腮腺腺细胞体外极性培养及形态观察

利用微孔膜支持物铺以细胞外介质体外培养金黄地鼠腮腺腺细胞．细胞单层生长，呈立方状或柱状，体外可维持２个月．细胞连接处形成皱折，含较多微绒毛，底部与细胞外介质相连．胞膜、胞核与细胞器是极性分布可区分腺泡细胞，导管上皮以及肌上皮细胞。说明，在此条件下，腮腺腺细胞在结构上建立了细胞极性，保留了腺泡导管分泌单位的上皮细胞特点．

兔腮腺腺细胞的体外培养和功能评价

目的:体外培养获取成活率高且保持功能的兔腮腺腺细胞。方法:采用改良DMEM培养液进行兔腮腺腺细胞的原代及传代培养,观察腮腺腺细胞的生长状况;免疫细胞化学法检测细胞中泛角蛋白及α-淀粉酶蛋白和肌动蛋白的表达情况以鉴定细胞来源;检测α-淀粉酶蛋白在不同代次腺细胞中的表达情况,判断其分泌功能。应用SPSS10.0软件包对数据进行t检验。结果:体外培养的兔腮腺腺细胞具有一定的增殖能力,可传3代,存活4周以上;其特异性抗体泛角蛋白及α-淀粉酶蛋白染色为阳性,肌动蛋白染色阴性;不同代次腺细胞α-淀粉酶的表达强度随传代次数的增加而逐渐减弱,原代培养和传代培养第1代的细胞,α-淀粉酶的表达强度较高且可维持一定水平,两者无显著差异(P<0.05);传代培养第2代的细胞,α-淀粉酶含量明显下降,与前者差异显著(P<0.05);第3代细胞基本测不到α-淀粉酶的表达。结论:采用改良DMEM培养液体外培养兔腮腺腺细胞,可得到足量的腺细胞,且前2代细胞保持了较强的分泌功能,是选作实验研究的最佳阶段。

腮腺腺细胞体外原代培养

体外无菌条件下分离金黄地鼠腮腺腺细胞，消化法体外培养．结果：细胞呈单层生长，具有分裂能力，维持３周以上．免疫组织化学染色绝大多数细胞角蛋白阳性，波形丝蛋白阴性．部分细胞之间呈细胞粘接分子阳性．细胞核有较强核原癌基因ｃ—ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ蛋白表达．胞浆。α─淀粉酶呈强阳性反应．电镜观察，细胞具有完整电镜结构，偶见桥粒形成．提示：体外单层培养腮腺腺细胞可较长时间增殖、分化，建立一定细胞连接，具有蛋白合成功能．

藻酸盐诱发的免疫反应对兔腮腺腺细胞的作用

目的:探讨藻酸盐诱发的免疫反应对腮腺腺细胞的作用。方法:采用Alginate-BSA交联物免疫兔,ELISA法检测藻酸盐抗血清效价;实验分5组:A、空白对照组,B、牛血清白蛋白组,C、藻酸盐组,D、抗藻酸盐血清组和E抗藻酸盐血清+藻酸盐组,分别在1、6、12和24 h采用MTT法检测各组腮腺腺细胞增殖情况。倒置显微镜观察不同组腮腺腺细胞生长、形态和结构变化;扫描电镜观察E组腺细胞超微结构的改变。结果:Alginate-BSA交联物免疫兔约40 d,藻酸盐抗血清的效价达到1∶400;二者适宜反应浓度:藻酸盐为40μg/ml,抗藻酸盐血清的稀释度为1∶100;MTT检测结果A、B、C、D、E组在前3个时间点没有差异,而在24 h时,E组与A、B、C、D组差异显著(P<0.05),说明抗藻酸盐血清和藻酸盐的免疫反应对腺细胞的增殖有显著的抑制。倒置显微镜下在12 h和24 h可观察到E组个别腺细胞表面有破裂,胞质外溢,细胞形态不完整;其它组未见异常。扫描电镜观察E组在6 h即有个别腺细胞胞膜有破裂,呈圆孔形,细胞的轮廓仍清晰完整。12 h可见破裂细胞数增多,且细胞膜上破裂孔、裂也增多变大。24 h可见细胞的形态不完整,有较大范围胞膜破裂,细胞崩解。结论:抗藻酸盐血清和藻酸盐反应对腮腺腺细胞可造成免疫损伤,导致细胞死亡。

体外极性培养条件下腮腺腺细胞功能研究

利用体外极性培养模型测量腮腺腺细胞顶部和侧底部接触的培养液蛋白的相对含量．并用免疫组织化学方法分析细胞连接蛋白表达以及肾上腺素刺激下，α─淀粉酶．富含脯氨酸蛋白（ＰＲＰ）合成。结果表明，腮腺腺细胞具有细胞连接蛋白表达，并具备蛋白顶部极性分泌功能；在体外条件下，腮腺腺细胞蛋白分泌仍接受肾上腺素调节．