小柴胡汤联合环磷酰胺对腹水瘤细胞株肝癌小鼠肿瘤间质血管生成影响随机平行对照研究

[目的]观察小柴胡汤联合环磷酰胺对腹水瘤细胞株(EAC)肝癌小鼠体重、肿瘤间质血管生成影响。[方法]使用随机平行对照方法,将40只昆明小鼠,采用完全随机化分组方法分为模型组、中药组、西药组、联合组,每组10只。各组皮下注射浓度为2.0×106/ml的EAC肝癌小鼠细胞株0.2ml/只造模,分别给予小柴胡汤、环磷酰胺、小柴胡汤+环磷酰胺灌胃。免疫组化法检测血管内皮生长因子(VEGF)表达、光镜下观察形态学改变,透射电镜观察肿瘤组织血管生成。[结果]中药组、西药组、联合组VEGF阳性表达,瘤组织内的VEGF蛋白表达阳性率和平均染色强度均低于模型组(P<0.01),联合组最明显。光镜下显示:中药组、西药组、联合组肿瘤间质毛细血管数量均减少,联合组最为明显,中药组次之。电镜下显示:中药组、联合组都可以破坏肿瘤组织内新生毛细血管结构,联合组破坏最严重。[结论]小柴胡汤联合环磷酰胺可降低EAC肝癌小鼠瘤组织中VEGF蛋白表达;、抑制肿瘤间质血管生长。

33.3GHz毫米波对H_(22)小鼠肝癌细胞株和动物模型的影响

目的：通过对Ｈ_(２２)小鼠肝癌细胞株体外培养和肿瘤动物的研究，探讨３３．３ＧＨｚ毫米波对Ｈ_(２２)小鼠肝癌细胞株的杀 伤作用和免疫调节作用。方法：（１）体外培养Ｈ_(２２)小鼠肝癌细胞株，分别予毫米波照射和／或化疗药物（丝裂霉素，氟脲 嘧啶）共五天，记数活细胞数；（２）选取ＢＡＬＢ／Ｃ雌性小鼠１５只，随机分为５组，第一、二、五组小鼠皮下埋植Ｈ_(２２)小鼠肝 癌细胞２０天后，第一组为直接照射肿瘤埋植处，照射３０分钟；第二组为假照射；第五组照射小鼠肝俞、章门穴１小时， 每３天１次，共５次；第三、四组小鼠为空白对照组，实验结束时进行光镜和电镜检查，同时检测脾淋巴细胞转化实验及 Ｔ细胞亚群检查。结果：（１）经毫米波照射及化疗处理后，体外培养的肿瘤细胞数量明显减少，毫米波和／或与化疗药 物联合应用后可进一步杀伤肿瘤细胞。（２）毫米波直接照射后ＣＤ_(３)、ＣＤ_(４)增高，脾淋巴细胞对有丝分裂原增殖反应增 高。结论：毫米波和／或化疗药物联合应用对杀伤肿瘤细胞起增敏作用和提高荷瘤小鼠免疫功能。

干扰素α-2b对H_(22)鼠肝癌细胞株体内外抑制作用的研究

目的研究干扰素α-2b对H22鼠肝癌细胞株体内外的抑制作用。方法MTT法测定不同浓度干扰素α-2b对H22鼠肝癌细胞的作用。建立小鼠皮下实体瘤模型,腹腔内分别注射生理盐水、干扰素α-2b、氟尿嘧啶(5-FU)、干扰素α-2b+5-FU,隔天1次,共给药10次,停药1周后处死动物,测量瘤体大小、瘤重,计算抑瘤率,测定微血管密度(MVD)。结果干扰素α-2b对体外培养的H22鼠肝癌细胞无直接抑制作用,但明显抑制实体瘤生长;干扰素α-2b、5-FU、干扰素α-2b+5-FU抑瘤率分别为49.5%、67.4%、74.9%,MVD分别为67±43、134±53、6.3±46。结论干扰素α-2b具有抗血管生成作用,与化疗药物5-FU联用有协同作用。

金雀异黄素对不同淋巴转移能力的小鼠肝癌细胞株的抑制作用

MTT法检测大豆提取物金雀异黄素(genistein,Gen)对不同淋巴转移能力的腹水型小鼠肝癌细胞株HepA-H和HepA-L的生长抑制作用。应用电镜观察细胞形态和流式细胞术检测细胞凋亡。将HepA-H和HepA-L接种NIH小鼠,制备荷瘤动物模型,Gen腹腔给药后第14天取淋巴结观察,并计算转移率。TUNEL法检测淋巴结凋亡细胞,并计算凋亡指数。实验发现:(1)Gen对两株细胞均具有良好的生长抑制作用,且对HepA-H的抑制优于HepA-L;(2)Gen在体外诱导两株细胞发生凋亡,且HepA-H的凋亡率高于HepA-L,并呈量效关系;(3)Gen抑制荷瘤动物肿瘤生长和肿瘤淋巴转移,且对HepA-H的抑制强于HepA-L,实验组H的凋亡指数(3.87%)也显著高于实验组L(1.69%)。故研究认为Gen显著抑制HepA-H和HepA-L肝癌细胞淋巴转移的作用机制,可能与诱导细胞凋亡有关,对高淋巴转移细胞的抑制作用强于低淋巴转移细胞,提示Gen抗肿瘤作用具有一定的选择性。

不同浓度H22肝癌细胞株对C57BL/6J小鼠原位肝癌造模差异的影响

目的:使用H22肝癌细胞株建立C57BL/6J小鼠原位肝癌模型,比较不同浓度H22肝癌细胞悬液对C57BL/6J小鼠原位肝癌造模成瘤率、肿瘤病理学特征及其体重变化情况的影响。方法:将66只C57BL/6J小鼠随机分为4个组,分别对应1×10~6、1×10~8、1×10^(10)、1×10^(12)4个细胞浓度。在无菌条件下,将不同浓度的H22肝癌细胞悬液注入60只C57BL/6J小鼠的肝左叶。从注射之日起,连续21 d测量小鼠体重,于第21 d时脱颈椎处死,测肝脏的重量,并行肝脏外观及病理组织学观察。结果:1×10~6、1×10^(10)、1×10^(12)组成瘤率40%(6/15),1×10~8组为27%(4/15)。病理检查证实为肝细胞性肝癌。结论:不同浓度H22肝癌细胞株对成瘤影响差异不明显,造模中可根据实际情况自行选择。

博落回总碱对肝癌细胞的毒性作用和体内抗肿瘤作用

目的观察博落回总碱(TAPP)的体内外抗肿瘤活性作用。方法MTT法检测TAPP体外对人肝癌Hep3B细胞、小鼠H22肝癌细胞的抑瘤作用;用小鼠移植性肿瘤法检测TAPP对小鼠H22肝癌细胞、S180肿瘤细胞的体内抑瘤作用。测3次重复实验结果。结果(1)TAPP在体外有明显的细胞毒性作用,可抑制Hep3B、H22细胞增殖,且呈剂量依赖性:其对Hep3B细胞的半数抑制浓度(IC50) 3次重复实验结果分别为3.04、3.98、2.98 μg/ml,对H22细胞则分别为2.89、2.21、2.34 μg/ml。(2)体内实验表明,TAPP可抑制H22细胞皮下移植瘤的生长,在剂量为每天1、2、4 mg/kg·b.w.时,3次腹腔注射给药实验测得抑瘤率分别为18.6%、35.1%、44.9%,而以每天4 mg/kg·b.w.时口服给药抑瘤率则为7.9%;另外,TAPP可明显延长S180腹水瘤小鼠存活时间,剂量为每天1、2、4 mg/kg·b.w. 时静脉注射给药生命延长率3次重复结果平均分别为24.8%、48.9%、52.7%。结论TAPP在体内外均有明显的抗肿瘤活性。

十枣汤对腹水型荷瘤小鼠血管内皮生长因子的影响

[目的]观察十枣汤对腹水型荷瘤小鼠血管内皮生长因子(VEGF)的影响。[方法]使用随机平行对照方法,将6～7周龄健康昆明种小鼠90只随机分为正常对照组、荷瘤模型组、5-FU组、十枣汤大、中、小剂量组,每组15只。正常对照组不予处理,其余小鼠局部消毒后,腹腔内注射腹水型H22肝癌瘤细胞株0.2mL/只。次日起5-FU对照组腹腔内注射5-FU 25mL/kg,隔日1次,共5次。十枣汤组小鼠按27g/kg、81g/kg、160g/kg不同剂量等体积十枣汤灌胃,0.4mL/次,1次/d,连续10天。荷瘤模型空白对照组等容积生理盐水灌胃。各组末次给药24h后(腹腔传代第7日),称体重,脱颈椎处死,眼眶取血,抽吸乳白色浓稠腹水。检测血清VEGF、腹水VEGF。[结果]血清VEGF模型组、5-FU组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组较正常对照组血清VEGF均有不同程度增高(P<0.01);与模型组相比,均有显著性差异(P<0.05);与5-FU组相比,中药组均无显著性差异(P>0.05);其中中药低剂量组与中药高剂量组相比有显著性差异(P<0.05)。腹水VEGF 5-FU组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组较模型组腹水VEGF均有不同程度降低(P<0.05);与5-FU组相比,各中药低剂量组有显著性差异;中药中、高剂量无显著性差异(P>0.05);中药低剂量与中药中、高剂量均有显著性差异(P<0.05);中药中剂量与中药高剂量相比较无显著性差异(P>0.05)。[结论]十枣汤对腹水型荷瘤小鼠血清VEGF、腹水VEGF有与5-FU类似的抑制作用,并与剂量呈量效关系,这可能是十枣汤治疗恶性腹水,延长生存期、改善生存质量的作用机制。

蒜珠对小鼠移植性肝癌的疗效研究

目的 探讨蒜珠对小鼠移植性肝癌Hsc 2治疗效果及对小鼠免疫功能的影响。方法 昆明小鼠接种肝癌Hsc 2细胞株 ,口服蒜珠匀浆 10d后 ,处死动物 ,剥离瘤块 ,称取瘤重 ;分离脾、胸腺并称重。ConA诱导小鼠T淋巴细胞增殖反应的影响。结果 与对照组相比 ,蒜珠匀浆剂量在 0 .6ml/ 2 0g体重和 0 .4ml/ 2 0g体重口服给药情况下 ,瘤灶稳定或缩小 ,肿瘤抑制率分别为 4 6 .34%、30 .4 9% ;ConA的OD值与生理盐水组相比均有显著性差异。结论 蒜珠抗肿瘤作用明显 。

高淋巴系统转移能力小鼠肝癌细胞株差异表达基因的筛选

目的 筛选高淋巴系统转移能力小鼠肝癌细胞株差异性表达基因。方法 应用抑制性消减杂交 (SSH)技术 ,构建高淋巴系统转移能力小鼠肝癌细胞株Hca F及其同源低转移细胞系Hca P的cDNA消减杂交文库 ,筛选阳性克隆进行测序 ,并在GenBank数据库中进行同源性比较。结果 成功克隆 10个差异基因片段 ,其中 2个为新基因。结论 SSH技术是克隆差异表达基因及发现新基因的有效方法。

肝癌切除术后转移过程中炎性递质的作用

目的:探讨炎性细胞因子在肝癌术后复发过程中的影响. 方法:615小鼠脾包膜下接种肝癌H22腹水瘤细胞,同时进行2/3肝切除(PH)或假手术(Sham),术后不同时间采集肝脏标本提取mRNA,测定肝组织中TNF-α,IL-1β,IL-6 和VCAM-1的表达水平.为观测肝内肿瘤转移程度,动物被饲养11 d,断颈处死,计数肝脏表面瘤结节数量. 结果:PH组与假手术组比较,接受肝切除的动物肝内转移瘤明显增多,两组间比较具有显著性差异(P=0.00 087). 肝组织内TNF-α、IL-1β、IL-6和VCAM-1 mRNA 的表达明显增高,其峰值分别在96、72、48和72 h.其中TNFαmRNA在PH后4 h迅速升高,在术后4 d内升高呈线性关系.IL-1β在术后72 h达到峰值后迅速降至正常水平.IL-6 mRNA表达的峰值时间为PH后48 h, 下降至正常水平的时间也较迅速.VCAM-1 mRNA的表达在正常组织含量甚微,几乎观测不到,但在术后升高有两个峰值,分别为4和72 h,可达到正常水平3-6倍. 结论:炎性细胞因子,尤其是TNF-α的表达与转移瘤有明显的正相关,可能对肿瘤转移有一定的增强效果.

T淋巴细胞免疫功能重建对小鼠肝癌转移的影响

目的研究T淋巴细胞免疫功能重建对小鼠肝癌转移程度的影响,进一步探讨免疫对肝癌转移的影响因素,寻找肝癌转移的免疫干预手段。方法建立T淋巴细胞免疫功能重建的模型。将裸鼠分成高、低转移的T淋巴细胞免疫功能重建组和未重建组。取淋巴结通过病理切片观察转移程度。计算成瘤时间和生长速度的差异,检测肿瘤细胞株组织相容性复合物(MHC)Ⅰ、Ⅱ表达。应用Th1—Th2-Th3基因芯片检测不同转移潜能小鼠体内T淋巴细胞相关基因的差异。结果进行T淋巴细胞免疫功能重建后裸鼠外周血CD 3、CD4、CD 8和CD4/CD 8比例均高于未重建组;高、低转移潜能的肝癌细胞在裸鼠体内平均成瘤时间为(7.7±0.6)d,正常Balb/c小鼠为(11.5±1.3)d。高、低转移潜能肝癌细胞的肿瘤生长速度具有明显的差异。免疫重建后的裸鼠肿瘤淋巴结远处转移显著降低(P<0.0 5)。高转移组肿瘤细胞的M H C Ⅰ表达明显低于低转移组(P<0.0 5)。高转移组T淋巴细胞Th1/Th2相关基因的表达低于低转移组。结论免疫功能重建可以在一定程度上影响小鼠肝癌的转移。肿瘤M H C分子表达的改变和机体淋巴细胞T h 1/T h 2 相关基因的表达降低可能是影响肝癌转移潜能的原因。

水飞蓟宾对荷人肝癌BALB／c鼠NK细胞的免疫活性的调节作用

水飞蓟宾是菊类植物水飞蓟的提取物。近来，体外研究发现水飞蓟宾可以直接抑制肝癌细胞株生长。我们观察水飞蓟宾对荷人肝癌BALB／c鼠自然杀伤细胞（natural killer cell，

肝再生增强因子在肝癌细胞中的表达及意义

目的 研究肝再生增强因子(ALR)对肝癌细胞和原代大鼠肝细胞增殖作用的影响及在肝细胞癌(HCC)中的表达。 方法 将不同种属的ALR分别与原代大鼠肝细胞和人肝癌细胞株QGY和HepG2共同培养后,用3H-胸腺嘧啶核苷掺入法测定这些细胞的增殖情况。并应用免疫组织化学法对9例正常肝组织和21例HCC组织中ALR的表达进行了研究。 结果 不同种属的ALR在体外均能刺激人肝癌细胞株QGY和H epG2增殖,并呈剂量依赖关系,但对原代大鼠肝细胞均无刺激增殖作用。在正常肝组织中ALR不表达,但在HCC肝组织中ALR均表达,且ALR的表达程度与HCC分化程度和大小均无关。 结论 ALR可能在HCC的发生发展中起着重要作用。

6-F硫色烯并[4,3-c]吡唑啉的体内抗肿瘤活性

用小鼠移植性肿瘤法对6-F硫色烯并[4,3-c]吡唑啉(Ja)进行体内抗肿瘤活性研究.通过检测其对小鼠H22肝癌细胞、S180肿瘤细胞的体内抑瘤作用,计算肿瘤抑制率和生命延长率,并与阳性药顺铂做比较.结果表明,该化合物可抑制H22肝癌细胞皮下移植瘤的生长,在剂量为1,2,4 mg/(kg.d)时,腹腔注射给药抑瘤率分别为13.93%,37.49%,47.45%;而以剂量为5,10,20 mg/(kg.d)灌胃给药时,抑瘤率分别为31.53%,43.77%,50.73%;另外,该化合物可明显延长S180腹水瘤小鼠存活时间,以剂量为5,10,20 mg/(kg.d)灌胃给药时实验测得生命延长率分别为30.4%,64.7%,88.2%.该化合物有较强的体内抗肿瘤活性,对其抗癌作用机制值得进行深入研究.

平调饮抗肿瘤作用的实验研究

背景与目的:建立H22肝癌腹水瘤荷瘤小鼠模型,通过给予模型鼠平调饮灌胃评价其抗肿瘤作用。材料与方法:用H22腹水肝癌株种植于小鼠右腋皮下,致移植性肿瘤,建立H22肝癌腹水瘤荷瘤小鼠模型。将模型鼠分成阴性对照组,平调饮组,平调饮+5-Fu组和5-Fu组,共4组,各组模型鼠分别灌胃生理盐水、平调饮、平调饮+5-Fu和5-Fu,连续灌胃10d后,观察瘤体大小、胸腺指数、脾脏指数、抑瘤率、生命延长率和VEGF在肿瘤及肿瘤周围组织中的表达。结果:平调饮组肿瘤平均瘤体、VEGF值减小,胸腺指数、脾脏指数、抑瘤率(48.6%)及生命延长率(168.3%)增高。结论:平调饮可提高胸腺指数,降低5-Fu对免疫功能的毒性作用,显著延长荷瘤小鼠的生存期。平调饮可能通过促进肿瘤细胞分化成熟,抑制肿瘤细胞增殖,降低肿瘤组织和肿瘤周围组织中VEGF表达,而对H22腹水型小鼠肿瘤的发展起抑制作用。

腺病毒介导的人GM—CSF基因转染瘤苗体内致瘤性降低的实验研究

目的:建立以腺病毒为载体的GM—CSF基因转染瘤苗,并对其体内抗肿瘤作用加以研究。方法:应用携带有人GM—CSF基因的重组腺病毒(R—Ad_5)载体转染BALB/C小鼠肝癌细胞株(H_(22)),体外应用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测GM—CSF表达水平,以GM—CSF基因转染的H_(22)细胞进行致瘤性研究。结果:(1)重组腺病毒载体能成功地介导GM—CSF基因转染H_(22)细胞并能持续有效表达26～31天,瘤苗的辐照处理并不明显影响GM—CSF表达水平。(2)GM—CSF基因转染瘤苗体内致瘤性显著降低。结论:该结果揭示了应用GM—CSF基因转染瘤苗进行肿瘤基因治疗的可行性,为进一步研究肿瘤的GM—CSF基因治疗打下了基础。

超声/微气泡SonoVue介导体内和体外基因转导的研究

目的初步探讨超声联合微气泡超声造影剂SonoVue介导体外培养细胞和体内肌肉组织基因转导的可行性,并研究不同超声波参数和基因用量与转基因效率之间的关系。方法利用不同强度和不同剂量超声波和声学造影剂SonoVue,介导人肝癌细胞株HepG2和BALB/c小鼠右侧胫前肌内增强型绿色荧光蛋白报告质粒的转导,分别直接或组织冰冻切片后在荧光显微镜下观察,并计算转导效率。结果超声联合微气泡造影剂SonoVue可介导体外培养的HepG2细胞和小鼠胫前肌内pEGFPC1基因转导,HepG2细胞以1MHz1.5W/cm2超声波基因转导效果最好;小鼠胫前肌以1MHz3W/cm2的超声波转基因效果最好。结论超声联合微气泡造影剂SonoVue可介导体外培养细胞和体内肌肉组织基因转导,1MHz超声波是转基因的理想频率。

硫普罗宁协同化疗药抗肿瘤治疗作用的研究

目的研究硫普罗宁与顺铂(DDP)、环磷酰胺(CY)联用的协同作用。方法将48只KM小鼠随机分为6组,除正常组外,其余5组小鼠腹腔内接种腹水瘤细胞株[1]。分为:正常组;空白对照组;阳性组(DDP+CY);腹腔内分别注射生理盐水;联合用药组(硫普罗宁高、中、低组)。观察各组小鼠的腹水生成量,瘤细胞数的变化。结果DDP+CY组、硫普罗宁各剂量组与生理盐水对照组相比可以显著抑制H22腹水瘤小鼠腹水的生成,减少瘤细胞的数量;硫普罗宁联合用药组与DDP+CY组相比腹水生成量降低;硫普罗宁各剂量组全血细胞中WBC与DDP+CY组相比有上升趋势,并基本显现了量效关系;与对照组相比各给药组的血浆ALT、AST、BUN、ALP、CREA水平呈降低趋势,硫普罗宁各剂量组动物血浆ALT、AST、BUN、CREA水平明显降低。结论硫普罗宁有协同抗肿瘤作用,并可以降低化疗产生的肝、肾损伤等不良反应。