壳寡糖和双歧杆菌对腹水型肝癌细胞H22的抑制作用

采用过氧化氢氧化法制备水溶性壳寡糖,采用Q TRAP LC/MS/MS System测定壳寡糖的平均分子量,观察壳寡糖和双歧杆菌对腹水型肝癌细胞H22的抑制作用.使用JEM1200EX透射电子显微镜观察不同浓度壳寡糖和双歧杆菌对H22细胞作用后H22细胞学的变化,结果表明,平均分子量为609的壳寡糖及双歧杆菌单独对腹水型肝癌细胞H22抗(抑)制作用均显著;壳寡糖(浓度为1.5%)与双歧杆菌(109CFU/mL)具有协同增效抗肿瘤作用.

生物蜂王浆抑制腹水型肝癌细胞H_(22)生长的实验研究

目的 :观察生物蜂王浆对腹水型肝癌细胞 H2 2 体内生长的抑制作用。方法 :以不同的生物蜂王浆即 :经扶正抗癌 1号方、以毒攻毒 2号方、清热解毒 3号方喂养的蜜蜂所分泌的蜂王浆分别灌喂荷 H2 2 肿瘤小鼠后 ,观察其体内抗肿瘤效果 ,并以普通蜂王浆和生理盐水灌喂为对照。 结果 :在所有生物蜂王浆灌喂组中 ,1号生物蜂王浆有明显抑制肿瘤生长和延长生存期的作用 ;并能显著增加小鼠外周血白细胞数 ,升高血 IL- 2和 IFN- γ含量 ;组织学检查显示 ,肿瘤细胞大部分变性坏死 ,肿瘤周围有大量淋巴细胞、浆细胞浸润。 结论 :1号生物蜂王浆具有明显抗肿瘤作用 ,其机制可能与抑制或杀伤肿瘤细胞 ,提高机体的免疫功能有关。

小鼠肝、再生肝、H22_a腹水型肝癌细胞及荷癌鼠肝中脂质过氧化物水平与SOD及GSH-P_x酶活力

测定了再生鼠肝、H22_a 腹水型肝癌细胞及荷癌鼠肝中脂质过氧化物水平、SOD 及 GSH-Px 的活力,与正常鼠肝相比,再生鼠肝和荷癌鼠肝的脂质过氧化物水平增高,GSH-Px 活力降低,荷瘤鼠肝的 SOD 活力也高于正常鼠肝,去甲斑蝥素和斑蝥酸钠能使荷瘤鼠肝的 GSH-Px 活力上升,脂质过氧化物水平下降。

益气逐瘀药粉抑制实验小鼠移植性H_(22)腹水型肝癌细胞的实验研究

目的:观察益气逐瘀药粉抗肿瘤的作用。方法:将小鼠随机分为5组.4组移植 H_(22)腹水型肝癌细胞,并予各组相应的治疗,2周后观察抑瘤率、存活率、小鼠脾脏组织淋巴细胞激活的杀伤(LAK)细胞和自然杀伤(NK)细胞的活性,正常小鼠肝组织、荷瘤小鼠肝癌组织中的过氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性、过氧化脂质(LPO)含量。结果:化疗组抑瘤率为80.51%,存活率为31.25%;中药组抑瘤率为60.16%,存活率为93.75%;中药加化疗组抑瘤率为80.93%,存活率为56.25%;与对照组比较,差异均有显著性(P<0.05或 P<0.01)。该中药粉能提高荷瘤鼠 LAK 细胞和 NK 细胞活性;降低肝癌组织中 SOD 和CAT 的酶活性;与对照组比较,差异均有显著性(P<0.01)。结论:益气逐瘀药粉有一定直接杀伤肿瘤细胞的作用,对化疗有增效减毒作用,能调节免疫功能,影响癌组织自由基代谢,可应用于消化道肿瘤的辅助治疗。

三肽化合物酪丝亮肽(YSL)对腹水型肝癌H_(22)小鼠免疫调节作用实验研究

目的观察三肽化合物酪丝亮肽(tyroserleutide,YSL)对腹水型肝癌H22小鼠的抗肿瘤作用,观察YSL对荷瘤小鼠T淋巴细胞转化及NK细胞杀伤活性的影响。方法建立腹水型肝癌H22小鼠动物模型,观察YSL对腹水型肝癌H22小鼠生存时间的影响;以MTT法检测YSL对荷瘤小鼠T淋巴细胞转化及NK细胞杀伤活性的影响。结果YSL能够明显延长腹水型肝癌H22小鼠生存时间;YSL在5μg.kg-1和50μg.kg-1时可以促进腹水型肝癌H22小鼠T淋巴细胞的转化;YSL在0.5、5和50μg.kg-1时增强荷瘤小鼠NK细胞杀伤活性。结论YSL可以延长腹水型肝癌H22小鼠的生存时间;促进荷瘤鼠的T淋巴细胞转化及NK细胞杀伤活性。

姜黄素对小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移细胞株(HCa-F)生物学行为的影响

目的研究姜黄素对小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移细胞株(HCa-F)生长和转移行为的影响.方法体外实验中用15～250 μmol/L姜黄素分别处理HCa-F细胞48 h,以MTT法检测HCa-F细胞的生长活性;以生长曲线评估姜黄素对细胞增殖的影响;以流式细胞仪检测姜黄素对细胞周期分布的影响.体内实验中,于615小鼠腹腔、足垫接种HCa-F细胞,通过ip给药的方法,观察姜黄素对腹腔接种HCa-F细胞的615小鼠生存率的影响和对HCa-F细胞在615小鼠淋巴道转移的影响.结果姜黄素可抑制HCa-F细胞的生长,对HCa-F细胞生长抑制率为7.23%～82.23%,呈剂量依赖性,IC50为51.48 μmol/L.以非细胞毒性最大剂量15 μmol/L姜黄素作用48 h后,HCa-F细胞的群体倍增时间增加,生长速度受到抑制,细胞周期被重新分布,阻滞于S期.姜黄素ip给药50mg/kg抑制小鼠腹水瘤的生长,延长荷瘤小鼠的生存期,使瘤细胞淋巴道转移率从70%下降到40%.结论姜黄素可抑制小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移细胞株(HCa-F)的增殖与转移.

脂质体瘤苗抗小鼠H_(22)腹水型肝癌作用研究

目的观察脂质体瘤苗的抗癌作用,寻找有效的抗肿瘤疫苗。方法制备H22肝癌细胞的脂质体瘤苗,将该瘤苗通过腹腔接种,免疫荷瘤的BalB/c小鼠(LAg组),同时设单用抗原免疫组(Ag组)和DHanks组作为对照,比较各组小鼠的生存期,并用MTT法检测外周血和脾淋巴细胞对H22肝癌细胞的体外杀伤作用。结果LAg免疫的BalB/c鼠的平均生存期及脾和外周血淋巴细胞毒活性均高于Ag组及DHanks组(P<0.05),Ag组及DHanks组两者之间差异无显著性(P>0.05)。结论单用H22抗原不能诱导有效的抗肝癌免疫反应,用脂质体包裹后,其抗肝癌作用可明显增强,脂质体瘤苗有潜在的临床应用前景。

Th22细胞在肝癌恶性腹水中的发病机制

目的:白介素-22(interleukin-22,IL-22)分泌性CD4+T细胞(IL-22-producing CD4+T cells Th22 cells)是最近几年才被发现和确认的新的CD4+细胞,Th22细胞已确定在人类某些癌症显著增多.然而,Th22细胞在肝癌恶性腹水(malignant ascites,MA)中如何调节抗肿瘤免疫反应等问题仍有待探讨.所以我们对比研究了Th22细胞在MA、同源外周血和健康对照组外周血中的表达比例.由于淋巴细胞的浸润密切地受到趋化因子/趋化因子受体(chemokine receptor,CCR)相互作用的调节,因此我们设法阐明趋化效应在MA对Th22细胞主动募集过程中的影响.方法:收集了26例肝癌MA患者,15例健康对照.流式细胞术检测Th22、CCR4、CCR6和CCR10的表达.酶联免疫吸附试验(ELISA)测定样本趋化因子(CC基序)配体20[chemokine(c-cmotif)l i g a n d 20,CCL20]、CCL22、CCL27和细胞因子IL-22的浓度.结果:MA中Th22细胞和IL-22的比例较同源外周血和健康对照组外周血显著升高.趋化因子CCL20、CCL22和CCL27在MA中的浓度远高于同源配对血清者.Th22细胞表达高水平的CCR6、CCR4和CCR10,其对应的配体CCL20、CCL22和CCL27在MA中也显著升高.此外,MA中Th22细胞和Th17细胞以及IL-22呈正相关.结论:MA中Th22细胞的比例显著高于同源配对血清者,趋化因子CCL20、CCL22和CCL27在MA中的浓度远高于同源配对血清者.由此分析,CCL20/CCR6、CCL22/CCR4和/或CCL27/CCR10趋化轴参与了Th22细胞募集浸润到腹膜腔的过程.这些研究表明,Th22细胞可能参与MA的发病机制,而Th22细胞可能是干预治疗合适的细胞靶点.

西松烷型二萜对小鼠H22肝癌腹水瘤的抑制作用及其机制

目的研究西松烷型二萜对小鼠H22肝癌腹水瘤抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法建立昆明小鼠H22肝癌腹水瘤模型,随机分为生理盐水组（Ⅰ组）、西松烷型二萜低剂量组（Ⅱ组）、中剂量组（Ⅲ组）、高剂量组（Ⅳ组）与环磷酰胺组（Ⅴ组）。建模后24 h开始给药,Ⅱ~Ⅳ组以不同剂量的西松烷型二萜连续灌胃给药7 d,对照组给予同体积生理盐水,Ⅴ组连续腹腔注射环磷酰胺7 d,末次给药24 h后处死半数动物。计算平均腹水量、腹水抑制率、腹水中瘤细胞数、瘤细胞存活率、细胞因子白细胞介素2（IL-2）、干扰素γ（IFN-γ）浓度。另一半小鼠继续观察生存状况,计算生存期及生存延长率。结果Ⅲ、Ⅳ组腹水量与Ⅰ组比较明显减少（F=28.37,q=2.91、4.76,P〈0.05）,腹水抑制率随药物剂量增加而升高。Ⅱ~Ⅳ组瘤细胞计数及瘤细胞存活率与Ⅰ组比较显著降低（F=7.21-19.13,q=2.92~4.76,P〈0.05）。Ⅱ~Ⅳ组小鼠平均生存期与Ⅰ组比较显著延长（F=35.77,q=2.91~4.75,P〈0.05）,延长率分别为20.21%、42.10%和51.02%。与Ⅴ组比较,Ⅱ、Ⅲ组小鼠在饮食、活动等方面状态较好。Ⅳ组用药期间食欲下降,活动少,停药后好转。Ⅱ~Ⅳ组IL-2和IFN-γ含量与Ⅰ组比较,差异均有显著性（F=21.17、35.47,q=2.93~4.77,P〈0.05）。结论西松烷型二萜对H22肝癌腹水瘤的生长具有明显的抑制作用,其机制可能与影响细胞免疫功能有关,其有可能开发成为一种新的海洋源性抗肿瘤药物。

复方苦参注射液通过调节小鼠肝癌H22细胞自噬抑制肿瘤生长的实验研究

目的 该实验旨在探究复方苦参注射液对小鼠肝癌H22细胞自噬的影响,为进一步探究可能发生机制奠定基础。方法 建立肝癌H22细胞荷瘤小鼠模型;将荷瘤小鼠模型随机分为模型对照组(生理盐水组)、复方苦参注射液组(低剂量7.5 g生药/kg、中剂量15 g生药/kg、高剂量30 g生药/kg),每组8只,建模48 h后开始给药,各组均为腹腔注射给药,连续给药12 d,对比观察各组小鼠生长情况,记录瘤体大小,绘制瘤体生长曲线;计算各组小鼠的平均瘤重及抑瘤百分率,通过透射电镜观察自噬体、自噬泡的形成(自噬金标准),Western blot检测自噬因子LC3-Ⅰ及LC3-Ⅱ的蛋白表达,并计算二者比值,以检验自噬水平。结果 与模型组相比,复方苦参注射液各组均能抑制小鼠瘤体增长,抑瘤率和复方苦参注射输液浓度之间呈正相关(P<0.05);复方苦参注射液各组自噬体、自噬泡明显增多,且自噬体、自噬泡和复方苦参注射输液剂量之间存在浓度依赖关系;复方苦参注射输液各组LC3-Ⅱ表达明显增高(P<0.05),复方苦参注射液各组肿瘤组织中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ均明显增高(P<0.05),且复方苦参注射液各组间存在明显量效关系(P<0.05)。结论 复方苦参注射液可改善肝癌细胞H22荷瘤小鼠的生长情况,减缓瘤体生长速度,提高肿瘤抑瘤率,促进肝癌细胞H22自噬而抑制肿瘤生长,并且和复方苦参注射输液剂量之间存在一定的量效关系。

含笑内酯对H22肝癌腹水瘤模型小鼠腹腔积液的治疗作用

目的探讨含笑内酯(MCL)对H22肝癌腹水瘤模型小鼠腹腔积液的治疗作用及机制。方法取H22肝癌腹水瘤细胞(0.2 m L,约2×10~7个)注射至40只BALB/C小鼠腹腔建立腹水瘤模型。接种24 h后小鼠随机分为MCL组[50 mg/(kg·d)MCL连续腹腔给药7 d]和模型组(等剂量生理盐水),每组20只。每日观察小鼠日常活动状态,记录小鼠体质量、腹围的变化。末次给药24 h后各组处死13只小鼠,采血后检测肿瘤标志物糖类抗原(CA)199、血清癌胚抗原(CEA)、铁蛋白、CA242、甲胎蛋白(AFP)水平;留取肝脏组织及腹水瘤细胞行HE染色,观察其病理状态;流式细胞术检测2组小鼠腹水瘤细胞凋亡情况。结果实验第4天开始,与模型组相比,MCL组体质量下降,腹围缩小(P<0.05)。与模型组比较,MCL组CEA、CA242、AFP水平出现下降,铁蛋白明显升高,肝组织及腹水瘤细胞水肿程度降低,腹水瘤细胞凋亡率升高(均P<0.05)。结论 MCL可抑制H22肝癌腹水瘤小鼠腹腔积液的生成,其机制可能是通过诱导肝癌细胞凋亡来实现的。

CD69分子在肿瘤抗原体外活化H22肝癌腹水瘤小鼠脾淋巴细胞的表达

目的:探讨H22肝癌腹水瘤小鼠淋巴细胞在多克隆激活剂刀豆蛋白A(ConA)、H22肝癌细胞肿瘤抗原刺激下,体外活化细胞表面分子CD69的表达,判定肿瘤进行性生长时和后期机体的免疫状态。方法:将H22肝癌细胞接种于BALB/C小鼠腹腔,建立H22肝癌腹水瘤模型。观测成瘤率、平均体重;利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测淋巴细胞早期活化标志-活化细胞表面分子CD69,在分别加入10%FBS的RPMI-1640完全培养液、ConA(终浓度为10ug/mL)、H22肿瘤抗原(2×106cells/mL)刺激物刺激下的表达情况。结果:接种H22肝癌腹水瘤的成瘤率100%,H22肝癌腹水瘤组平均体重为(32.03±3.44)g,生理盐水对照组无肿瘤生成,平均体重为(19.15±1.14)g,两组差异有显著性(t=7.12,p=0.00)。荷瘤鼠体重变化随时间推移呈对数增长,而对照组呈平缓增长,两因素方差分析,荷瘤鼠与非荷瘤对照组之间差异有显著性(F=5.71,p=0.05),不同天数的体重差异有高度显著性(F=63.15,p=0.00)。荷瘤鼠脾T细胞的CD69分子体外活化率分别为(7.59±8.68,19.42±12.57,5.38±8.24)%,对照组脾T细胞的CD69分子体外活化率分别为(15.81±9.92,44.96±13.84,15.18±9.15)%,荷瘤鼠CD69分子体外活化率无论RPMI-1640组、ConA组,还是H22肿瘤抗原组,均比对照组的RPMI-1640组、ConA组、H22肿瘤抗原组明显降低,经多因素方差分析,差异有显著性(F=9.20,p=0.01)。结论:在肝癌感染后期,荷瘤鼠T细胞的CD69分子体外活化明显降低,机体免疫功能受到抑制。

水律汤对小鼠H22肝癌腹水模型尿中K^+、Na^+、Cl^-离子浓度的影响

目的观察水律汤对小鼠H22肝癌腹水模型尿中K+、Na+、Cl-离子浓度的影响。方法取H22肝癌细胞接种于小鼠腹腔造成肝癌腹水模型,随机分为空白对照组(NS)、模型组(M)、水律汤低剂量组(TA)、水律汤高剂量组(TB)、模型+NO供组(NO)、水律汤高剂量组+NOS抑制剂组(NOS),造模后第5天起用水律汤连续灌胃5天,检测小鼠尿K+、Na+、Cl-离子浓度。结果TA组、TB组、NO组尿液中K+、Na+、Cl-离子浓度较正常组均升高(P<0.01),与模型组比较也是升高的(P<0.01),腹腔内注射NOS抑制剂尿中平均Na+、K+、Cl-浓度则明显低于TB组(P<0.01)。结论水律汤能使小鼠H22肝癌腹水模型尿中Na+、K+、Cl-排出增加,减轻水钠潴留,可能是其消腹水作用机制之一。

芝麻素对肝癌H22细胞增殖及H22荷瘤小鼠肿瘤生长的影响

目的观察芝麻提取物芝麻素对小鼠肝癌H22细胞增殖的影响及其对H22荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用。方法用MTT法检测不同质量浓度的芝麻素对小鼠肝癌H22细胞体外增殖的影响;同时将移植H22瘤株的昆明种小鼠分成:模型组(生理盐水)、环磷酰胺(30 mg/kg)组、芝麻素高、低剂量(150、15 mg/kg)组、观察芝麻素对荷瘤小鼠的抑瘤作用。结果芝麻素在体外对H22肝癌细胞的增殖有显著的抑制作用,以8、16、32μg/mL组在48 h的抑制率最显著;芝麻素在体内对H22肿瘤细胞的生长有明显的抑制作用,芝麻素低剂量组的小鼠皮下瘤质量较模型组低(P<0.05),但仍比环磷酰胺组高(P<0.05),芝麻素高剂量组和模型组比较无显著差异(P>0.05)。结论芝麻素有明显抑制肝癌H22细胞增殖的作用。

紫杉醇长效PLGA微球的制备、性质及其在体内抗H22型肝癌的疗效

目的制备长效紫杉醇聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)微球,对微球的常规理化特性、体外释放特性进行考察并对该微球的抗肝癌疗效进行鼠体内评估。方法采用单乳溶剂挥发法制备紫杉醇PLGA微球成功后利用激光粒度分析仪测定其平均粒径,利用扫描电镜观测微球表面形貌,对3批微球样品进行载药量及体外释放检测,构建小鼠H22肝癌模型,以瘤内方式给药,给药15 d后观测肿瘤病理切片,评估疗效。结果微球表观平整,形态圆滑,平均粒径为36.4μm,3批样品平均载药量为7.42%,可维持30 d左右的体外释放,体内实验显示微球具备良好抗H22型肝癌疗效。结论所制备的紫杉醇PLGA缓释微球具备良好的理化特性、体外释放特点并具备良好的抗肿瘤疗效。

白花蛇舌草诱导HSP70表达对H22肝癌细胞移植瘤T淋巴细胞的影响

目的观察白花蛇舌草对H22肝癌细胞移植瘤鼠瘤体T淋巴细胞亚群的影响。方法将中药处理后的H22肝癌细胞,采用HSP70单抗封闭技术分为白花蛇舌草和党参未封闭、封闭及RPMI-1640空白对照共5组;观察各组CD4+、CD8+T淋巴细胞表达情况。结果与空白对照组比较,白花蛇舌草未封闭组CD8+、封闭组CD4+表达明显上调;党参封闭组CD4+表达也明显上调;与白花蛇舌草封闭组比较,白花蛇舌草未封闭组CD8+T淋巴细胞表达明显上调。结论白花蛇舌草诱导恶性肿瘤瘤体HSP70的高表达,增强机体对肿瘤的免疫作用,其机理可能与提高瘤体CD4+、CD8+CTL表达有关。

反应停对小鼠肝癌细胞H22移植瘤生长的影响

背景与目的:反应停因具有抗血管生成作用而可能对某些肿瘤有治疗作用。本研究旨在通过观察反应停对小鼠H22移植瘤生长的影响,探讨反应停的作用机制。方法:BALB/c小鼠皮下接种H22细胞,分别从接种当天(第一给药组)和第4天(第二给药组)开始每天腹腔注射反应停50mg/kg,每天测肿瘤直径,第12天处死动物,称瘤重。对移植瘤组织,用抗CD31单抗做免疫组化染色,测定微血管密度;流式细胞术分析CD31表达以及凋亡率;逆转录聚合酶链反应(reversetranscription-ploymerasechainreaction,RT-PCR)检测血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)mRNA的表达。结果:第一给药组的瘤重为(2.27±0.33)g,小于对照组的(2.70±0.61)g,但差异没有统计学意义(P>0.05),抑瘤率为15.93%;第二给药组的瘤重为(3.32±0.47)g,小于对照组的(3.42±0.60)g,差异也无统计学意义(P>0.05),抑瘤率为2.92%。第一给药组移植瘤组织中微血管计数和CD31表达分别为(48.4±12.90)和(5.59±0.75),与对照组(81.2±26.91)和(7.04±0.50)比较均显著降低(P<0.05);第二给药组微血管计数和CD31表达分别为(46.4±9.71)和(7.29±0.48),与对照组的(74.0±32.69)和(6.80±0.68)相比,差异无统计学意义(P>0.05)。两给药组移植瘤组织细胞凋亡指数分别为(17.

软骨多糖抑制H22肝癌细胞生长的作用及机制研究

探讨软骨多糖(CA)在体内抑制H22肝癌细胞生长的作用及其机制。以H22细胞腹水瘤模型为研究对象,设对照组﹑CA组两组,分别考察CA对各组小鼠的生活状态的影响。并且应用苏木素伊红(HE)染色、原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL)、流式细胞术(FCM)及免疫荧光法对肿瘤细胞的生长和凋亡进行研究。CA可以在一定程度上促进H22细胞的凋亡,抑制肿瘤细胞的生长,延长小鼠的生存时间。并且,随着用药时间的延长,CA组的P21表达增强,而CyclinD1表达水平降低。软骨多糖有促进肿瘤细胞凋亡的作用,是一种新型的抗癌药物,具有广泛的应用前景。

川牛膝多糖对小鼠肝癌细胞H_(22)抑制作用研究

观察川牛膝多糖对小鼠肝癌细胞H2 2 抑制作用。结果表明 :川牛膝多糖ig ,对小鼠肝癌细胞H2 2 (腹水型 )有一定的抑制作用趋势。