腹壁撤退反射实验测量方法概述

腹壁撤退反射(abdominal withdrawal reflex,AWR)实验,通过扩张肠道来评价动物的行为学反应,是目前应用最广的评价动物内脏敏感性的方法。然而,AWR实验操作涉及因素多,目前鲜有较为公认的操作规程。本文通过对涉及AWR实验测量方法的文献进行梳理,归纳出AWR操作的基本步骤,总结不同测量方法在扩张方式、气囊种类等相关因素方面的差异,并对相关因素的具体操作提出建议,以期为后续使用该方法评价动物内脏敏感性的研究者提供选择方法,为实验操作的标准化方案制定奠定必要基础。

气囊对腹壁撤退反射实验结果的影响

目的为腹壁撤退反射实验优选出恰当的制备气囊的材料。方法分别通过数显游标卡尺及X光图像对不同气囊在不同压力值下的直径进行测量;并采用3分疼痛阈值作为判断标准,测试不同气囊对大鼠造成明显内脏疼痛时所对应的压力值。结果圆形乳胶气球的直径随压力值增加变化均匀和缓,并且可以满足实验中常用的压力范围(20~80 mm Hg),其对大鼠造成内脏疼痛的阈值在伤害性刺激值附近,不会对大鼠肠道造成不可逆的损伤。结论腹壁撤退反射实验中使用圆形乳胶气球制备气囊较为理想。

利用腹壁反射重建人工膀胱反射弧的实验研究

目的 研究利用腹壁反射建立“腹壁反射 脊髓中枢 膀胱”神经传导通路 ,探讨躯体运动神经纤维长入副交感神经纤维后支配膀胱平滑肌产生控制性排尿的作用机制。方法 建立SD大鼠右侧“腹壁反射 脊髓中枢 膀胱”人工膀胱反射弧 ,以左侧为对照侧。通过刺激右侧下腹壁反射激发截瘫动物排尿。神经缝合术后 8个月 :①在破坏L5～S4脊髓节段前后 ,观察神经电生理 ,进行膀胱测压 ;②采用辣根过氧化物酶 (HRP)逆行追踪标记技术 ,观察大鼠T11～L1及L4～S4节段脊髓冰冻切片内HRP标记细胞的形态及分布情况。结果 ①在破坏L5～S4脊髓节段造成截瘫前后 ,单相方波 (3mA ,0 .3ms)刺激实验侧T13 后根 ,可记录到实验侧动作电位、膀胱平滑肌复合肌肉动作电位及膀胱平均内压 ,其形态及波幅与对照侧相似。②实验侧T13 脊髓前角及双侧L6～S4节段脊髓中间带外侧核区有HRP标记阳性细胞 ,而对照侧T13 脊髓前角未发现HRP标记细胞。结论 体神经的运动传出支经自体神经移植 ,其轴突能再生长入膀胱平滑肌内副交感神经节细胞 ,并具有良好的传导运动兴奋的功能 ;利用截瘫平面以上的体反射 ,通过硬膜囊内神经根自体神经移植缝合的方法 ,可建立新的人工膀胱反射弧 。

自体神经移植构建犬腹壁-膀胱反射弧的实验研究

目的利用腹壁反射建立“腹壁体神经-脊髓中枢-膀胱”神经传导通路,探讨躯体运动神经纤维长入副交感神经纤维后支配膀胱逼尿肌产生可控性排尿的可能性。方法选用4只雄性犬(右侧为实验侧,左侧为对照侧),右侧T12前根近端与右侧S2前根远端通过一段自体移植神经在硬膜囊内行显微缝合,保持T12后根完整,经一段时间轴突再生后,建立“腹壁体神经-脊髓中枢-膀胱”这一新的排尿反射弧。神经吻合术后12、18个月,分别在破坏L5￣S4脊髓节段前后,通过刺激右下腹壁激发截瘫动物排尿,观察膀胱神经电生理及膀胱测压。结果实验侧膀胱神经动作电位、膀胱逼尿肌动作电位及膀胱平均内压,其形态与波幅与对照侧相似。结论体神经的运动传出支经自体神经移植,其轴突能再生长入膀胱平滑肌内副交感神经节细胞,并具有良好的传导运动兴奋的功能;利用“腹壁体神经-脊髓中枢-膀胱”这一人工反射弧,可望实现脊髓损伤患者膀胱可控性排尿功能。

慢性内脏痛觉敏化模型的两种行为学评价指标比较

目的：比较慢性内脏痛觉敏化模型的两种行为学评价指标,即腹壁撤退反射和腹外斜肌放电测量,为内脏痛觉敏化提供较为客观、有效的评价方法。方法：SD大鼠出生后8～15天内每天给予一次结直肠扩张（CRD）刺激以后正常饲养至第八周,分别采用腹壁撤退反射（AWR）评分法和腹外斜肌放电测量方法评估大鼠受CRD刺激时的痛觉敏化程度。结果：AWR评分方法比较模型组与对照组,在20～60 mmHg CRD时评分模型组显著高于对照组,在80 mmHg CRD差异不明显;对照组痛阈为30.42±1.34 mmHg,模型组痛阈为13.13±1.34 mmHg,（P〈0.001）;腹外斜肌放电测量,在20～60 mmHg CRD时模型组放电明显高于对照组,80 mmHg CRD差异不明显;两组痛阈分别为对照组37.5±4.53 mmHg,模型组25.0±3.27 mmHg,（P〈0.05）。结论：两种方法均可作为慢性内脏痛觉敏化模型是否成功的筛选指标,相比之下,前者较为简便,后者较为客观。

新生期结肠刺激及性别对幼鼠内脏痛敏感性的影响

目的:探讨新生期伤害性结直肠扩张刺激(CI)对幼鼠内脏痛觉敏感性的影响及其性别差异。方法:8日龄新生SD大鼠随机分成实验组和对照组,每组16只;实验组新生鼠在出生第8天开始给予CI,每日1次,连续7天;对照组则不给予CI。到6周龄时进行内脏敏感性测定。采用腹壁撤退反射(AWR)评分的测定作为不同的扩张压力下结直肠疼痛反应指标,评估肠道痛觉敏感性。结果:6周时两组大鼠体重无显著差异;两组大鼠降结肠均未见明显病理组织损伤;随着CRD压力增加,两组大鼠AWR评分逐渐增加;在控制幼鼠性别影响因素后,当CRD压力分别为20mm-Hg、40mmHg及60mmHg时,实验组AWR评分的边缘估计均值均高于对照组,差别有显著意义。在控制组别等影响因素后,当CRD压力分别为60mmHg、80mmHg时,雌性幼鼠AWR评分的边缘估计均值均高于雄性幼鼠,差别有显著意义;当CRD压力为20mmHg、40mmHg时,虽然雌性幼鼠AWR评分的边缘估计均值仍高于雄性幼鼠,但差别无显著意义。结论:在新生期进行持续的结直肠刺激能造成幼鼠痛阈下降,出现慢性内脏痛觉高敏感性,并且这种高敏感性具有性别差异。

大鼠肠易激综合征模型的建立及其评价

目的探讨腹泻型肠易激综合征(D-IBS)动物模型的建立方法,为临床治疗提供依据。方法雄性Wistar大鼠40只,随机分为IBS1(乙酸灌肠加束缚应激)组I、BS2(束缚应激)组、灌肠对照组和正常对照组,采用乙酸灌肠加束缚应激和Williams方法制作IBS动物模型,用腹壁撤退反射(AWR)评分和腹外斜肌放电活动检测对其内脏敏感性进行评估,同时进行组织学检查对肠黏膜组织的组织学改变进行评价。结果两模型组大鼠AWR评分和腹外斜肌收缩次数在不同扩张容量下均较对照组明显增加(P<0.05)。组织学分析显示各组大鼠均无明显的炎症性表现。结论乙酸灌肠加束缚应激和Williams方法制成的IBS动物模型符合IBS的内脏敏感性机制,可用于IBS的试验研究。

脊髓NMDA受体在慢性内脏高敏大鼠中作用研究Ⅰ

目的从整体行为学角度探讨脊髓NMDA受体在慢性内脏高敏大鼠中的作用。方法选用SD大鼠，模型组大鼠在出生后d8-d15内，每天接受一次结直肠扩张刺激；对照组除了不行结直肠扩张刺激外，其他情况同模型组。大鼠成年后用腹壁撤退反射（AWR），进行肠道敏感性评估。观察两组鞘内注射MK-801前后AWR评分和腹外斜肌对结直肠扩张刺激的反应是否存在差异。结果①在20～60mm—HgCRD时，模型组AWR评分明显高于对照组（P〈0．05）。②鞘内注射不同浓度MK-801后，模型组AWR测痛阈呈剂量依赖性升高（P〈0．05），而对照组没有表现出明显的剂量依赖性。③鞘内注射MK-801（1．5mol·L^-1）后，模型组腹外斜肌对CRD反应较给药前明显降低（P〈0．05），肌电测痛阈明显升高（P〈0．05）；而对照组给药前后无改变。④模型组结直肠病理检查未见明显病理性改变。结论大鼠脊髓NMDA受体可能参与慢性肠道高敏感机制。

金荞麦提取物改善肠易激综合征大鼠内脏痛觉过敏的效果及其机制

目的观察金荞麦提取物(Fag)对肠易激综合征(IBS)大鼠内脏痛觉过敏的影响及其机制。方法采用腹壁撤退反射(AWR)评分观察Fag(6、24 g·kg-1)口服给药两周后的IBS大鼠模型的内脏痛觉过敏的变化,并用免疫荧光法观察腰骶段脊髓背根神经(DRG)的辣椒素受体亚型TRPV1表达水平;采用细胞膜片钳记录Fag(0.1、0.3、1、3 g·L-1)对辣椒素(CAP)激活大鼠的DRG细胞TRPV1电流(ITRPV1)的影响。结果 Fag 24 g·kg-1在体内可显著降低升高的IBS大鼠AWR评分,IBS大鼠腰骶段DRG的TRPV1表达增高;Fag 6、24 g·kg-1干预后DRG的TRPV1表达下降;体外0.1、0.3、1、3 g·L-1Fag可浓度依赖地抑制CAP激活的分离DRG神经元ITRPV1,IC50为0.83 g·L-1。结论 Fag可通过下调IBS大鼠TRPV1受体表达改善大鼠痛觉过敏,可抑制DRG神经元ITRPV1峰值,调节痛觉信号传递。

电针对慢性内脏痛敏大鼠痛反应的影响

目的观察电针对慢性内脏痛敏大鼠痛反应的影响，为临床电针治疗慢性内脏痛机制研究打下基础。方法对新生幼鼠给予结肠扩张刺激，造成其成年后慢性内脏痛觉敏化。对此内脏痛大鼠隔日电针1次共4次，观察其腹壁撤退反射评分，腹外斜肌放电幅值和甩尾反射潜伏期等指标变化。结果内脏痛大鼠与正常对照大鼠相比，腹壁撤退反射评分增高，肌电幅值明显增大，甩尾反射潜伏期明显缩短；内脏痛大鼠电针4次后上述3项指标与电针前相比，差异有统计学意义，而与正常对照大鼠之间差异无显著性。结论电针能明显改善慢性内脏痛大鼠的痛反应。

基于5-HT通道探讨天灸法治疗内脏高敏性肠易激综合征小鼠的机制

目的:观察天灸法对内脏高敏性肠易激综合征(IBS)小鼠结肠组织5-羟色胺(5-HT)及其受体蛋白表达的影响,探讨天灸法治疗IBS的作用机制。方法:将40只SPF级新生昆明小鼠随机分为正常组、模型组、拮抗组和天灸组,每组10只。造模前拮抗组于侧脑室注射0.2m L对氯苯丙氨酸(PCPA),模型组、拮抗组和天灸组小鼠应用直肠内冰乙酸刺激结合夹尾刺激制备内脏高敏性IBS模型。造模后,天灸组小鼠行天灸法干预,穴取“中脘”“天枢”“足三里”,每周各穴贴药1次,每次贴药2 h,共3周。采用腹壁回缩反射(AWR)评分和腹壁肌电波幅评价小鼠内脏高敏状态;HE法观察小鼠结肠组织形态变化;免疫组化法检测小鼠结肠组织5-HT及其受体蛋白表达。结果:与正常组比较,20、40 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)压力下模型组腹壁肌电波幅升高(P<0.05),60、80 mm Hg压力下模型组AWR评分及腹壁肌电波幅均升高(P<0.05);与模型组比较,20 mm Hg压力下天灸组腹壁肌电波幅降低(P<0.05),40 mm Hg压力下天灸组与拮抗组AWR评分均升高(P<0.05),60、80 mm Hg压力下天灸组与拮抗组AWR评分及腹壁肌电波幅均降低(P<0.05)。与正常组比较,模型组黏膜上层结构轻度紊乱,黏膜下层可见中度炎性细胞;与模型组比较,天灸组与拮抗组黏膜上层固有腺体形状规则,可见少量炎性细胞。与正常组比较,模型组结肠组织5-HT及5-羟色胺受体3(5-HT3R)蛋白平均阳性面积率增加、5-羟色胺受体4(5-HT4R)蛋白平均阳性面积率降低(P<0.05);与模型组比较,天灸组和拮抗组结肠组织5-HT及5-HT3R蛋白平均阳性面积率降低(P<0.05)。结论:天灸法可改善内脏高敏性IBS小鼠内脏高敏状态,可能与5-HT信号通路介导的肠脑轴的调节有关。

新生儿肠套叠1例报告

患儿男性28天。头胎足月产。腹胀哭闹就诊。查体：T37．2℃，体重3．2k，皮肤潮红，五官端正，无产伤。心肺无异常。腹部膨隆似鼓，腹壁静脉怒张，腹软，无肌紧张，未扪及肿块。扣诊高度鼓音，肠鸣音减弱，生理反射存在，病理性反射未引出。实验室检查：Hb8．5g／I，RBC2．9×10^12／L，WBC13．5×10^9／I，L71％，大便镜检未见异常。