HPLC法检测食管癌高发区林县井头村玉米中的腐马素B_1(FB_1)

采用201强碱性阳离子粉末树脂为净化介质,以萘二醛(NDA)为衍生试剂进行腐马素(fumonisinB1)FB1的 HPLC检测。方法回收率平均为 92.3%,仪器检测限为 9.7×10-11g,方法检测限为 60ng·g-1。该方法灵敏度高,适于低含量样品中FB1的定性及定量检测。共检测了23份林县井头村玉米样品(19份口粮玉米和4份霉玉米),均证实受到了镰刀菌的严重侵染。经 HPLC检测,只在 2份口粮玉米中检出了FB1,其污染水平皆在121 ng·g-1和 2 560 ng·g-1范围内,阳性率分别为10.5%和 50.0%。此外,还检测了由口粮玉米中分出的镰刀菌的培养物共9份,阳性率为100%,其中Fusariumproliferatum形成FB1的产量最高,平均为1.66×105ng·g-1,而胶孢镰刀菌(F.subglutinans)的产量最低,平均为1.9×104ng·g-1。这种在玉米样品中检出FB1残留量水平较低的事实表明,在我国食管癌高发区林县井头村,玉米上镰刀菌毒素FB1的污染水平与食管癌高发率之间不存在统计相关性。

腐马素B_1单克隆抗体的制备与鉴定

本研究采用戊二醛一步法制备免疫抗原FB1 KLH和包被抗原FB1 BSA ,免疫BALB/c小鼠 ,建立间接酶联免疫吸附法 (I ELISA)并测定血清效价。结果表明 :FB1 BSA最适包被浓度为 1μg/ml,抗体最适稀释度为 1∶10 0 0 0 ,血清效价可达 1∶12 80 0 0。第 4次免疫后 ,通过淋巴细胞杂交瘤技术建立分泌FB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株 ,融合率为 96 % ,阳性率为 98%。细胞上清抗体ELISA效价为 1∶3 2× 10 6,腹水抗体效价为 1∶8× 10 8。经鉴定 ,该株单抗的亚类为IgG1,分子量为 185 4KDa ,染色体数目介于 96～ 10 4之间 ,亲和常数为 1 16× 10 7M-1,与另三种常见的真菌毒素 (串珠镰刀菌素 ,T 2毒素 ,玉米赤霉烯酮 )和两种载体蛋白 (牛血清白蛋白 ,血蓝蛋白 )无交叉反应 。