地塞米松和维生素B_(12)交互作用对小鼠腭胚突超微结构影响的观察

目的:观察地塞米松和维生素B12作用后腭胚突超微结构的变化。方法:将孕鼠分为实验组(致畸组,拮抗组)和对照组,按体重分别注射地塞米松、地塞米松+维生素B12和生理盐水,分别在E14.5 d和E17.5 d处死孕鼠并获取胚胎,用扫描电镜观察E14.5 d的腭胚突表面结构,记录E17.5 d腭胚突的腭裂情况。结果:地塞米松作用后,小鼠胚胎的腭裂发生率从3.1%上升到42.1%(P<0.01),硬腭处细胞的伪足结构消失。维生素B12拮抗后,小鼠胚胎的腭裂发生率降低(P<0.05),伪足结构部分恢复。结论:维生素B12能部分恢复小鼠腭胚突细胞的表面超微结构,从而拮抗地塞米松的致腭裂效应。

不同浓度地塞米松对小鼠腭胚突间充质细胞作用规律的研究

目的研究细胞水平地塞米松(Dex)致腭裂畸形的生物学机制,筛选出影响腭胚突间充质(EPM)细胞生长的地塞米松最适浓度。方法腭胚突间充质细胞进行原代培养,实验组细胞分别以1×10-9、1×10-8、1×10-7和1×10-6 mol.L-1地塞米松加以干预,MTT比色法检测各组细胞的增殖率,碘化丙啶(PI)染色观察各组细胞的凋亡情况。结果在血清质量分数为10%条件下,随着Dex浓度的增加,细胞增殖率降低。第3天达到了地塞米松药物作用的最高峰。Dex浓度为1×10-6 mol.L-1组与对照组相比,各时段的P值均小于0.01。结论地塞米松在加药后第3天药物作用最显著,之后随着药物的代谢,作用减弱;浓度1×10-6 mol.L-1的地塞米松,既有一定程度的抑制EPM细胞生长的作用,又不会导致大量的细胞死亡。其可作为在细胞水平研究地塞米松致畸的生物学机制的最适浓度。

地塞米松对腭胚突上皮细胞PAR复合体和细胞极性的影响

目的探讨地塞米松(DEX)是否可以影响腭中嵴上皮细胞(MES)PAR极性复合体基因的表达,并进一步扰乱其细胞极性而影响腭融合。方法将孕鼠随机分为对照组和DEX组,DEX组按6 mg·kg-1腹腔注射地塞米松磷酸钠注射液,对照组注射0.9%氯化钠0.1 m L。在E13.5、E14.0、E14.5、E15.5、E17.5断颈处死孕鼠获取腭胚突,观察腭裂的发生情况,并通过苏木精-伊红染色、扫描电子显微镜观察腭上皮的形态改变,通过免疫荧光染色、蛋白质印迹及实时荧光定量聚合酶链式反应检测PAR3、PAR6、a PKC基因和蛋白的表达。结果 DEX组腭裂发生率为46.15%,对照组腭裂发生率为3.92%,DEX组的腭裂发生率高于对照组(χ2=24.335,P=0.00)。与对照组相比,DEX组腭胚突发育延迟且短小,腭中嵴上皮为非极性排列,只由单层的上皮细胞组成,腭胚突表面平坦,球状结构减少;PAR3和PAR6蛋白仅在腭上皮中表达,a PKC则表达于腭上皮和腭间充质中;PAR3、PAR6及a PKC基因的表达均减少。DEX在蛋白和基因水平下调PAR3、PAR6、a PKC的表达。结论 DEX可以导致腭胚突的生长发育延迟,并造成PAR极性复合体在蛋白和基因水平的表达下降,从而使MES极性丧失导致腭裂。

细胞凋亡及上皮-间充质转化在腭胚突融合过程中的作用探讨

目的:探讨细胞凋亡及上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)在腭胚突融合中的作用。方法:选用8周龄C57BL/6J近交系小鼠作为研究对象。于E13.5、E14.0、E14.5、E15.5及E17.5 d获取胎鼠腭胚突组织,在腭胚突融合的关键阶段,应用免疫组织化学和TUNEL方法检测EMT过程中蛋白变化和细胞凋亡率。每个时间点选择3张图片,应用image J软件进行图片灰度分析,采用SPSS12.0软件包进行统计学分析。结果:免疫组织化学和TUNEL法检测发现在腭融合的关键阶段(E14.5),腭中嵴上皮(medial edge epithelium, MEE)中出现纤连蛋白和波形蛋白表达和细胞凋亡,前中后腭部MEE细胞也出现细胞凋亡,中后部细胞凋亡率显著高于前部。结论:在体内腭胚突融合的关键阶段,EMT过程和细胞凋亡均参与了腭中嵴上皮带的退化消失,且前中后腭部的融合机制基本一致。

尼古丁和烟草浸提液对腭胚突细胞增殖影响的体内研究

目的:对比尼古丁和烟草浸提液对小鼠胚胎腭突发育的影响。方法:孕鼠分组,分别用尼古丁、烟草浸提液及生理盐水灌胃,于E 13.5、14.5、16.5处死孕鼠取胚鼠头部做冠状切片,通过HE染色和Ki67染色观察腭胚突发育及细胞增殖改变。结果:E 13.5仅出现1例腭突发育不对称;E 14.5实验组均有出现腭突发育不对称或延迟现象;E 16.5各组腭胚突发育完全,细胞增殖活性相似。结论:尼古丁和烟草浸提液均可轻微影响腭胚突发育;香烟中影响腭突发育的主要致畸物质可能为尼古丁。

BALB/c近交系小鼠腭胚突间充质细胞培养及其生物学特性研究

目的建立BALB/c近交系小鼠腭胚突间充质(EPM)细胞体外培养模型并研究其生物学特性。方法本研究于2012年11月至2013年7月在山西医科大学医学寄生虫研究所进行。采用机械分离及胰蛋白酶消化法,简便、准确、快速地获得高成活率的BALB/c近交系小鼠EPM细胞,采用免疫组化法鉴定细胞,并进行细胞增殖和形态学观察。结果 EPM细胞为成纤维细胞样细胞,呈梭型,单层漩涡状排列,排列无序,细胞核大,核分裂像较多。免疫组化染色显示,角蛋白标记为阴性,波形蛋白标记为阳性。EPM细胞呈指数生长,有较强的增殖能力。结论建立的BALB/c近交系小鼠EPM细胞体外培养技术模型可较好地保持EPM细胞的基本生物学特性。

先天性腭裂小鼠动物模型组织发育的微机图象分析

胚胎的腭突水平化运动是一个复杂的与口鼻腔发育、下颌运动、舌体下降以及上颌发育密切相关的动态过程。本文目的是在经 DEX 诱发的 A 系小鼠腭裂动物模型上,使用微机图象分析系统,准确地测试小鼠头部冠状切面下的硬腭前、中、后份以及软腭平面的有关线段组织,量化地反映出 DEX 对腭部发育的影响,全面评价颅面诸结构对腭部发育的协调作用,进而探讨 DEX 诱发小鼠腭裂的可能机理。