西松烷型二萜对小鼠H22肝癌腹水瘤的抑制作用及其机制

目的研究西松烷型二萜对小鼠H22肝癌腹水瘤抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法建立昆明小鼠H22肝癌腹水瘤模型,随机分为生理盐水组（Ⅰ组）、西松烷型二萜低剂量组（Ⅱ组）、中剂量组（Ⅲ组）、高剂量组（Ⅳ组）与环磷酰胺组（Ⅴ组）。建模后24 h开始给药,Ⅱ~Ⅳ组以不同剂量的西松烷型二萜连续灌胃给药7 d,对照组给予同体积生理盐水,Ⅴ组连续腹腔注射环磷酰胺7 d,末次给药24 h后处死半数动物。计算平均腹水量、腹水抑制率、腹水中瘤细胞数、瘤细胞存活率、细胞因子白细胞介素2（IL-2）、干扰素γ（IFN-γ）浓度。另一半小鼠继续观察生存状况,计算生存期及生存延长率。结果Ⅲ、Ⅳ组腹水量与Ⅰ组比较明显减少（F=28.37,q=2.91、4.76,P〈0.05）,腹水抑制率随药物剂量增加而升高。Ⅱ~Ⅳ组瘤细胞计数及瘤细胞存活率与Ⅰ组比较显著降低（F=7.21-19.13,q=2.92~4.76,P〈0.05）。Ⅱ~Ⅳ组小鼠平均生存期与Ⅰ组比较显著延长（F=35.77,q=2.91~4.75,P〈0.05）,延长率分别为20.21%、42.10%和51.02%。与Ⅴ组比较,Ⅱ、Ⅲ组小鼠在饮食、活动等方面状态较好。Ⅳ组用药期间食欲下降,活动少,停药后好转。Ⅱ~Ⅳ组IL-2和IFN-γ含量与Ⅰ组比较,差异均有显著性（F=21.17、35.47,q=2.93~4.77,P〈0.05）。结论西松烷型二萜对H22肝癌腹水瘤的生长具有明显的抑制作用,其机制可能与影响细胞免疫功能有关,其有可能开发成为一种新的海洋源性抗肿瘤药物。

小鼠肝癌H_(22)克隆细胞株H2D8与其原瘤株武汉H_(22)的基本特性比较研究

用细胞克隆的方法获得武汉大学典型培养物保藏中心保存的小鼠肝癌H2 2 瘤株 (武汉H2 2 )的克隆细胞株H2D8。比较武汉H2 2 及H2D8对血清的依赖性、致瘤性、病理特征和对环磷酰胺 (CTX)的敏感性。结果发现H2D8细胞株对血清的依赖性 ,和对小鼠致瘤性及肿瘤病理学特性与武汉H2 2 细胞无明显差异 ;H2D8细胞对CTX治疗的敏感性更高。说明H2D8克隆株在体外培养、致瘤性和病理特征方面能保持原瘤株的细胞特性 ;

壳寡糖和双歧杆菌对腹水型肝癌细胞H22的抑制作用

采用过氧化氢氧化法制备水溶性壳寡糖,采用Q TRAP LC/MS/MS System测定壳寡糖的平均分子量,观察壳寡糖和双歧杆菌对腹水型肝癌细胞H22的抑制作用.使用JEM1200EX透射电子显微镜观察不同浓度壳寡糖和双歧杆菌对H22细胞作用后H22细胞学的变化,结果表明,平均分子量为609的壳寡糖及双歧杆菌单独对腹水型肝癌细胞H22抗(抑)制作用均显著;壳寡糖(浓度为1.5%)与双歧杆菌(109CFU/mL)具有协同增效抗肿瘤作用.

小鼠肝、再生肝、H22_a腹水型肝癌细胞及荷癌鼠肝中脂质过氧化物水平与SOD及GSH-P_x酶活力

测定了再生鼠肝、H22_a 腹水型肝癌细胞及荷癌鼠肝中脂质过氧化物水平、SOD 及 GSH-Px 的活力,与正常鼠肝相比,再生鼠肝和荷癌鼠肝的脂质过氧化物水平增高,GSH-Px 活力降低,荷瘤鼠肝的 SOD 活力也高于正常鼠肝,去甲斑蝥素和斑蝥酸钠能使荷瘤鼠肝的 GSH-Px 活力上升,脂质过氧化物水平下降。

三肽化合物酪丝亮肽(YSL)对腹水型肝癌H_(22)小鼠免疫调节作用实验研究

目的观察三肽化合物酪丝亮肽(tyroserleutide,YSL)对腹水型肝癌H22小鼠的抗肿瘤作用,观察YSL对荷瘤小鼠T淋巴细胞转化及NK细胞杀伤活性的影响。方法建立腹水型肝癌H22小鼠动物模型,观察YSL对腹水型肝癌H22小鼠生存时间的影响;以MTT法检测YSL对荷瘤小鼠T淋巴细胞转化及NK细胞杀伤活性的影响。结果YSL能够明显延长腹水型肝癌H22小鼠生存时间;YSL在5μg.kg-1和50μg.kg-1时可以促进腹水型肝癌H22小鼠T淋巴细胞的转化;YSL在0.5、5和50μg.kg-1时增强荷瘤小鼠NK细胞杀伤活性。结论YSL可以延长腹水型肝癌H22小鼠的生存时间;促进荷瘤鼠的T淋巴细胞转化及NK细胞杀伤活性。

蝎毒抗癌多肽对H_(22)细胞株体内、体外的抑瘤作用

目的 观察蝎毒抗癌多肽 (APBMV )对小鼠肝癌 (H2 2 )实体瘤及瘤细胞的抑制作用。方法 应用MTT法检测APB MV对H2 2 瘤细胞的毒性作用 ;通过小鼠H2 2 实体瘤模型 ,观察APBMV对肿瘤生长的抑制作用及对小鼠外周血白细胞 (WBC )数和脾脏指数 (SI)的影响。结果 APBMV对H2 2 细胞具有一定的毒性作用 ,但剂量效应关系不明显 (P >0 .0 5 )。APBMV能明显抑制小鼠H2 2 肿瘤的生长 ,抑瘤率最高可达 40 .3 0 % (P <0 .0 1) ,带瘤小鼠外周血WBC和SI无明显变化或略高于对照组 ,而阳性对照 5 Fu组小鼠WBC和SI均明显下降 (P <0 .0 1)。结论 APBMV是东亚钳蝎蝎毒中的 1种低毒有效的抗肿瘤成分 。

十枣汤对腹水型荷瘤小鼠血管内皮生长因子的影响

[目的]观察十枣汤对腹水型荷瘤小鼠血管内皮生长因子(VEGF)的影响。[方法]使用随机平行对照方法,将6～7周龄健康昆明种小鼠90只随机分为正常对照组、荷瘤模型组、5-FU组、十枣汤大、中、小剂量组,每组15只。正常对照组不予处理,其余小鼠局部消毒后,腹腔内注射腹水型H22肝癌瘤细胞株0.2mL/只。次日起5-FU对照组腹腔内注射5-FU 25mL/kg,隔日1次,共5次。十枣汤组小鼠按27g/kg、81g/kg、160g/kg不同剂量等体积十枣汤灌胃,0.4mL/次,1次/d,连续10天。荷瘤模型空白对照组等容积生理盐水灌胃。各组末次给药24h后(腹腔传代第7日),称体重,脱颈椎处死,眼眶取血,抽吸乳白色浓稠腹水。检测血清VEGF、腹水VEGF。[结果]血清VEGF模型组、5-FU组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组较正常对照组血清VEGF均有不同程度增高(P<0.01);与模型组相比,均有显著性差异(P<0.05);与5-FU组相比,中药组均无显著性差异(P>0.05);其中中药低剂量组与中药高剂量组相比有显著性差异(P<0.05)。腹水VEGF 5-FU组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组较模型组腹水VEGF均有不同程度降低(P<0.05);与5-FU组相比,各中药低剂量组有显著性差异;中药中、高剂量无显著性差异(P>0.05);中药低剂量与中药中、高剂量均有显著性差异(P<0.05);中药中剂量与中药高剂量相比较无显著性差异(P>0.05)。[结论]十枣汤对腹水型荷瘤小鼠血清VEGF、腹水VEGF有与5-FU类似的抑制作用,并与剂量呈量效关系,这可能是十枣汤治疗恶性腹水,延长生存期、改善生存质量的作用机制。

博落回总碱对肝癌细胞的毒性作用和体内抗肿瘤作用

目的观察博落回总碱(TAPP)的体内外抗肿瘤活性作用。方法MTT法检测TAPP体外对人肝癌Hep3B细胞、小鼠H22肝癌细胞的抑瘤作用;用小鼠移植性肿瘤法检测TAPP对小鼠H22肝癌细胞、S180肿瘤细胞的体内抑瘤作用。测3次重复实验结果。结果(1)TAPP在体外有明显的细胞毒性作用,可抑制Hep3B、H22细胞增殖,且呈剂量依赖性:其对Hep3B细胞的半数抑制浓度(IC50) 3次重复实验结果分别为3.04、3.98、2.98 μg/ml,对H22细胞则分别为2.89、2.21、2.34 μg/ml。(2)体内实验表明,TAPP可抑制H22细胞皮下移植瘤的生长,在剂量为每天1、2、4 mg/kg·b.w.时,3次腹腔注射给药实验测得抑瘤率分别为18.6%、35.1%、44.9%,而以每天4 mg/kg·b.w.时口服给药抑瘤率则为7.9%;另外,TAPP可明显延长S180腹水瘤小鼠存活时间,剂量为每天1、2、4 mg/kg·b.w. 时静脉注射给药生命延长率3次重复结果平均分别为24.8%、48.9%、52.7%。结论TAPP在体内外均有明显的抗肿瘤活性。

青藤碱对α7nAChR参与的巨噬细胞M2极化和小鼠肝癌TAM极化的干预作用

目的 观察青藤碱对巨噬细胞M2极化及小鼠肝癌腹水瘤模型腹腔肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophage,TAM)的影响。方法 细胞实验以白细胞介素(IL)-4(10 ng·mL^(-1))单独或与IL-6联合(即IL-4+IL-6,浓度均为10 ng·mL^(-1))刺激小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7诱导M2极化,青藤碱(400μmol·L^(-1))干预后,ELISA法检测IL-10分泌量;荧光定量PCR法检测精氨酸酶1(Arg-1)、Fizz1和Ym1的mRNA表达水平;免疫印迹法检测α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)表达。动物实验分为正常组、模型组、青藤碱(40 mg·kg^(-1))组,采用小鼠肝癌细胞H22腹腔注射诱导小鼠腹水瘤模型,灌胃给药4 d,分离各组小鼠腹腔巨噬细胞,流式检测CD86、CD206和α7nAChR表达。结果 IL-4或IL-4+IL-6联合诱导后,M2极化指标Arg-1、Fizz1和Ym1的mRNA相对表达量及IL-10分泌量升高(P<0.05);IL-4+IL-6组明显高于IL-4单独组(P<0.05),且α7nAChR表达升高(P<0.05);青藤碱可下调M2表型,也可下调α7nAChR表达(均P<0.05)。肝癌腹水瘤小鼠腹腔肿瘤相关巨噬细胞与正常小鼠腹腔巨噬细胞比较,其CD86表达下降(P<0.05),CD206、α7nAChR表达上调(P<0.05);青藤碱干预后,CD86表达上调(P<0.05),CD206、α7nAChR表达下降(P<0.05)。结论 α7nAChR表达与M2极化和肿瘤相关巨噬细胞极化正相关,青藤碱能下调α7nAChR表达,抑制M2极化、促进肝癌腹水瘤中肿瘤相关巨噬细胞向M1极化。

小鼠腹水型肝癌血清一氧化氮水平及肠壁组织超微结构观察

应用铜－镉还原微盘测定法、硝酸镧示踪法及电镜技术初步观察研究小鼠Ｈ２２腹水型肝癌接种后不同时期血清ＮＯ水平的变化及肿瘤细胞在腹腔内大量增殖、生长对宿主肠壁组织细胞通透性及超微结构的影响。实验结果显示，与对照组相比，接种早期（３天），血清ＮＯ水平明显上升，以后逐渐下降，晚期时（第１０，１３天）明显低于对照组。早期时即可见镧颗粒进入细胞内，进入中期后，肠壁组织超微结构发生明显损伤，并可见细胞坏死。提示早期血清ＮＯ水平的增高可能为外源性肿瘤细胞刺激机体免疫系统所至，而晚期ＮＯ水平下降则可能与机体代谢功能紊乱，免疫功能下降有关。膜通透性的改变早于超微结构的改变。

IL-2基因修饰鼠肝癌细胞体内外生长特性的研究

用重组人白细胞介素-2(IL-2)含信号肽cDNA的缺陷型逆转录病毒。将人IL-2基因转导入小鼠H22肝癌细胞株。经PCR和RT—PCR检测证实了转导后的细胞DNA内确有NeoR和IL-2基因的存在和表达。用光镜和电镜观察了经IL-2基因转导的H22细胞体外形态，以MTT法检测细胞体外增殖能力和皮下接种后观察肿瘤生长能力的结果表明，经IL-2基因转导的鼠肝癌细胞体外增殖能力没有明显的变化，但体内致瘤性却显著下降，丝裂霉素处理后作为瘤苗接种能抑制其后野生型H22细胞的再次攻击。本研究为制备新型瘤苗打下了基础。

6-F硫色烯并[4,3-c]吡唑啉的体内抗肿瘤活性

用小鼠移植性肿瘤法对6-F硫色烯并[4,3-c]吡唑啉(Ja)进行体内抗肿瘤活性研究.通过检测其对小鼠H22肝癌细胞、S180肿瘤细胞的体内抑瘤作用,计算肿瘤抑制率和生命延长率,并与阳性药顺铂做比较.结果表明,该化合物可抑制H22肝癌细胞皮下移植瘤的生长,在剂量为1,2,4 mg/(kg.d)时,腹腔注射给药抑瘤率分别为13.93%,37.49%,47.45%;而以剂量为5,10,20 mg/(kg.d)灌胃给药时,抑瘤率分别为31.53%,43.77%,50.73%;另外,该化合物可明显延长S180腹水瘤小鼠存活时间,以剂量为5,10,20 mg/(kg.d)灌胃给药时实验测得生命延长率分别为30.4%,64.7%,88.2%.该化合物有较强的体内抗肿瘤活性,对其抗癌作用机制值得进行深入研究.

北方鹅血对小鼠移植瘤抑瘤作用的初步实验研究

目的 研究鹅血对小鼠移植瘤抑瘤作用。方法 通过鹅血对昆明纯系小鼠移植瘤S180、H_(22)抑瘤作用,计算抑瘤率及鹅血对移植小鼠体重的影响。结果 不同剂量的鹅血对H_(22)、S_(180)移植瘤前后小鼠体重与对照组相比无差异(P>0.05)。抑瘤作用显著(P<0.05、P<0.02、P<0.01)。S_(180)抑瘤率分别为51.59％、46.69％、45.05％、37.54％。H_(22)抑瘤率分别为:63.18％、62.63％、41.2％、40.86％、33.56％。结论 初步实验证明生鹅血对S_(180)、H_(22)移植瘤抑瘤作用显著,无毒性反应。

收涩类中药对小鼠肝癌血道及淋巴道转移的影响

目的观察收涩类中药对小鼠H22腹水型肝癌细胞血道和淋巴道转移的影响。方法血道转移实验,取昆明种小鼠50只,随机分为5组,每组各10只,即阴性对照组、参一胶囊组(120 mg·kg^(-1)·d^(-1))、椿皮组(62.5g·kg^(-1)·d^(-1))、乌梅组(250 g·kg^(-1)·d^(-1))和山莱萸组(75 g·kg^(-1)·d^(-1))。,将小鼠尾静脉接种H22肝癌细胞悬液,自造模之日起,连续灌胃给药14 d后,脱颈椎处死小鼠,观察小鼠的肺部转移瘤生长情况及血液流变学指标的变化;淋巴道转移实验分组与给药同血道转移实验,采用腹水型肝癌H22瘤株,在小鼠右下肢爪垫内侧皮下注射接种,连续给药21 d后,脱颈椎处死小鼠,观察小鼠实体瘤的瘤重量、抑瘤率、肺部转移率、淋巴结转移等相关指标的变化情况。结果血道转移实验中,椿皮组和山茱萸组的肺部转移结节数较模型组明显减少,椿皮组能明显改善血液流变学指标;淋巴道转移实验中,乌梅组和山茱萸组的肺部转移结节较模型组明显减少,抑瘤率明显增加;三味收涩药的淋巴结转移显著减少。结论收涩类中药对H22腹水型肝癌细胞血道及淋巴道两种转移途径均有一定的抑制作用。

收涩中药对小鼠肝癌淋巴道转移的影响

目的:观察收涩中药对小鼠肝癌淋巴道转移的影响。方法:以腹水型肝癌H22瘤株在小鼠右下肢爪垫内侧皮下注射接种,复制淋巴道转移模型,观察小鼠实体瘤的瘤重量抑瘤率、肺部转移率、淋巴结转移情况等的指标变化。结果:乌梅组和山茱萸组的肺部转移结节较模型组明显减少,抑瘤率明显增加;三味收涩药的淋巴结转移显著减少。结论:收涩中药对H22肿瘤淋巴道转移有一定的抑制作用。

^(32)P-磷酸铬胶体局部给药在肝癌淋巴道转移小鼠的体内分布

目的 研究3 2 P 磷酸铬胶体 (3 2 P 胶体 )局部给药在腹水型肝癌淋巴道转移小鼠的体内分布。方法 在 3 0只KM小鼠爪垫下注射H2 2腹水型肝癌细胞 ,建立淋巴道转移模型 ,动态观察3 2 P 胶体瘤体内注射后在小鼠局部、区域淋巴结和全身各器官组织内的分布情况 ,以及3 2 P 胶体在局部淋巴结内的活度与给药剂量的关系。结果 在分期处死的小鼠中观察到 ,3 2 P 胶体主要聚集在注射局部和区域淋巴结内 ,肝、脾、肺等分布活度较低。区域淋巴结聚集的活度随给药剂量的增加而增高。结论 3 2 P 胶体局部注射后可经淋巴道转运 ,并聚集在区域淋巴结 。

H_(22)肝癌细胞对小鼠肠壁侵袭作用的超微结构观察

应用ＴＥＭ和ＳＥＭ观察１×１０＾７Ｈ２２腹水型肝癌细胞攻击后，不同时期小鼠小肠细胞超微结构的变化，取肿瘤细胞攻击后第２天，第５天和第１０天的肠组织作为肿瘤浆膜侵袭作用的早期，中期和晚期样品，在侵袭早期，小肠壁间皮细胞和平滑肌细胞无明显病理性改变，Ｈ２２瘤细胞多为圆形，游离或隐藏于系膜根部及脂肪组织凹陷处，中期可见许多肿瘤细胞粘附于肠壁表面，伸出球状或泡状伪足，间皮细胞微绒毛减少。