5年市级例行监测任务中使用气相色谱-质谱联用法、液相色谱-串联质谱法测定58种农药。检测数据发现,232份设施番茄样品中腐霉利和烯酰吗啉农药残留合格率均为100%,但检出率分别21.55%和6.03%,相对其他农药检出率比较高;在检出腐霉利农药中有54%残留量分布在0.02~0.22 mg/kg范围,检出烯酰吗啉农药中有79%残留量分布在0.0001~0.1001 mg/kg范围,检出残留量相对比较集中,且2种农药的最高检出值均低于该农药最大残留限量值(MRL)。结果显示:腐霉利和烯酰吗啉慢性膳食摄入风险分别为1.21%和0.165%,均远小于100%。急性膳食摄入风险分别为8.06%和0.291%,远小于100%,急性和慢性风险均在可接受范围内;腐霉利和烯酰吗啉的风险得分分别为10.43和10.12,残留风险相对比较低,处于低风险水平。

果蔬汁中毒死蜱和腐霉利能力验证样品的研制及应用

本文通过制备果蔬汁中毒死蜱和腐霉利检测能力验证样品,来评价我国食品检测实验室对果蔬汁中毒死蜱和腐霉利检测的整体水平和能力。以青瓜和苹果为原料,制备毒死蜱和腐霉利残留果蔬汁基质参考物质,随机抽取10份考核样品检验均匀性。将考核样品放置在常温环境条件下储存检验运输稳定性,将考核样品放置在-18℃条件下储存检验储存稳定性。将能力验证样品以及参试指导书随机发放参加实验室,回收结果并进行稳健统计分析。样品的均匀性和稳定性良好,依据评价原则及回收的结果,大多数参加实验室检测结果评价满意。本次成功制备了果蔬汁中毒死蜱和腐霉利检测能力验证样品,通过组织能力验证考核反映出实验室在果蔬汁中毒死蜱和腐霉利的检测水平总体较好。