腹膜透析小鼠腹膜巨噬细胞产生一氧化氮的动态变化及其腹膜间皮的病理改变

为研究腹膜透析(腹透)液对腹膜巨噬细胞产生一氧化氮的影响及腹膜间皮的病理改变,利用模拟腹透小鼠获取腹膜巨噬细胞,采用Criess重氮化反应法测定一氧化氮量,并取膈腹膜,光镜下作形态学观察。结果:随着腹透时间的延长,腹透小鼠腹膜巨噬细胞一氧化氮产生量显著高于对照组(P<0.01);停止腹透后,腹膜巨噬细胞一氧化氮产生量逐渐下降。形态学观察可见腹膜间皮细胞脱落,腹膜增厚及炎症性改变。提示腹透液非生理性持续刺激可导致腹膜巨噬细胞一氧化氮产生量增加,一氧化氮对长期腹透所致的腹膜炎症有抑制作用。

羟乙基淀粉130／0．4容量治疗对CO2气腹患者PaCO2和腹膜巨噬细胞免疫功能的影响

腹腔镜手术气腹期间，CO2可经变薄受损的腹膜毛细血管吸收入血致高碳酸血症；还可引起腹膜内环境改变，抑制腹膜巨噬细胞对细胞因子释放，出现免疫抑制。有研究表明，

PGRN缺失型腹膜巨噬细胞对细菌脂多糖的体外炎症应答

目的观察颗粒蛋白前体(PGRN)对细菌脂多糖(LPS)诱导腹膜巨噬细胞(PM)炎症应答的影响。方法诱导提取野生型(WT)小鼠及PGRN基因敲除小鼠(KO)腹膜细胞(PEC),观察PEC数目、形态和类型;流式细胞术检测PEC的巨噬细胞表面标志物CD11b、F4/80。LPS分别处理WT或KO小鼠PM,LPS、重组PGRN或LPS加重组PGRN分别处理WT小鼠PM,培养24 h后收集细胞上清,ELISA法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素12(IL-12),Griess法检测一氧化氮(NO)。结果 PGRN缺失对小鼠PEC的数目、成分及巨噬细胞表面标志物CD11b、F4/80的表达无明显影响;与WT组相比,LPS诱导PGRN KO来源的PM分泌较高水平的TNF-α、IL-1β、IL-12及NO。外源给予重组PGRN后,LPS诱导WT组PM分泌TNF-α、IL-1β、IL-12及NO的水平降低。结论 PGRN缺失使PM对LPS的刺激产生了更强的炎症反应;外源性给予重组PGRN则可抑制LPS诱导PM释放前炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-12及炎症介质NO。

NF-κB活性对重症急性胰腺炎中腹腔巨噬细胞功能的影响

目的:探讨在大鼠重症急性胰腺炎(SAP)发病中腹腔巨噬细胞(PMA)炎症介质产生和释放的机制.方法:36只SD大鼠随机分为假手术组和SAP组.通过逆行胰管注射40g/L牛黄胆酸钠建立大鼠SAP模型.分别在3,6,12h剖杀大鼠.常规分离PMA并培养24h,通过凝胶电泳迁移分析法检测PMA中核转录因子-κB(NF-κB)的活性,采用酶联免疫吸附法检测细胞培养液及血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)的水平.组间差异采用单因素方差分析进行统计学分析,P<0.05为具有显著性差异.结果:建模后3,6,12h时,NF-κB活性假手术组为6.26±0.79,7.01±0.49,6.79±0.94;SAP组为11.94±1.33,23.23±1.22,32.97±1.81.SAP组PMA细胞培养液及血清中TNF-α,IL-1β水平与NF-κB活性变化一致.在各时间点,SAP组PMA中NF-κB活性,细胞培养液及血清中TNF-α,IL-1β水平均高于假手术组(P<0.01).结论:NF-κB可以启动PMA中炎症介质的产生和释放,从而参与SAP的发生和发展.

芍药苷对佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能及其产生细胞因子的影响

目的研究芍药苷(PF)对佐剂性关节炎(AA)大鼠腹腔巨噬细胞(PMΦ)吞噬功能及其产生细胞因子的影响。方法采用弗氏完全佐剂(FCA)诱导AA大鼠模型,无菌取PMΦ,吞噬功能采用中性红法测定,PMΦ培养上清液中IL-1活性的测定采用小鼠胸腺细胞增殖法,TNF-α和PGE2含量的测定采用放射免疫测定法。结果PF能抑制关节肿胀,降低AA大鼠PMΦ过强的吞噬功能和产生IL-1、TNF-α和PGE2的水平。结论PF对AA大鼠的抗炎和免疫抑制作用与其降低AA大鼠PMΦ过强的吞噬功能和产生IL-1、TNF-α和PGE2的水平有关。

氯化钆对大鼠腹腔巨噬细胞表达CD68的影响

目的观察氯化钆(GdCl3)对大鼠腹腔巨噬细胞(PMΦ)表达CD68是否有抑制作用。方法取正常大鼠PMΦ体外培养,用不同浓度的GdCl3处理PMΦ;采用弗氏完全佐剂(FCA)诱导大鼠佐剂性关节炎(AA)模型并尾静脉注射GdCl3。采用免疫荧光双标、Western blot法检测PMΦ活化标记物CD68的表达情况。结果在一定的浓度范围内,GdCl3可抑制体外培养的正常大鼠PMΦ中CD68的表达,以5×10-6mol/L浓度抑制效果最明显。大剂量的GdCl3对细胞有明显的毒性作用,表现为细胞的形态和核发生改变,并可诱导内质网(ER)应激相关蛋白ARMET的表达。对于AA大鼠活化的PMΦ,体内注射GdCl3(10mg/kg)可使部分CD68阳性的PMΦ转阴,同时促进这些阴性细胞的分化;GdCl3并可诱导部分活化的PMΦ凋亡。结论GdCl3可以抑制大鼠PMΦ中CD68的表达及诱导活化的PMΦ凋亡,这可能是GdCl3抑制PMΦ活化的机制之一。

杂色曲霉素对体外小鼠腹腔巨噬细胞白细胞介素12表达与分泌的影响

目的 探讨杂色曲霉素(ST)对巨噬细胞免疫功能的影响。方法 分别采用半定量逆转录聚合酶链反应及酶联免疫吸附法,研究0 .12 5 ,0 .2 5 ,0 .5 ,1.0和2 .0mg·L- 1ST预处理对小鼠腹腔巨噬细胞白细胞介素(IL) 12mRNA表达及其蛋白分泌的影响。结果 在0 .12 5～1.0mg·L- 1范围内,ST处理对小鼠腹腔巨噬细胞IL 12p4 0和IL 12p35mRNA的表达均有一定的抑制作用。但在蛋白水平,对IL 12分泌的影响不明显。当ST浓度达到2 .0mg·L- 1时,可明显抑制IL 12p4 0mRNA的表达及IL 12的分泌。结论 ST可抑制巨噬细胞IL 12的表达或分泌,提示ST可能在一定程度上对机体的细胞免疫功能产生不利影响。

靶向Tak1基因的siRNA干扰对小鼠腹腔巨噬细胞的生物学效应

目的通过小干扰RNA(siRNA)使小鼠腹腔巨噬细胞Tak1基因沉默,观察Tak1基因对腹腔巨噬细胞细胞因子释放的影响。方法以靶向Tak1基因的siRNA作为实验组,同时设立空白对照组,瞬时转染昆明种小鼠腹腔巨噬细胞,采用荧光定量PCR技术定量检测Tak1 mRNA表达水平;采用Western blotting技术测定Tak1表达抑制情况,进而实现Tak1siRNA干扰作用的优化;并观察LPS攻击后腹腔巨噬细胞IL-1β的表达水平。结果细胞分别转染0.6、1.2、1.6μmol/LTak1 siRNA,mRNA抑制率为69.73%、80.85%、88.78%,最佳转染浓度为1.6μmol/L。Tak1蛋白在转染48h出现良好沉默效果,以1.6μmol/L siRNA效果最好。转染后小鼠腹腔巨噬细胞在100ng/ml LPS刺激下,细胞因子IL-1β分泌水平明显升高(P<0.01)。结论靶向Tak1基因的siRNA具有较好的靶基因沉默效果。

脾切除对小鼠腹腔巨噬细胞数量和功能的影响

目的：研究脾切除对小鼠腹腔巨噬细胞数量和功能活性的影响。方法：术后４ 周获取腹腔常居巨噬细胞和炎症巨噬细胞，检测其数量、吞噬功能和一氧化氮水平。结果：与正常对照组和假手术组比较，脾切除组小鼠的２ 种巨噬细胞不仅数量明显减少，而且它们的吞噬功能和一氧化氮水平呈明显下降。结论：提示脾切除造成的单核吞噬细胞继发性炎症反应的损伤和巨噬细胞功能活性的降低。

腹腔巨噬细胞对急性胰腺炎大鼠腹腔炎症反应的影响

目的:研究腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophages,PMs)对实验性胰腺炎大鼠腹腔炎症反应的影响。方法:胰胆管逆行注射2%去氧胆酸钠制作出血坏死性胰腺炎大鼠模型,使用氯屈磷酸二钠脂质体(Liposome-CL2MBP)腹腔注射特异性清除腹腔巨噬细胞,采用纯雄性S-D大鼠24只,随机分为腹腔巨噬细胞保留/PMs(+)组、腹腔巨噬细胞清除/PMs(-)组和假手术/SO组。造模后12h活杀大鼠取标本,做胰腺病理学检查,血清淀粉酶测定,腹水定量,检测腹水细胞因子和一氧化氮水平。结果:PMs(-)组和PMs(+)组间在胰腺病理学评分、血清淀粉酶水平方面无显著差异,两组在腹水定量、腹水细胞因子和一氧化氮水平方面差异显著(P<0.05)。结论:腹腔巨噬细胞对急性胰腺炎大鼠腹腔炎症反应有重要影响。

胆红素对脂多糖引起的腹膜炎及腹腔免疫细胞功能的影响

目的探讨胆红素(bilirubin)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)引起的腹膜炎中腹腔炎性因子分泌,以及腹膜巨噬细胞和Raw264.7细胞功能的影响。方法构建LPS诱导的小鼠腹膜炎模型,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定小鼠腹腔灌洗液上清液中炎性因子(IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-6)的含量;分离培养小鼠腹膜巨噬细胞并进行分组处理,培养Raw264.7细胞进行分组处理。采用MTT法检测不同处理的腹膜巨噬细胞与Raw264.7细胞的活性;实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测不同处理的腹膜巨噬细胞与Raw264.7细胞中Nlrp3和IL-1βmRNA的表达情况;免疫印迹法(Western blot)检测不同处理的腹膜巨噬细胞中Nlrp3、IL-1β和caspase-1蛋白表达,Raw264.7细胞中Nlrp3、IL-1β、IκBα和p-p65蛋白表达,以及Raw264.7胞质与胞核中p50、p65和p-p65蛋白表达水平;免疫荧光染色检测p-p65蛋白在不同处理的Raw264.7细胞胞质与胞核中的表达情况。结果在LPS诱导的小鼠腹膜炎模型中,注射胆红素的小鼠腹腔灌洗液中IL-2、IL-4、IL-6和IFN-γ的含量明显降低。10μmol/L胆红素处理腹膜巨噬细胞后对细胞活性无影响;10μmol/L胆红素预处理可以显著抑制脂多糖诱导的腹膜巨噬细胞中Nlrp3、IL-1βmRNA和Nlrp3、IL-1β、caspase-1蛋白的表达。5μmol/L、10μmol/L胆红素处理Raw264.7细胞后对细胞活性无影响;胆红素呈剂量依赖性地抑制脂多糖诱导的Raw264.7细胞中Nlrp3、IL-1βmRNA和蛋白表达水平,并抑制IκBα蛋白表达降低与p-p65蛋白表达升高;10μmol/L胆红素预处理抑制了脂多糖诱导的Raw264.7细胞核中p50、p65和p-p65蛋白表达升高以及p-p65从细胞质向细胞核的转移。结论胆红素可抑制脂多糖引起小鼠腹膜炎中腹腔灌洗液中炎性因子的分泌,并抑制腹膜巨噬细胞和Raw264.7细胞中Nlrp3炎性体活化,该作用可能是通过抑制NF-κB通路激活实现的。

腹腔巨噬细胞异质性与术后腹腔粘连

腹腔粘连是腹腔损伤后在腹腔脏器之间或腹腔脏器与腹壁之间形成的异常纤维结缔组织,是腹盆腔手术最常见的术后并发症,严重损害患者的生活质量。凝血、炎症和纤溶系统失衡导致腹腔粘连的发生,腹腔巨噬细胞参与每个环节的调控。在腹膜损伤发生后的短时间内,腹腔巨噬细胞便聚集形成细胞团,覆盖在受损表面,调控损伤修复和粘连带形成。现总结腹腔巨噬细胞的异质性及其对术后腹腔粘连发生、发展过程的调控作用,以揭示术后腹腔粘连的免疫学机制,为该病的预防和治疗提供新思路。

腹膜透析液的生物相容性

腹膜透析是终末期肾脏病病人的主要替代疗法之一。由于对腹膜透析的技术和设备已进行了许多改进,在透析期间腹膜炎的发生率已有明显的下降。然而,经过大量临床观察和研究,人们发现腹膜透析液(以下简称腹透液)在生物相容性方面也存在着一些问题,例如腹透液的低pH、高渗、高浓度葡萄糖以及乳酸等非生理性因素可损害腹腔的局部防御机制。

重组人白细胞介素1受体拮抗剂对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用

目的研究重组人白细胞介素1受体拮抗剂(RhIL-1Ra)对大鼠佐剂性关节炎(AA)的影响,探讨部分机制。方法将SD大鼠随机分为6组:正常组、AA组、AA+RhIL-1Ra(2·5、10、40mg/kg,tid,sc)和AA+anakinra组。弗氏完全佐剂诱导AA大鼠模型,检测体重、足爪肿胀度、多发性关节炎指数、T、B细胞增殖度、腹腔巨噬细胞产生的IL-1、TNF-α和PGE2水平及关节滑膜的病理学改变。结果RhIL-1Ra(2·5、10、40mg/kg,tid×7d)改善了AA大鼠踝关节的炎性肿胀和病理学改变,RhIL-1Ra(40mg/kg,tid×7d)显著提高了ConA诱导的脾细胞增殖,RhIL-1Ra(2·5、10、40mg/kg,tid×7d)抑制了LPS诱导的脾细胞增殖,RhIL-1Ra使AA大鼠腹腔巨噬细胞产生IL-1、TNF-α和PGE2减少。结论RhIL-1Ra对AA大鼠有治疗作用,影响腹腔巨噬细胞功能和T、B淋巴细胞可能是其发挥作用的部分机制。

免疫细胞生物学

0131725 树突细胞:处于临床的交叉路口/Mule J J//J Clin Invest.-2000,105(6).-707～708 医科情0131726

扶正益津汤对化疗所致免疫功能抑制小鼠细胞毒功能的影响

目的:观察扶正益津汤对化疗所致免疫功能抑制小鼠细胞毒功能的影响。方法:以小鼠腹腔巨噬细胞介导的肿瘤细胞溶解作用(MTC)和抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(ADCC)为指标,观察中药扶正益津汤对小鼠巨噬细胞细胞毒活性的影响。结果:扶正益津汤对受环磷酰胺作用、免疫功能抑制小鼠细胞毒活性有显著增强作用。结论:扶正益津汤可用于化疗辅助用药。

骨髓间充质干细胞对急性胰腺炎大鼠腹腔巨噬细胞活化的影响

巨噬细胞为主的多种免疫细胞共同参与重症急性胰腺炎（SAP）中炎症反应的级联样放大，构成了全身炎症反应综合征的免疫紊乱基础。有研究报道，腹膜巨噬细胞、肺泡巨噬细胞和肝脏库弗细胞在实验性急性坏死性胰腺炎（ANP）的不同阶段被活化。

小鼠腹腔巨噬细胞的制取与鉴定方法探讨

目的建立一种简单、有效的小鼠腹腔巨噬细胞制备培养与鉴定方法。方法以(磷酸盐缓冲液)PBS溶液灌洗FVB小鼠腹腔,5 min后分离获取小鼠腹腔灌洗细胞,转入含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中贴壁培养。光学显微镜观察细胞形态;流式细胞仪检测细胞表面标志F4/80和CD11b表达情况。结果形态学观察发现温孵培养2h更换培养基后,贴壁细胞形态改变明显。流式检测未经贴壁处理的腹腔灌洗细胞,F4/80阳性率仅为13.7%;而经贴壁培养的腹腔灌洗细胞,F4/80阳性率为73.2%。此外,F4/80阳性细胞CD11b的阳性率为91.8%。结论本法是一种简单、实用的体外制取培养腹腔巨噬细胞的方法。

腹膜粘连动态过程的细胞机制研究

目的动态观察创伤、感染时的腹膜粘连,探讨腹膜粘连相关细胞的病理生理机制。方法健康Wister大鼠240只,分为创伤粘连组、创伤感染组、正常组,每组80只。分别于1、3、7、14 d观察粘连情况、HE染色、测定血清t-PA、PAI、FDP含量。分离培养巨噬细胞、间皮细胞、成纤维细胞,分别经LPS、TGF、TNF处理后,测定TNF、PAI、t-PA及间皮细胞、成纤维细胞的增殖率。结果感染、炎症、间皮细胞损伤引起巨噬细胞活化,分泌炎症细胞因子及PAI;成纤维细胞在LPS、TGF-β及细胞因子的刺激下,增殖活跃;局部的炎症反应抑制间皮细胞的修复和t-PA的分泌。结论间皮细胞损伤、巨噬细胞活化、纤维蛋白渗出、成纤维细胞过度增殖是粘连形成的病理生理基础,并存在着腹腔内感染、炎症反应、损伤纤维蛋白渗出、纤维蛋白基质形成成纤维细胞迁移、机化的时间顺序。

腹膜腔细胞的免疫特性及功能研究进展

腹膜腔内含有大量的免疫细胞,主要是腹膜腔巨噬细胞和腹膜腔B细胞。腹膜腔巨噬细胞是一群异质性细胞,以高表达F4/80(F4/80hi)大腹膜腔巨噬细胞为主,主要作用是维持组织稳态;在炎症或病理条件下通过多种方式发挥免疫调节和组织修复作用;但也会因为抑制NK/T细胞功能而增加部分肿瘤负荷和转移概率。腹膜腔B细胞主要通过分泌IL-10发挥免疫调节作用。两种细胞可以相互协同,都在机体保护、免疫调节方面发挥重要作用。本文就腹膜腔细胞特性及功能结合国内外文献予以总结阐述。