丁酸钠通过G蛋白偶联受体41介导蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路刺激牛乳腺上皮细胞增殖

本试验旨在研究丁酸钠(SB)刺激牛乳腺上皮细胞(BMECs)增殖的分子机制。采用单因素设计,以含不同浓度(0、15、30、45、60和75μmol/L)SB的DMEM/F12培养基(含10%新生胎牛血清)培养BMECs,通过细胞计数试剂盒(CCK⁃8)检测细胞活性,确定适宜SB浓度。然后以对照(0μmol/L)和适宜SB浓度培养BMECs,并采用蛋白激酶B(Akt)阻断剂(AKT⁃IN⁃1)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)阻断剂雷帕霉素(Rap)或小干扰RNA(siR⁃NA)沉默G蛋白偶联受体41(GPR41)对信号通路及受体进行处理,检测BMECs细胞增殖、凋亡以及GPR41和Akt/mTOR信号通路相关基因和蛋白表达的变化。结果表明:1)与对照组相比,60μmol/L的SB显著提高了BMECs细胞活力(P<0.05),75μmol/L的SB显著抑制了BMECs细胞活力(P<0.05);60μmol/L的SB极显著增加了增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白A2(CCNA2)和细胞周期蛋白D1(CCND1)的mRNA相对表达量(P<0.01),显著增加了PCNA和细胞周期蛋白A1(CCNA1)的蛋白相对表达量(P<0.05)。2)与对照组相比,60μmol/L SB显著或极显著提高了B细胞淋巴瘤2(BCL2)的mRNA和蛋白相对表达量及BCL2/B细胞淋巴瘤2相关X蛋白(BAX)比值(P<0.05或P<0.01),显著或极显著降低了BAX、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase⁃3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase⁃9)的mRNA和蛋白相对表达量(P<0.05),同时显著或极显著提高了磷酸化蛋白激酶B(p⁃Akt)/Akt和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p⁃mTOR)/mTOR比值(P<0.05或P<0.01)。60μmol/L的SB对Akt和mTOR信号通路的激活被AKT⁃IN⁃1极显著阻断(P<0.01),而Rap抑制mTOR完全逆转了60μmol/L SB对BMECs增殖的促进作用以及增殖基因和蛋白表达的改变(P<0.05或P<0.01),但不影响与凋亡和SB激活的Akt信号通路相关的mRNA或蛋白表达(P>0.05)。3)与对照组相比,60μmol/L的SB极显著提高了GPR41的mRNA相对表达量(P<0.01),显著提高了GPR41蛋白相对表达量(P<0.05)。GPR41 siRNA沉默GPR41后完全逆转了60μmol/L SB对BMECs增殖的促进作用以及Akt/mTOR信号通路相关的增殖基因和蛋白的mRNA或蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。由此可见,60μmol/L SB可通过GPR41介导Akt/mTOR信号通路促进BMECs增殖。

基于CT平扫影像组学特征在预测胸腺上皮性肿瘤WHO简化病理分型中的价值

目的探讨基于CT平扫的影像组学特征在预测胸腺上皮性肿瘤WHO简化病理分型中的应用价值。方法回顾性收集2010年1月-2022年3月由病理结果证实的胸腺上皮肿瘤(TETS)患者共57例,通过TETS的WHO简化病理分型,分为低危组(A、AB、B1型)23例、高危组(B2、B3、C型)34例,并按照8:2的比例,随机分成训练集和测试集。每个病灶均由两名放射科医生经过协商后,利用ITK-SNAP软件对兴趣区(ROI)进行勾画。使用Python v3.67提取放射组学特征,并使用Spearman相关系数和LASSO特征选择方法进行降维和筛选。在训练集中,应用支持向量机(SVM)、多层感知机(MLP)和逻辑回归(LR)构建术前诊断预测模型。采用受试者工作特征曲线(ROC)评估预测效果,并通过内部测试集验证预测模型。结果共提取了1649个影像组学特征参数,经过Spearman相关系数筛选得到221个差异特征,并通过LASSO方法将其降维至12个组学特征。在测试集中,基于SVM、MLP和LR构建的术前预测模型分别表现出AUC值为0.800、0.868和0.971,其中LR模型具有更好的预测效果。结论基于CT平扫影像组学特征构建的SVM、MLP和LR模型在预测胸腺上皮性肿瘤WHO简化病理分型方面展现出较好的预测潜力,其中LR模型具有更好的预测效果。

人工智能辅助诊断系统在液基细胞学宫颈腺上皮病变筛查中的应用价值

目的:探讨人工智能(AI)辅助系统在宫颈腺上皮病变细胞学诊断中的应用价值。方法:收集诊断为非典型腺细胞(AGC)的液基细胞学薄层宫颈涂片143例,阴性涂片631例,所有涂片均进行AI辅助阅片和中级医师阅片,以主任医师复核的诊断结果为金标准,进行对比分析,并统计特异性、敏感性等指标。结果:宫颈涂片腺上皮细胞病变的检测中,AI辅助阅片系统的阳性率为15.7%、特异性为99.8%,而中级医师阅片的阳性率为18.3%、特异性为99.2%,两组间差异无统计学意义(P>0.05)。AI辅助系统的准确率为97.0%,敏感性为84.6%,中级医师阅片的准确率为99.2%,敏感性为99.3%,两组间差异具有统计学意义(P<0.05)。AI辅助阅片的ROC曲线下面积(AUC)为0.922,低于中级医师阅片的0.993,差异有统计学意义(P<0.05)。此外,AI辅助阅片与中级医师阅片的诊断一致率达到99%,相应的Kappa值为0.888,表明两种阅片方法基本一致。结论:AI辅助系统在宫颈腺上皮病变的诊断中展现出较高的特异性,然而其敏感性相对较低,存在一定的漏诊可能性。尽管AI辅助阅片的准确率尚未达到中级医师的水平,但其仍展现出重要的诊断潜力。未来的研究和发展应着重于提升AI辅助阅片系统的敏感性,并通过临床验证来确保其在实际应用中的可靠性和安全性。

CT影像特征预测胸腺上皮性肿瘤病理分型

目的探讨基于临床及CT影像特征构建机器学习模型预测胸腺上皮性肿瘤病理分型并评估其预测效能。方法回顾性收集2006年1月~2023年6月在南方医科大学南方医院经病理证实的221例胸腺上皮性肿瘤患者资料,包括临床信息、CT影像和病理结果,并根据简化病理分型将患者分为低危型(A、AB、B1型)和高危型(B2、B3、胸腺癌)。以7:3的比例将患者随机划分为训练集(n=159)和验证集(n=62);在训练集中,采用单因素Logistic回归分析低危组和高危组临床及CT特征的差异性,应用逐步回归和LASSO回归进一步降维筛选特征,构建4种机器学习模型(Logistic回归、随机森林、决策树和支持向量机模型)。在验证集中通过ROC曲线分析曲线下面积评价模型预测效能。结果221例胸腺上皮性肿瘤患者中105例为低危型(训练集74例,验证集31例),116例为高危型(训练集85例,验证集31例)。单因素分析结果显示,高危组与低危组比较性别、胸痛差异有统计学意义(P<0.05);通过逐步回归法选取3个CT影像特征(肿瘤强化程度、心包或大血管侵犯、胸膜侵犯)构建多因素Logistic回归模型,通过LASSO回归分析最终筛选出8个临床及CT影像特征构建随机森林、决策树及支持向量机模型。模型在训练集上的曲线下面积分别为0.793、0.854、0.761、0.816,在验证集上的曲线下面积分别为0.819、0.742、0.710、0.811。结果表明Logistic回归模型泛化性优于其他3个模型。结论基于CT影像特征构建的Logistic回归模型在预测胸腺上皮性肿瘤病理分型上具有良好的诊断效能,有望协助临床早期无创性识别高危型胸腺瘤及胸腺癌。

Wnt信号通路与自身免疫调节因子共同参与胚胎干细胞向胸腺上皮祖细胞的分化

背景:自身免疫调节因子(autoimmune regulator gene,Aire)及Wnt信号通路在小鼠胚胎干细胞多能性的维持及分化中都发挥着重要作用,但Wnt信号与Aire是否参与了小鼠胚胎干细胞向胸腺上皮祖细胞的分化尚未可知。目的:探讨Wnt信号通路和自身免疫调节因子与胚胎干细胞分化的关系。方法:采用两步分化方法定向诱导小鼠胚胎干细胞分化为内胚层再分化为胸腺上皮祖细胞,然后用Aire shRNA慢病毒感染小鼠胚胎干细胞,嘌呤霉素筛选单克隆稳定株,再采用两步分化方法进行诱导分化,分别于定向诱导分化第0,3,10天,采用细胞免疫荧光、流式细胞术、Western blot、Real-Time qPCR检测相关基因及蛋白的表达变化。结果与结论:①定向诱导分化第0天,免疫荧光染色显示SSEA1、OCT4表达呈阳性;②定向诱导分化第3天,免疫荧光染色显示SOX17、FOXA2表达呈双阳性;③定向诱导分化第10天,流式细胞术结果显示EPCAM1、K5、K8表达呈阳性;④与未分化的小鼠胚胎干细胞相比,诱导分化的胸腺上皮祖细胞中Wnt7a、β-catenin、Gsk-3β蛋白表达升高,Aire蛋白表达降低;⑤与未分化的小鼠胚胎干细胞相比,诱导分化的胸腺上皮祖细胞中Wnt7a、β-catenin、Gsk-3β及Aire mRNA表达升高;⑥与正常培养的小鼠胚胎干细胞及其最终分化的胸腺上皮祖细胞相比,敲低Aire基因的小鼠胚胎干细胞及其最终分化的胸腺上皮祖细胞中Wnt7a、β-catenin、Gsk-3β蛋白表达水平降低。综上所述,Wnt信号通路和Aire共同参与了小鼠胚胎干细胞定向诱导分化为小鼠胸腺上皮祖细胞的过程。

缺氧状态下has-miR-215-5p通过抑制BLCAP的表达调控子宫内膜腺上皮细胞增殖和迁移

目的探究缺氧状态下的子宫内膜腺上皮细胞(EEC)增殖和迁移的可能机制。方法分别提取缺氧(1%氧浓度,缺氧组)和常氧(21%氧浓度,常氧组)条件下EEC的RNA进行高通量测序(RNA-sequence),分析两组细胞中微小RNA(microRNA,miRNA)的差异表达。利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)的方法对差异表达的miRNA即has-miR-215-5p进行鉴定,通过miRNA靶基因数据库网站(Target Scan)分析has-miR-215-5p的靶基因。Western Blot检测两组细胞中靶基因膀胱癌相关蛋白(BLCAP)的蛋白表达水平,细胞计数实验检测两组EEC的增殖情况,划痕实验检测两组EEC的迁移能力。结果测序结果显示,缺氧组EEC中has-miR-215-5p表达显著上升(P<0.001),RT-qPCR验证结果与测序结果一致。miRNA Target Scan数据库检索结果显示,BLCAP是has-miR-215-5p的下游靶基因,双荧光素酶报告基因实验结果显示has-miR-215-5p与BLCAP-3’-UTR结合,结合位点突变后结合活性消失。Western Blot结果显示,与常氧组相比,缺氧组EEC中的BLCAP蛋白表达显著下降(P<0.001)。CCK-8及划痕实验分别提示与常氧组相比,缺氧组的EEC增殖能力显著降低、迁移能力显著增强(P<0.001)。结论缺氧条件下EEC中has-miR-215-5p可能通过与BLCAP-3’-UTR结合,抑制BLCAP的表达活性,导致EEC的增殖降低与迁移增强。

胸腺瘤相关重症肌无力患者瘤旁胸腺上皮细胞外泌体对Treg细胞功能的影响

目的:探讨胸腺瘤相关重症肌无力(TAMG)患者瘤旁胸腺上皮细胞外泌体对调节T细胞(Treg)叉状头转录因子P3(FOXP3)表达及分泌转化生长因子(TGF)-β1、白细胞介素(IL)-10功能的影响。方法:收集TAMG患者及先天性心脏病无胸腺疾病的患者(对照组)胸腺组织,分离培养胸腺上皮细胞,使用广谱角蛋白(p-CK)和波形蛋白(Vimentin)染色行免疫荧光鉴定;膜亲和柱法提取胸腺上皮细胞外泌体并行透射电子显微镜(TEM)、粒径分析(NTA)及western blotting检测鉴定;磁珠分选法分离胸腺上皮细胞中Treg细胞,流式细胞术检测纯度;Treg细胞与外泌体共培养,行外泌体染色示踪实验,检测FOXP3表达及培养上清液TGF-β1、IL-10水平。结果:分离细胞呈长梭形,生长良好,免疫荧光p-CK呈阳性,Vimentin呈阴性,细胞为胸腺上皮细胞。TEM、NTA、western blotting结果提示提取物为外泌体。流式细胞术检测Treg细胞纯度>90%,纯度较好。外泌体染色示踪结果提示Treg细胞可吞噬胸腺上皮细胞外泌体,与TAMG组胸腺上皮细胞外泌体共培养后Treg细胞FOXP3表达减少(P<0.01),TGF-β1、IL-10分泌减少(P<0.01)。结论:Treg细胞可吞噬TAMG瘤旁胸腺上皮细胞外泌体,导致FOXP3表达减少、分泌TGF-β1、IL-10减少,免疫抑制功能减弱,其可能参与TAMG的发病过程。

脂多糖与钙离子共处理的牛乳腺上皮细胞miRNA表达谱的比较分析

【目的】探索钙离子对牛乳腺上皮细胞炎症反应的调控作用,比较分析脂多糖与钙离子共处理的牛乳腺上皮细胞的miRNA表达谱。【方法】使用脂多糖处理牛乳腺上皮细胞构建炎症反应模型,检测不同浓度(0.5~6.6 mmol/L)钙离子和脂多糖(50μg/mL)共处理的牛乳腺上皮细胞的炎症因子转录水平。提取正常、脂多糖处理、脂多糖与钙离子共处理牛乳腺上皮细胞样本中总RNA,每组各3个样本。对9个RNA样本进行质量评估,并对其开展miRNA测序和生物信息学分析,最后对3组共有差异表达miRNA进行实时荧光定量PCR验证。【结果】在牛乳腺上皮细胞炎症模型中,高浓度钙离子可抑制炎症因子的转录。9个样本的clean reads在raw reads中占比为93.86%~98.18%,序列分布长度均集中在21~24 nt之间。3组样本的组内相似性高,而组间差异度高。3组样本共鉴定出47个差异表达miRNA,共有差异表达miRNA分别为bta-miR-11980、bta-miR-1246和bta-miR-677。GO功能和KEGG通路富集分析显示,差异表达miRNA的靶基因显著富集于细胞通讯调节、信号调节、内膜系统、系统发育、细胞发育过程、细胞分化等GO条目,显著富集于HIF-1信号通路、ErbB信号通路、TNF信号通路、突触囊泡周期、肌醇磷酸代谢途径等通路。实时荧光定量PCR验证结果显示,3组样本共有差异表达miRNA(bta-miR-677和bta-miR-1246)表达趋势与转录组测序结果一致。【结论】钙离子通过调控牛乳腺上皮细胞内bta-miR-11980、bta-miR-1246和bta-miR-677等差异表达miRNA的表达模式,间接影响牛乳腺上皮细胞炎症反应进程。

IGFBP5增龄性表达促进胸腺上皮细胞线粒体自噬和凋亡

目的 探讨在胸腺上皮细胞中随年龄增长而上调表达的胰岛素样生长因子结合蛋白5(Insulin Like Growth Factor Binding Protein 5,IGFBP5)在胸腺衰退中的作用和机制。方法 使用基因差异表达分析方法从已发表人胸腺基质细胞单细胞数据集(GSE147520)中筛选出随年龄增长表达上调程度最高的基因IGFBP5;Mfuzz趋势分析筛选出与IGFBP5具有相同表达趋势的基因;富集分析注释与IGFBP5共趋势基因集;使用蛋白序列比对工具研究IGFBP5蛋白氨基酸序列的人鼠同源性;使用NIH基因数据库研究IGFBP5在人鼠器官组织中表达模式;免疫组化研究IGFBP5在不同年龄C57/BL6小鼠胸腺中的表达模式;构建IGFBP5过表达胸腺上皮细胞系;透射电镜观察IGFBP5过表达胸腺上皮细胞系中线粒体的形态变化;免疫蛋白印记(Western Blot, WB)对线粒体及全细胞组分线粒体自噬标志物微管相关蛋白1B(Microtubule Associated Protein 1 Light Chain 3 Beta, LC3B)、PTEN诱导激酶1(Pten Induced Kinase 1, PINK1)、Parkin泛素蛋白连接酶(Parkin Rbr E3 Ubiquitin Protein Ligase, Parkin)、BCL2互作蛋白3(BCL2 Interacting Protein 3, BNIP3),细胞凋亡标记物活化型胱天蛋白酶3 (Cleaved-Caspase3)表达水平进行检测;细胞双重免疫荧光对线粒体标志物与线粒体探针(MitoTracker)胞内定位进行检测;使用流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)对细胞系凋亡水平进行检测。结果 IGFBP5是人胸腺上皮细胞中随年龄增长表达上调程度最大的基因,与其具有共同表达模式的基因集显著富集在线粒体相关通路上。人与小鼠IGFBP5蛋白序列高度保守,其在人、小鼠多器官组织中表达模式相近,且IGFBP5在人、小鼠胸腺中均呈现中等表达水平;此外,IGFBP5在人和小鼠胸腺上皮中随年龄增长表达升高;在IGFBP5过表达小鼠胸腺上皮细胞系中,透射电镜结果表明线粒体自噬体增多,WB结果表明线粒体组分和细胞组分LC3B、PINK1、Parkin蛋白表达水平上调,BNIP3无明显差异;细胞双重免疫荧光结果表明LC3B、PINK1、Parkin蛋白胞质表达增多且与线粒体共定位;WB表明IGFBP5过表达鼠胸腺上皮细胞系中细胞凋亡标志物Cleaved-Caspase3水平升高;FCM表明IGFBP5过表达细胞系凋亡细胞比例增加。结论 人、小鼠胸腺上皮细胞中随年龄增长而表达升高的IGFBP5促进线粒体自噬和细胞凋亡,从而导致胸腺上皮细胞减少和胸腺功能衰退,因此,IGFBP5可成为干预胸腺衰老、重构人体免疫力的潜在靶标。

橙皮苷对脂肪酸致牛乳腺上皮细胞脂质代谢紊乱及其凋亡作用的研究

为了探究橙皮苷(HES)对脂肪酸(NEFA)致牛乳腺上皮细胞(BMEC)脂质代谢紊乱及其凋亡的影响,试验首先选用0,0.6,1.2,1.8,2.4 mmol/L NEFA培养BMEC 24 h,通过观察细胞脂滴积累程度、检测三酰甘油(TG)含量及过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)基因相对表达量筛选出NEFA最佳使用浓度。选用不同浓度HES培养细胞24 h,通过检测细胞存活率筛选出HES最佳浓度。将BMEC分为对照组、NEFA组和NEFA+HES组,其中对照组细胞只用完全培养液处理24 h,NEFA组只用最佳浓度的NEFA处理24 h,NEFA+HES组使用最佳浓度NEFA及最佳浓度HES共同处理24 h,采用实时荧光定量PCR和Western-blot技术检测脂质代谢紊乱相关指标腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)、磷酸化腺苷酸激活蛋白激酶(p-AMPK)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、固醇调节元件蛋白-1c(SREBP-1c)、PPAR-γ、酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)和细胞凋亡通路相关指标B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase 3)、半胱氨酸蛋白酶9(Caspase 9)基因和蛋白表达情况,并通过TUNEL检测细胞凋亡情况。结果表明:NEFA和HES最佳使用浓度分别为1.2 mmol/L、20μg/m L。与对照组相比,NEFA组细胞ACC、PPAR-γ、ACOX1、SREBP-1c基因和蛋白相对表达量显著升高(P<0.05),p-AMPK/AMPK蛋白相对表达量显著下降(P<0.05),Bax、Caspase 3、Caspase 9基因和蛋白相对表达量显著上升(P<0.05),Bcl-2基因和蛋白相对表达量显著降低(P<0.05),细胞凋亡数显著升高(P<0.05)。与NEFA组相比,添加20μg/m L HES后显著逆转了NEFA诱导的上述指标的变化(P<0.05)。说明HES可能通过调控脂质代谢和抑制细胞凋亡改善NEFA诱导的BMEC损伤。

基于增强CT影像组学列线图预测胸腺上皮性肿瘤侵袭性

目的探讨基于增强CT组学列线图预测胸腺上皮性肿瘤侵袭性的价值。资料与方法回顾性收集2015年1月—2023年1月皖南医学院第一附属医院经病理证实的155例胸腺上皮性肿瘤患者的临床及影像学资料,按照7∶3随机分训练集(n=108)及验证集(n=47)。在静脉期图像提取影像组学特征;采用最小绝对收缩和选择算子算法进行降维,筛选最优特征建立影像组学标签,并计算标签得分(Rad-score);使用单因素及多因素回归分析筛选独立危险因素,分别构建影像特征模型、Rad-score和影像组学-临床联合模型,并绘制联合模型列线图;使用受试者工作特征曲线及决策曲线评价模型的诊断效能及临床收益;比较模型间曲线下面积差异;使用校正曲线评价列线图的校准度。结果经降维筛选出16个最优影像组学特征。Logistic回归分析发现肿瘤形态(OR=2.932,P=0.025)、周围组织侵犯(OR=11.461,P=0.005)及Rad-score(OR=255.27,P=0.002)为独立危险因素。联合模型列线图的曲线下面积在训练集及验证集分别为0.852、0.831;与影像特征模型及Rad-score在训练集比较差异均有统计学意义(Z=3.607、2.270,P<0.05)。列线图模型训练集的阈值概率在0.08~0.88时临床获益。结论基于增强CT影像组学结合临床特征的联合模型列线图能够有效预测胸腺上皮性肿瘤的侵袭性,可辅助临床术前制订精准的治疗方案。

胸腺上皮性肿瘤CT特征与风险度及病理分型的相关性研究

目的:探讨胸腺上皮性肿瘤(TETs)CT影像特征与病理分型及风险分类的相关性。方法:回顾性分析经病理证实为TETs的术前临床及影像资料,比较TETs一般资料及CT特征与病理分型及风险分类的相关性,二元logisitic回归分析高风险TETs的独立危险因素,绘制预测TETs病人高风险的列线图,采用ROC曲线验证列线图模型的准确性。结果:年龄、胸痛、外缘、钙化、分隔、强化幅度、心包膜增厚、纵隔淋巴结转移、周围脂肪浸润在不同病理分型间存在差异(P<0.05)。胸痛、形态、外缘、密度、坏死/囊变、钙化、动脉期CT值、静脉期CT值、强化幅度、心包膜增厚、胸膜增厚、纵隔淋巴结转移、周围脂肪浸润、包绕纵隔结构及侵犯周围血管在低风险组及高风险组间差异有统计学意义(P<0.05)。胸痛、外缘及心包膜增厚是高风险TETs的独立危险因素,ROC分析列线图模型AUC为0.818(95%CI:0.712~0.897,P<0.01)。结论:结合临床及CT特征在一定程度上可预测TETs病理分型,由胸痛、外缘及心包膜增厚三个因素构建的列线图模型对TETs高风险病人的预测效能较好。

缺氧环境下HIF-1调控PAD4介导的H3cit促进子宫内膜腺上皮细胞凋亡

目的:探究缺氧环境下HIF-1以及PAD4对子宫内膜腺上皮细胞凋亡的作用及其相关机制。方法:常氧和缺氧环境培养宫内膜腺上皮细胞CM-H058,qRT-PCR和Western blot检测HIF-1、PAD4、H3cit、Caspase3、Caspase7表达,流式细胞术检测细胞凋亡水平。通过慢病毒转染法将sh-NC、sh-HIF-1、oe-NC、oe-PAD4转染至CM-H058,缺氧环境培养并分组为:sh-NC组、sh-HIF-1组、sh-HIF-1+oe-NC组和sh-HIF-1+oe-PAD4组,检测各组细胞HIF-1、PAD4、H3cit、Caspase3、Caspase7表达和细胞凋亡水平;检测PAD4、H3cit和H3K27ac在Caspase3、Caspase7 TSS富集水平。结果:与常氧组比较,缺氧组HIF-1、PAD4、H3cit、Caspase3、Caspase7表达升高(P<0.05),细胞凋亡水平升高(P<0.05)。与sh-NC组比较,sh-HIF-1组HIF-1、PAD4、H3cit、Caspase3、Caspase7表达降低(P<0.05),细胞凋亡水平降低(P<0.05),HIF-1在PAD4 TSS富集水平降低(P<0.05)。与sh-HIF-1+oe-NC组比较,sh-HIF-1+oe-PAD4组PAD4、H3cit、Caspase3、Caspase7表达升高(P<0.05),细胞凋亡水平升高(P<0.05)。结论:缺氧环境下HIF-1促进PAD4表达。PAD4及其催化的H3cit进一步在Caspase3、Caspase7 TSS富集,促进Caspase3、Caspase7转录和表达,最终诱导子宫内膜腺上皮细胞凋亡。

黄曲霉毒素B1激活核转录因子-κB信号通路引起牛乳腺上皮细胞发生炎性反应

本试验旨在研究不同浓度黄曲霉毒素B1(AFB1)对牛乳腺上皮细胞(MAC-T细胞)中核转录因子-κB(NF-κB)信号通路介导的炎症反应的影响。向MAC-T细胞中分别加入不同浓度的AFB1处理培养液培养24 h,分析AFB1对MAC-T细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)活性、促炎细胞因子含量和基因表达以及NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响。结果显示:1)与对照组相比,2.5、5.0、10.0和20.0μmol/L AFB1处理MAC-T细胞均能显著或极显著降低细胞活力(P<0.05或P<0.01),显著或极显著升高培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性(P<0.05或P<0.01),且呈剂量依赖性。2)与对照组(0μmol/L AFB1)相比,5.0、10.0和20.0μmol/L AFB1处理MAC-T细胞使上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01);5.0μmol/L AFB1处理使MAC-T细胞中IL-1β、IL-8和TNF-αmRNA的相对表达量显著或极显著升高(P<0.05),10.0μmol/L AFB1处理使MAC-T细胞中IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-αmRNA的相对表达量显著或极显著升高(P<0.01),20.0μmol/L AFB1处理使MAC-T细胞中IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-αmRNA的相对表达量极显著升高(P<0.01)。3)与对照组相比,10.0和20.0μmol/L AFB1处理使MAC-T细胞中磷酸化P65(p-P65)、磷酸化核转录因子-κB抑制因子α(p-IκBα)蛋白的相对表达量极显著升高(P<0.01)。上述结果提示,AFB1通过促进炎症相关因子表达和激活NF-κB信号通路,引起MAC-T细胞发生炎性反应。

基于增强CT影像组学的列线图模型在预测胸腺上皮性肿瘤WHO简化分型中的应用研究

目的 探讨基于增强CT图像的列线图模型在预测胸腺上皮性肿瘤(TETs)WHO简化分型中的应用价值。方法 回顾性分析术前行胸部增强CT检查并经手术病理证实的165例TETs,按照8:2的比例随机划分为训练集132例与验证集33例。于静脉期图像手动勾画感兴趣区(ROI)并提取影像组学特征,经数据降维筛选出有效特征并建立影像组学公式,计算每位患者的得分(radscore)并构建影像组学模型。纳入多个CT特征,经多因素逻辑回归筛选出具有独立预测价值的特征并构建CT特征模型。联合具有独立预测价值的CT特征及radscore构建列线图模型。采用受试者工作特性曲线(ROC)评估模型的诊断效能,校正曲线及决策曲线(DCA)评估模型的预测准确性及临床应用价值。结果 在训练集中,纵隔脂肪浸润与radscore共同构建了列线图模型,模型在训练集的曲线下面积(AUC)值为0.902(95%CI:0.838~0.947),在验证集的AUC值为0.824(95%CI:0.652~0.934)。结论 基于增强CT影像组学的列线图模型对于TETs WHO简化分型有较高的预测价值,可作为一种无创的术前评估工具辅助临床决策制订。

小鼠发育过程中胸腺上皮细胞的动力学变化

目的:探究小鼠发育过程中胸腺上皮细胞的动力学变化。方法:取2月龄、6月龄、12月龄雌性昆明小鼠各5只,采用颈椎脱臼法处死小鼠,取胸腺组织,制作石蜡切片,HE染色观察小鼠胸腺皮质和髓质的变化,免疫组化染色检测胸腺上皮细胞的分子标记(角质蛋白5、角质蛋白8)、胸腺上皮细胞成熟有关的自身免疫调节因子(Aire)、胸腺上皮祖细胞的标志物[上皮细胞黏附分子(EpCAM)]、干细胞转录因子[性别决定区Y框蛋白2(Sox2)],免疫印迹法检测FoxN1、EpCAM的蛋白表达,qRT-PCR检测FoxN1、Aire的mRNA的表达。结果:2月龄小鼠胸腺的皮质和髓质结构较为完整,边界清晰;6月龄小鼠胸腺的皮质和髓质结构逐渐融合;12月龄小鼠胸腺的皮质和髓质结构较紊乱,皮髓质交界处不清楚,皮质变薄;随着月龄增加,小鼠胸腺组织的结构完整性逐渐丧失。随着月龄的增加,小鼠胸腺中K5、K8、Aire、EpCAM和Sox2阳性细胞逐渐减少,FoxN1蛋白和mRNA、EpCAM蛋白和Aire mRNA的表达量逐渐降低。结论:小鼠胸腺上皮细胞以及上皮干细胞/祖细胞随发育逐渐减少,提示胸腺正常组织结构逐渐丧失,导致胸腺衰老和免疫功能衰退。

胸腺上皮细胞特异性敲除GSK-3β基因小鼠模型的鉴定及免疫学特征观察

目的构建并鉴定胸腺上皮细胞(thymic epithelial cells,TECs)特异性敲除GSK-3β基因小鼠模型,评价其免疫学特征。方法采用小鼠胚胎干细胞(ES细胞,embryonic stem cells)打靶基因敲除技术,得到F0代的GSK-3β^(flox/flox)(GSK-3β^(f/f))小鼠;再采用Cre-LoxP系统进行小鼠的繁殖;PCR鉴定,筛选出基因型为GSK-3β^(f/f)FoxN1-Cre^(+/-)(GSK-3β^(-/-))小鼠,即为在TECs特异性敲除GSK-3β基因的小鼠。观察基因敲除鼠的一般生物学特征、繁殖能力和子代存活率。应用HE染色、流式细胞术及免疫荧光技术,比较基因敲除鼠和野生型小鼠免疫器官结构、胸腺、脾及外周血中免疫细胞比例及增殖能力差异。结果成功构建TECs特异性敲除GSK-3β基因小鼠模型。与野生型(wild type,WT)小鼠相比,GSK-3β^(-/-)小鼠一般生物学特征无明显差异,子代存活率>90%;衰老进程中GSK-3β^(-/-)小鼠胸腺比WT小鼠体积大,胸腺指数高,胸腺细胞数量多;脾中的初始T细胞及近期迁移细胞数量也显著多于WT小鼠。结论成功构建了TECs特异性敲除GSK-3β基因小鼠模型。为研究GSK-3β基因在TECs的功能和作用机制提供了很好的研究模型。

脂多糖对牛乳腺上皮细胞自噬和凋亡的影响

为探究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对牛乳腺上皮细胞(MAC-T)自噬和凋亡的影响,以MAC-T细胞为试验对象,用CCK-8和乳酸脱氢酶(LDH)法检测不同浓度LPS(100、150、200、250μg/mL),检测细胞的存活率和损伤,从上述分组中挑选浓度为0(对照)、50、100、200μg/mL的LPS建立试验组,Hoechst33342检测细胞核形态,qPCR法检测MAC-T细胞中自噬和凋亡基因(LC3B、p62、BAX、BCL-2、ATG5、ATG7、Beclin-1、caspase-3)mRNA的表达量,Western blot检测MAC-T细胞中自噬和凋亡(LC3B、p62、BAX、BCL-2、ATG5、ATG7、Beclin-1、caspase-3)相关蛋白表达。结果显示,MAC-T细胞的活力会随着LPS的浓度和时间的推移下降,细胞上清中的LDH随着LPS浓度上升而增加,Hoechst33342染色后可以发现细胞核形态出现异型性,染色质碎裂、固缩。qPCR和Western blot检测结果显示LPS在50~100μg/mL浓度下可引起MAC-T细胞自噬,200μg/mL可抑制此过程,同时细胞凋亡随着LPS浓度上升而加剧。说明LPS可引起MAC-T细胞自噬同时诱导细胞凋亡,为大肠埃希氏菌诱导牛乳腺炎发生机制的研究提供参考。

基于非增强CT影像组学列线图在术前预测胸腺上皮肿瘤风险分类中的应用价值

目的:基于非增强CT(NECT)影像组学列线图在术前预测胸腺上皮肿瘤(TET)风险分类中的应用价值。方法:回顾性收集92例确诊为TET患者的临床和影像资料,根据TET的WHO简化病理分型,分为低危组(A、AB、B1型)48例、高危组(B2、B3、C型)44例;按照7∶3的比例,随机分成训练集(64例)和测试集(28例)。勾画病灶ROI并进行影像组学特征的提取,降维和筛选后,选择最优特征,构建9种机器学习模型并选择最优模型,对TET风险进行预测;采用单因素分析的方法筛选临床特征建立临床模型。结合临床评分、影像组学评分构建联合模型,以列线图进行可视化;使用ROC曲线、DeLong检验及校准曲线评估模型性能。结果:共提取影像组学特征1834个,降维、筛选后获得11个组学特征。选取支持向量机(SVM)构建影像组学模型。选取纵隔肿大淋巴结、胸膜/心包肥厚建立临床模型。临床模型、影像组学模型及联合模型在测试集中的AUC值分别为0.812、0.812、0.875,绘制列线图,校准曲线显示联合模型具有较好的一致性。结论:在预测TET病理分型中,基于所选临床特征及NECT影像组学特征的可视化列线图模型可能具有良好的临床应用前景。

基于CT图像纹理分析预测胸腺上皮性肿瘤Masaoka-Koga分期的研究

目的探讨CT图像纹理分析在预测胸腺上皮性肿瘤(TETs)Masaoka-Koga分期中的价值。方法回顾性分析经手术病理证实的114例TETs患者的CT图像,根据Masaoka-Koga分期将TETs分为早期(Ⅰ~Ⅱ期)与进展期(Ⅲ~Ⅳ期)。提取CT平扫及增强图像上肿瘤各期的纹理参数,对纹理参数进行降维后求得加权Rad-score值,使用受试者工作特征(ROC)曲线分析纹理特征的预测效能。结果114例TETs患者中包括男58例,女56例;早期61例,进展期53例。基于CT图像纹理分析,在鉴别早期和进展期TETs时CT平扫参数V_(14)(Kurtosis)、V_(462)(Correlation_angle90_offset9)、V_(481)(Sum Entropy)等参数具有统计学意义(均P<0.05),动脉期V_(16)(Histogram Energy)、V_(32)(Percentile70)、V_(481)(Sum Entropy)等参数具有统计学意义(均P<0.05);静脉期V_(148)(GLCM Entropy_offset3_SD)、V_(469)(Inertia_angle135_offset9)、V_(966)(LRE_offset9)等参数具有统计学意义(均P<0.001);Rad-score值在鉴别早期和进展期TETs方面:CT平扫、动脉期和静脉期的AUC值分别为0.692(0.595,0.789)、0.878(0.813,0.944)和0.685(0.603,0.767)。结论CT图像纹理分析在术前预测TETs的Masaoka-Koga分期中具有潜在价值,有助于对TETs患者进行个性化诊疗。