腭板培养及其在发育毒性研究中的应用

腭板培养是常用的器官培养方法之一。该方法具有快速、简便、经济、观察终点明确等优点。本文就腭板培养的方法、结果评价及其在发育毒性研究中的应用进行系统的阐述。

小鼠腭板旋转培养模型的建立及其初步应用

目的为研究全反式视黄酸(atRA)对小鼠腭板发育的影响及其致腭裂的机制,建立腭板旋转培养模型。方法于妊娠第12天取下小鼠胚胎腭移植体,以10-5～10-1μmolLatRA诱导,在旋转培养装置中连续培养72h,观察腭板发育融合情况。结果经72h培养后,对照组正常融合,与体内发育一致。atRA在10-5μmolL能促进腭板的融合,≥10-4μmolL抑制腭板的发育及融合,造成腭裂,融合率下降,并呈显著的剂量-效应关系。结论本模型中,腭板能在体外培养中存活并继续生长、发育、融合;atRA在10-5μmolL能促进腭板融合,高于10-4μmolL呈剂量-效应关系的抑制融合,造成腭裂,证明小鼠腭板旋转培养模型建立成功。

基因工程玉米Bt799对大鼠胚胎中脑细胞微团及腭板发育的影响

目的通过体外培养大鼠中脑细胞微团和胚胎腭板,研究基因工程玉米Bt799及所表达Cry1Ac蛋白发育毒性。方法实验用大鼠选用Wistar大鼠,购自北京大学医学部实验动物部,年龄9周,体重(200±20)g,常规饲养于SPF级动物房。第一部分:于雌鼠孕13 d提取胚胎中脑细胞,以即刻离心血清替代培养基中胎牛血清,在不同条件下培养中脑细胞5 d,并观察其增殖分化情况。中脑细胞微团培养分八个组进行,分别对应八种不同培养环境。将制备ICS的Wistar大鼠随机分为六组,其中NM组、TM3组、TM1M组、TM3M组、PCB组为前五组大鼠,BP组、BC组、PCA组因大鼠未经直接干预且不影响组间比较,故共同使用第六组大鼠的血清。其中TM3、TM1M、TM3M组使用经Bt799玉米干预3 d、1个月、3个月大鼠的血清,BP组使用添加Cry1Ac蛋白的血清,PCA使用添加双酚A的血清,PCB组使用经双酚A灌胃3 d大鼠的血清,NM组使用经亲本玉米郑58干预3 d大鼠的血清、BC组使用经AIN-93G饲料喂养3 d大鼠的血清。第二部分:于雌鼠孕12.5 d摘取大鼠胚胎腭板,以加入Cry1Ac蛋白(BP组)或全反式视黄酸(RA组)条件旋转培养腭板72 h,根据腭板融合情况计算融合率,判断Cry1Ac蛋白对大鼠胚胎腭板发育的影响。结果第一部分:TM3、TM1M、TM3M、BP组细胞增殖率、分化率与NM组、BC组相比差异均无统计学意义。PCA组和PCB组细胞增殖率和分化率低于NM组、BC组且差异有统计学意义。第二部分:BP组腭板融合率与BC组相比差异无统计学意义。RA组腭板融合率低于BC组,且差异有统计学意义。结论本研究未观察到Bt799玉米及其表达蛋白Cry1Ac的胚胎发育毒性。