子宫内膜样腺癌组织中ROR1、ROR2表达变化与上皮间质转化及患者预后的关系

目的探讨子宫内膜样腺癌(EA)组织中酪氨酸激酶样孤儿受体(ROR)1、ROR2表达变化与上皮间质转化及患者预后的关系。方法选取162例接受子宫内膜癌根治术治疗的EA患者,收集手术切除的癌组织和癌旁组织,采用免疫组织化学法检测ROR1、ROR2及EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)。比较不同临床病理特征EA患者癌组织ROR1、ROR2阳性率,Spearman相关性分析癌组织中ROR1、ROR2表达与E-cadherin、Vimentin表达的相关性,Kaplan-Meier生存曲线分析ROR1、ROR2表达与EA患者5年总体生存率(OS)的关系,COX比例风险回归模型分析EA患者预后的影响因素。结果与癌旁组织相比,癌组织中ROR1、Vimentin阳性率较高,ROR2、E-cadherin阳性率较低(P均<0.05)。与FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、高中分化、无淋巴结转移患者比较,FIGO分期Ⅲ期、低分化、淋巴结转移患者癌组织ROR1阳性率升高,ROR2阳性率降低(P均<0.05)。ROR1阳性与阴性患者5年OS分别为72.13%(88/122)、90.00%(36/40)。癌组织ROR1与E-cadherin呈负相关,与Vimentin呈正相关(P均<0.05),ROR2与E-cadherin呈正相关,与Vimentin呈负相关(P均<0.05)。ROR1阳性患者5年OS低于阴性患者,ROR2阳性患者5年OS高于ROR2阴性患者(P均<0.05)。FIGO分期Ⅲ期、淋巴结转移、ROR1阳性是影响EA预后的独立危险因素,ROR2阳性则是保护因素(P均<0.05)。结论EA组织中ROR1表达升高、ROR2表达降低,二者可能通过促进EMT导致患者不良预后。

精囊腺混合性上皮间质肿瘤1例并文献复习

精囊腺混合性上皮间质肿瘤(mixed epithelial-stromal tumor,MEST)是一种十分罕见的精囊原发肿瘤,该肿瘤此前曾被称为“囊腺瘤”、“叶状肿瘤”“穆勒氏肉瘤样肿瘤”和“上皮-间质瘤”等[1]。该疾病的临床表现多种多样,常见的临床表现为下尿路症状、血精和腹痛,也可表现为血尿及耻骨上、会阴或腹股沟疼痛等。该疾病多为良性,手术切除后一般预后良好。本文报道1例原发性精囊腺MEST,运用达芬奇机器人辅助下腹腔镜切除.

孕激素及间质细胞培养液对原代培养内膜腺上皮HOXA11基因表达的影响

目的:探讨间质细胞是否参与了孕激素对子宫内膜腺上皮的调控,及其初步的作用机制。方法:将增生期子宫内膜间质细胞经激素处理后进行培养,提取培养液。用浓度为30%的提取培养液对腺上皮细胞进行原代培养,当细胞生长融合时,加入孕酮或孕雌激素培养4h、24h。提取细胞总RNA,用半定量RT-PCR方法检测腺上皮细胞HOXA11基因表达量。结果:当内膜腺上皮细胞中含有30%经孕激素处理的间质细胞培养液时,加入孕激素或孕、雌激素后其HOXA11基因,在培养4h时表达量有下降趋势;24h时,表达量下降明显;而用RU486预处理后再加入孕激素或雌孕激素,腺上皮细胞HOXA11基因表达量与对照组无差异;当上皮细胞中含有30%经RU486预处理后,再加入孕激素处理的间质细胞培养液时,孕激素或孕、雌激素对内膜腺上皮HOXA11表达的负调控作用在4h时消失;24h时,转为正调控(HOXA11基因表达量增加)。结论:孕激素对内膜腺上皮HOXA11基因的负调控作用需要问质细胞分泌的孕激素依赖因子的参与,而且由间质细胞和内膜腺上皮中的孕激素受体共同介导完成这一负调控作用。

直肠癌组织中YTHDF2、lncRNA TUSC7表达与上皮间质转化的关系及预后意义

目的研究直肠癌组织中YTH结构域N6-甲基腺嘌呤RNA结合蛋白2(YTHDF2)、长链非编码RNA抑癌候选基因7(lncRNA TUSC7)表达与上皮间质转化(EMT)的关系及临床预后意义。方法选取该院自2018年5月至2020年5月诊治的98例直肠癌患者。采用实时荧光定量PCR检测直肠癌组织和癌旁组织中YTHDF2、lncRNA TUSC7表达及EMT相关指标β-连环素(β-catenin)、E-钙黏蛋白(E-cad)、N-钙黏蛋白(N-cad)mRNA的表达。采用Pearson法分析YTHDF2 mRNA、lncRNA TUSC7与EMT相关指标的相关性。采用Kaplan-Meier曲线分析YTHDF2、lncRNA TUSC7表达对直肠癌无瘤生存预后的影响。采用多因素COX回归分析直肠癌无瘤生存预后的影响因素。结果直肠癌组织中YTHDF2、β-catenin、N-cad mRNA相对表达水平高于癌旁组织,而lncRNA TUSC7、E-cad mRNA相对表达水平低于癌旁组织(均P<0.05)。直肠癌组织中YTHDF2 mRNA与β-catenin、N-cad mRNA表达呈正相关(均P<0.05),与E-cad mRNA表达呈负相关(均P<0.05);lncRNA TUSC7与β-catenin、N-cad mRNA表达呈负相关(均P<0.05),与E-cad mRNA表达呈正相关(均P<0.05)。直肠癌组织中YTHDF2 mRNA与lncRNA TUSC7表达呈负相关(P<0.05)。直肠癌组织中YTHDF2 mRNA、lncRNA TUSC7与TNM分期Ⅲ期、肿瘤分化程度及淋巴结转移有关(均P<0.05)。YTHDF2高、低表达组3年无瘤生存率分别为59.57%(28/47)、88.24%(45/51)。lncRNA TUSC7高、低表达组3年无瘤生存率分别为88.00%(44/50)、60.42%(29/48)。YTHDF2高表达组3年累积无瘤生存率低于YTHDF2低表达组(Log Rankχ^(2)=11.370,P=0.001)。lncRNA TUSC7高表达组3年累积无瘤生存率高于lncRNA TUSC7低表达组(Log Rankχ^(2)=11.880,P=0.001)。TNM分期Ⅲ期、低分化程度、合并淋巴结转移、YTHDF2高表达、lncRNA TUSC7低表达是直肠癌患者无瘤生存预后的独立危险因素(均P<0.05)。结论直肠癌组织中YTHDF2表达上调,lncRNA TUSC7表达下调,二者与不良临床病理特征及EMT有关,是新的评估直肠癌患者预后的标志物。

养血安胎方调节自噬改善复发性自然流产小鼠子宫内膜上皮细胞间质转化及蜕膜化的作用研究

目的探讨养血安胎方调节自噬改善复发性自然流产(RSA)小鼠子宫内膜上皮细胞-间质转化(EMT)及蜕膜化的作用。方法构建肾虚血瘀型RSA小鼠以及正常妊娠小鼠,正常妊娠小鼠分别腹腔注射2 mg·kg^(-1)雷帕霉素(Rapa)溶液或15 mg·kg^(-1)3-甲基腺嘌呤(3-MA)溶液进行干预;另设置相同方法处理的RSA小鼠、Rapa及3-MA干预的小鼠组,并同时灌胃给药浓度为28.08 g·kg^(-1)的养血安胎溶液进行干预,收集小鼠子宫内膜。通过Western blot法测定小鼠子宫内膜EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、N-cadherin和Fibronectin的表达,以及蜕膜化相关蛋白BMP2、HOXA10、PRL和IGFBP1的表达。结果与正常妊娠组比较,RSA组小鼠子宫内膜中E-cadherin的蛋白表达显著增加,Vimentin、N-cadherin、Fibronectin、BMP2、HOXA10、PRL和IGFBP1的蛋白表达均显著降低;Rapa组小鼠子宫内膜中E-cadherin的蛋白表达显著增加,Vimentin、N-cadherin、Fibronectin、BMP2、HOXA10、PRL和IGFBP1的蛋白表达均显著降低;3-MA组小鼠子宫内膜中E-cadherin的蛋白表达显著降低,HOXA10的蛋白表达显著增加。与RSA组比较,RSA+养血安胎组小鼠子宫内膜中E-cadherin的蛋白表达显著降低,Vimentin、N-cadherin、Fibronectin、BMP2、HOXA10、PRL和IGFBP1的蛋白表达均显著增加。与Rapa组比较,Rapa+养血安胎组小鼠子宫内膜中E-cadherin的蛋白表达显著降低,Vimentin、N-cadherin、Fibronectin、BMP2、HOXA10、PRL和IGFBP1的蛋白表达均显著增加。结论养血安胎方能够抑制自噬,从而促进妊娠小鼠子宫内膜的EMT及蜕膜化过程,降低流产率。

HMGB1基因在子宫腺肌病上皮间质转化过程中的作用研究

目的分析HMGB1基因在子宫腺肌病上皮间质转化过程中的表达,并探讨其与β-catenin的相关性,以探究子宫腺肌病的发病机制,为该病的临床治疗提供新的理论基础.方法选取我院收治的行子宫切除术的子宫腺肌病患者8例,取其在位内膜组织样本为在位组,取其异位内膜组织样本为异位组,并以同期手术病理证实正常子宫内膜的子宫肌瘤患者为对照组,采用qRT-PCR检测HMGB1基因的表达水平;Westernblot法检测HMGB1、E-cadherin、Vimentin、β-catenin的蛋白表达水平,并分析表达的相关性.结果与对照组相比,在位组及异位组中HMGB1mRNA和蛋白、Vimentin蛋白、β-catenin蛋白的表达水平升高,E-cadherin蛋白表达水平降低(P<0.05);与在位组相比,异位组中表达HMGB1mRNA和蛋白、Vimentin蛋白的表达水平增加,E-cadherin蛋白表达水平下降(P<0.05);但β-catenin蛋白的表达与异位组和在位组比较,差异无统计学意义(P>0.05).在相关性分析中,子宫腺肌病在位组、异位组的HMGB1蛋白表达与E-cadherin呈负相关(P<0.05),与Vimentin、β-catenin呈正相关(P<0.05).结论HMGB1基因可促进子宫腺肌病上皮间质转化的发生,与激活Wnt/β-catenin信号通路相关.

Napsin A与上皮-间充质转化标志物在晚期肺腺癌EGFR-TKIs获得性耐药前后的表达及其相关性

目的近年来体外细胞实验证实,肺癌细胞发生上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)与表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)耐药密切相关,而Napsin A表达上调可逆转吉非替尼耐药的肺癌细胞中的EMT,恢复细胞对吉非替尼的敏感性。但Napsin A及EMT标志物与晚期肺腺癌患者EGFR-TKIs耐药之间的关系知之甚少。本研究旨在探讨晚期肺腺癌EGFR-TKIs获得性耐药前后Napsin A的表达变化及其与EMT标志物的相关性。方法收集一线接受EGFR-TKIs治疗且治疗前和获得性耐药后均有活体组织检查的晚期肺腺癌患者52例,采用免疫组织化学EnVision两步法检测Napsin A、上皮钙黏素(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达。结果Napsin A、E-cadherin和Vimentin在EGFR-TKIs治疗前、耐药后均可见异常表达,耐药后Napsin A和Vimentin异常表达率均高于治疗前(均P<0.05),异常表达均与国际肺癌研究协会分级呈正相关(P<0.01),而与敏感突变类型、继发性T790M突变均无显著相关性。Spearman相关分析显示:E-cadherin表达与Vimentin表达呈负相关(r=-0.300,P=0.002);Napsin A表达与E-cadherin表达呈正相关(r=0.328,P=0.001),与Vimentin表达呈负相关(r=-0.433,P<0.001)。Napsin A、E-cadherin正常表达组客观缓解率均高于原发或获得性异常表达组(均P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示:Napsin A、E-cadherin和Vimentin原发或获得性异常表达患者的无进展生存期较正常表达患者更短。结论Napsin A、E-cadherin和Vimentin可以作为预测EGFR突变的晚期肺腺癌EGFR-TKIs疗效的参考指标,Napsin A可能通过参与EMT过程影响EGFR-TKIs的敏感性。

宫颈癌组织中CSRP2BP mRNA,ESRRB mRNA和蛋白水平表达与上皮间质转化及临床预后相关性研究

目的研究宫颈癌组织中富含半胱氨酸蛋白2结合蛋白(cysteine rich protein 2 binding protein,CSRP2BP)mRNA,雌激素相关受体β(estrogen related receptorsβ,ERRB)mRNA和蛋白表达与上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)及临床预后的相关性。方法选择2018年3月~2020年3月延安市中医医院收治的106例宫颈癌患者。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测组织中CSRP2BP mRNA,ESRRB mRNA及EMT相关指标[E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad),N-钙黏蛋白(N-cadherin,N-cad),锌指转录因子(Snail family transcriptional repressor,Snail)]表达。采用免疫组织化学检测组织中CSRP2BP蛋白,ESRRB蛋白表达。Pearson相关分析CSRP2BP mRNA,ESRRB mRNA与EMT相关指标的相关性。采用Kaplan-Meier曲线和COX回归分析CSRP2BP mRNA,ESRRB mRNA表达对宫颈癌患者预后的影响。结果癌组织中CSRP2BP mRNA(3.14±0.52 vs 1.22±0.21)和蛋白阳性率(86.79%vs 9.43%),ESRRB mRNA(2.86±0.31 vs 1.06±0.20)和蛋白阳性率(92.45%vs 8.49%),N-cad mRNA(3.22±0.43vs 1.05±0.26),Snail mRNA(2.67±0.36 vs 0.69±0.17)表达高于癌旁组织,E-cad mRNA(0.84±0.17 vs 2.15±0.24)表达低于癌旁组织,差异具有统计学意义(t/χ^(2)=34.249,127.049;50.234,149.466;44.461,51.204,45.858,均P<0.001)。宫颈癌中CSRP2BP mRNA,ESRRB mRNA与N-cad mRNA,Snail mRNA呈正相关(r=0.663,0.731;0.726,0.715,均P<0.001),与E-cad mRNA呈负相关(r=-0.594,-0.669,均P<0.001)。FIGO分期ⅠB2~ⅡA,低分化程度及淋巴结转移宫颈癌患者癌组织中CSRP2BP mRNA(4.24±0.57,4.27±0.58,4.24±0.50),ESRRB mRNA(4.48±0.36,4.21±0.37,4.69±0.33)高于FIGO分期ⅠA~ⅠB1(2.60±0.44,2.06±0.24),中高分化程度(2.43±0.44,2.01±0.25)及无淋巴结转移(2.53±0.58,2.07±0.26)的患者,差异具有统计学意义(t=16.327,41.135;18.507,36.545;14.501,43.806,均P<0.001)。CSRP2BP mRNA高表达三年总生存率为66.00%(33/50),低于低表达组的89.29%(50/56);ESRRB mRNA高表达组三年总生存率为65.38%(34/52),低于低表达组的90.74%(49/54),差异具有统计学意义(Log-rankχ^(2)=5.401,11.400,P=0.020,0.001)。多因素Cox回归分析显示,CSRP2BP mRNA高表达(HR=1.327,95%CI:1.0970~1.605)、ESRRB mRNA高表达(HR=1.322,95%CI:1.108~1.577)、FIGO分期ⅠB2~ⅡA期(HR=1.423,95%CI:1.154~1.755)、淋巴结转移(HR=1.363,95%CI:1.095~1.698)、低分化程度(HR=1.297,95%CI:1.064~1.581)是影响宫颈癌患者预后的危险因素(均P<0.001)。结论宫颈癌患者CSRP2BP mRNA,ESRRB mRNA表达升高,两者与EMT相关指标及不良临床病理特征有关,是新的预后评估的肿瘤标志物。

慢病毒介导雌激素受体β在乳腺癌细胞中的高表达抑制上皮细胞间质转化相关基因的表达

目的:建立稳定高表达雌激素受体β(ERβ)蛋白表达的乳腺癌ZR75-1细胞株,检测其对上皮细胞间质转化(EMT)相关基因的影响。方法:将编码人ERβ的cDNA序列插入慢病毒表达载体pCDH-EF1-MCS-T2A-Puro,将其与慢病毒包装辅助质粒共转染293T细胞后收集病毒上清,感染乳腺癌ZR75-1细胞,经嘌呤霉素筛选后获得稳定高表达含Myc标签的人ERβ的混合细胞集落,以及作为对照组整合有对照慢病毒载体pCDH-EF1-MCS-T2A-Puro的混合细胞集落,提取细胞蛋白,用Myc抗体检测Myc-ERβ融合蛋白的表达,同时检测EMT相关基因Snail、E-Cadherin、N-Cadherin的表达水平和GSK-3β的磷酸化水平。结果:建立了稳定高表达Myc-ERβ融合蛋白的乳腺癌细胞株,和对照组相比,Myc-ERβ高表达抑制EMT相关蛋白N-cadherin和Snail的表达,增强E-cadherin分子的表达,抑制GSK-3β磷酸化水平。结论:建立了Myc-ERβ高表达的乳腺癌细胞株,发现ERβ高表达抑制EMT相关分子的表达,为深入研究分子在乳腺癌中调控的机制奠定了基础。

LncRNA UNC5B-AS1通过调控Toll样受体信号通路对宫颈癌细胞增殖及上皮间质转化的影响

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)UNC5B-AS1对宫颈癌细胞增殖及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法利用GEO和TCGA数据库进行差异表达分析,采用qRT-PCR在正常与癌变宫颈组织中进行验证,筛选出差异表达lncRNA UNC5B-AS1。在宫颈癌细胞株中转染lncRNA UNC5B-AS1干扰和过表达质粒,通过平板克隆、CCK-8、EdU实验检测lncRNA UNC5B-AS1对宫颈癌细胞增殖的影响;通过Transwell实验检测其对宫颈癌细胞迁移、侵袭能力的影响;通过Western blot检测EMT相关蛋白E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin的表达水平;通过转录组测序得到lncRNA UNC5B-AS1调控的信号通路,验证其相关基因的表达水平。结果RNA微阵列和生物信息学分析显示,lncRNA UNC5B-AS1在宫颈癌中的表达水平明显高于正常宫颈组织,并与患者的总生存时间相关。与阴性对照组相比,敲低lncRNA UNC5B-AS1可降低宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭,而过表达则促进宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭。Western blot显示,lncRNA UNC5B-AS1能调控宫颈癌细胞EMT。转录组测序表明lncRNA UNC5B-AS1能调控Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)信号通路。qRT-PCR及Western blot结果提示,敲低及过表达lncRNA UNC5B-AS1组中TLR相关基因IL6、TICAM2表达水平明显改变(P<0.05)。结论LncRNA UNC5B-AS1在宫颈癌中高表达,高表达lncRNA UNC5B-AS1可通过增强TLR信号通路活性,促进宫颈癌细胞增殖及EMT能力。

肝细胞肝癌中DDX24、TRIP12表达与上皮间质转化及临床预后的关系

目的探讨肝细胞肝癌(HCC)中DEAD盒解旋酶24(DDX24)、甲状腺激素受体相互作用因子12(TRIP12)表达,分析两者与上皮间质转化(EMT)及临床预后的关系。方法回顾性选取2019年2月—2021年1月中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院肝胆外科手术治疗的HCC患者96例。免疫组化检测癌组织和癌旁组织DDX24、TRIP12蛋白表达;采用实时荧光定量PCR检测DDX24、TRIP12和EMT指标[E-钙黏素(E-cad)、N-钙黏素(N-cad)及TWIST]表达;Pearson相关分析DDX24 mRNA、TRIP12 mRNA和EMT指标的相关性;绘制Kaplan-Meier曲线,Log-Rank检验分析DDX24 mRNA、TRIP12 mRNA高表达组和低表达组HCC患者预后的差异;多因素Cox比例风险模型分析影响HCC患者死亡预后的独立因素。结果HCC癌组织中DDX24、TRIP12阳性率显著高于癌旁组织(χ^(2)/P=109.714/<0.001,108.755/<0.001);与癌旁组织比较,HCC癌组织中DDX24、TRIP12、N-cad、TWIST mRNA表达较高,E-cad mRNA表达较低,差异均有统计学意义(t/P=35.810/<0.001,48.036/<0.001,25.015/<0.001,48.482/<0.001,38.069/<0.001)。HCC癌组织中DDX24 mRNA与TRIP12 mRNA表达呈正相关(r=0.701,P<0.001);DDX24 mRNA、TRIP12 mRNA均与N-cad mRNA、TWIST mRNA呈正相关,与E-cad mRNA呈负相关(r/P=0.723/<0.001,0.661/<0.001,0.706/<0.001,0.745/<0.001,-0.694/<0.001,-0.609/<0.001)。低分化程度、CNLC分期Ⅱ~Ⅲ期和有血管侵犯HCC患者癌组织中DDX24、TRIP12 mRNA高于高中分化程度、CNLC分期Ⅰ期和无血管侵犯者(DDX24:t/P=10.348/<0.001,18.474/<0.001,6.302/<0.001;TRIP12:t/P=25.661/<0.001,36.396/<0.001,14.928/<0.001)。DDX24 mRNA高表达组和低表达组3年总生存率分别为39.13%(18/46)、64.00%(32/50),2组生存曲线总体比较,差异具有统计学意义(Log rankχ^(2)=7.491,P=0.006);TRIP12 mRNA高表达组和低表达组3年总生存率分别为36.17%(17/47)、67.35%(33/49),2组生存曲线总体比较,差异有统计学意义(Log rankχ^(2)=8.146,P=0.004)。CNLC分期Ⅱ~Ⅲ期、低分化程度、血管侵犯、DDX24 mRNA高表达、TRIP12 mRNA高表达是影响HCC患者死亡预后的危险因素[HR(95%CI)=1.611(1.175~2.209),1.768(1.238~2.526),1.464(1.089~1.968),1.859(1.330~2.599),1.775(1.275~2.473)]。结论HCC癌组织中DDX24、TRIP12表达上调,与N-cad、TWIST呈正相关,与E-cad呈负相关,DDX24、TRIP12可能通过促进HCC肿瘤EMT的发生,促进HCC肿瘤的恶性进展,两者是影响HCC患者死亡预后的独立危险因素。

肾混合性上皮间质肿瘤1例并文献复习

肾混合性上皮间质肿瘤(mixed epithelial and stromal tumor of the kidney,MESTK)是一种罕见的肾脏肿瘤,其特点是囊性扩张且不等量增生的腺上皮细胞与排列方式各异的梭形细胞混合。现报告1例24岁女性MESTK患者,其无明显临床表现,由体检发现右肾占位,给予右肾部分切除术后恢复良好。

肿瘤坏死因子受体相关因子6高表达对子宫内膜癌细胞侵袭、迁移及上皮间质转化的影响

目的:探究肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)高表达对子宫内膜癌细胞侵袭、迁移及上皮间质转化的影响。方法:将Ishikawa细胞随机分为三组:对照组(子宫内膜癌细胞Ishikawa未转染)、NC组(子宫内膜癌细胞Ishikawa转染空载质粒)和TRAF6高表达组(子宫内膜癌细胞Ishikawa转染TRAF6过表达质粒);实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(WB)检测TRAF6 mRNA以及蛋白表达情况;Transwell实验、划痕实验以及裸鼠移植瘤实验检测细胞侵袭、迁移能力;WB检测上皮间质转化标志蛋白E型钙黏蛋白(E-cadherin)、闭合蛋白(Occludin)、N型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达水平。结果:相较于人子宫内膜上皮细胞,子宫内膜癌细胞Ishikawa中TRAF6 mRNA和蛋白表达显著降低(均P<0.05)。相较于对照组和NC组,TRAF6高表达组的TRAF6 mRNA水平和蛋白表达显著升高,细胞侵袭、迁移能力和Vimentin、N-cadherin蛋白表达显著降低,Occludin、E-cadherin蛋白表达显著升高(均P<0.05);对照组和NC组上述指标比较差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:上调子宫内膜癌细胞中TRAF6的表达,可抑制上皮间质转化过程,减弱子宫内膜癌细胞的侵袭和迁移能力,TRAF6在子宫内膜的发生发展中具有重要的调节作用。

miR-301a靶向雌激素受体信号通路对乳腺癌细胞侵袭及上皮-间质转化的影响

目的通过检测乳腺癌细胞中微小RNA-301a(miR-301a)、雌激素受体α(ERα)表达情况,探讨miR-301a调控乳腺癌细胞侵袭作用机制及对上皮-间质转化(EMT)的影响。方法体外培养人乳腺癌细系MCF7,将细胞分为control组(不做任何处理,正常培养)、miR-301a mimics组[转染miR-301a激动剂(miR-301a mimics)]、miR-301a inhibitiors组[转染miR-301a抑制剂(miR-301a inhibitiors)]、miR-301a MNC组[转染miR-301a激动剂阴性对照试剂(miR-301a MNC)]、miR-301a INC组[转染miR-301a抑制剂阴性对照试剂(miR-301a INC)]。用Transwell小室检测细胞侵袭情况;双荧光素酶报告实验验证miR-301a与ERα的靶向关系;荧光实时定量PCR(qRT-PCR)法检测各组miR-301a mRNA、ERαmRNA表达水平;免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞ERα、孕酮受体(PR)、乳腺癌雌激素调控蛋白(GREB1)及EMT标志蛋白N-粘钙蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达水平。结果与control组相比,miR-301a mimics组侵袭细胞数、miR-301a、N-cadherin和Vimentin蛋白表达均升高(P<0.05),ERαmiRNA及蛋白、PR、GREB1表达均降低(P<0.05);miR-301a inhibitiors组侵袭细胞数、miR-301a、N-cadherin和Vimentin蛋白表达均降低(P<0.05),ERαmiRNA及蛋白、PR、GREB1表达水平均升高(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测显示,与miR-301a NC+ERα-3’UTR-WT组比较,miR-301a mimics+ERα-3’UTR-WT组荧光素酶活性降低(P<0.05)。结论miR-301a过表达可抑制ERα及相关通路蛋白表达,促进癌细胞侵袭和EMT,抑制miR-301a表达,可上调ERα及相关通路表达,抑制癌细胞侵袭和EMT。

THBS2在肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞迁移、侵袭和上皮间质转化的影响

目的:研究血小板反应蛋白2(thrombospondin 2,THBS2)在肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞H1299和A549迁移能力、侵袭能力、上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响,并探究分子机制。方法:运用TIMER和GEPIA数据库分析THBS2 mRNA在泛肿瘤和肺腺癌组织中的表达,利用UALCAN数据库分析THBS2 mRNA在Ⅰ-Ⅳ期肺腺癌组织中的表达差异,通过HPA数据库检测THBS2蛋白在肺腺癌组织中的表达情况。通过免疫印迹实验(Western blot)检测THBS2在人正常支气管上皮细胞(BEAS-2B)和肺腺癌细胞(H1299、A549)中的表达情况。应用质粒转染技术在肺腺癌细胞H1299和A549中分别过表达和敲低THBS2。细胞划痕实验和侵袭实验(Transwell)检测细胞迁移和侵袭能力。Western blot验证THBS2过表达和敲低效率,同时检测EMT相关蛋白和MMP2的表达水平。结果:TIMER数据库与GEPIA数据库检索结果显示THBS2 mRNA在肺腺癌组织中高表达(P<0.001)。UALCAN数据库分析证明,与正常肺组织相比,THBS2 mRNA在Ⅰ-Ⅳ期肺腺癌组织中均显著表达(P<0.001)。HPA数据库结果显示,THBS2蛋白在肺腺癌组织中呈现中高等强度表达。细胞划痕实验、Transwell实验和Western blot结果表明,THBS2在人正常支气管上皮细胞和肺腺癌细胞中的表达有显著差异(P<0.01);过表达THBS2可增加肺腺癌细胞H1299和A549迁移与侵袭能力(P<0.01),EMT相关蛋白E-cadherin表达水平减少,而N-cadherin和Vimentin表达水平增加(P<0.01);相反的,敲低THBS2可抑制肺腺癌细胞H1299和A549迁移与侵袭能力(P<0.01),EMT相关蛋白E-cadherin表达水平增加,而N-cadherin和Vimentin表达水平减少(P<0.01)。结论:THBS2在肺腺癌组织中高表达;THBS2在肺腺癌细胞(H1299、A549)中的表达均显著高于人正常支气管上皮细胞(BEAS-2B);THBS2在肺腺癌细胞H1299和A549中的过表达和敲低影响迁移、侵袭和EMT的过程,可作为肺腺癌治疗的新型潜在靶点。

上皮钙黏蛋白、雌激素受体α和孕激素受体在子宫内膜样腺癌中的表达及意义

目的探讨上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、雌激素受体α(ERα)和孕激素受体(PR)在子宫内膜样腺癌(EA)组织中的表达及临床意义。方法应用EnVision免疫组化法检测55例EA组织、28例不典型增生子宫内膜组织及18例增生性子宫内膜组织中E-cadherin、ERα和PR蛋白表达。结合临床特征分析3种蛋白间表达的关系。结果 (1)E-cadherin在增生性子宫内膜、不典型增生子宫内膜和EA组织中的异常表达率分别为5.6%(1/18)、35.7%(10/28)和60.0%(35/55),组织间差异有统计学意义(P=0.000);E-cadherin异常表达在不典型增生内膜组织显著高于在增生性子宫内膜组织中(P=0.047),而相对于EA组织则差异无统计学意义(P=0.290)。ERα在上述组织中的表达率依次为72.2%(13/18)、53.6%(15/28)和45.5%(25/55),表达强度逐渐减弱,组织间差异有统计学意义(P=0.015);PR表达率分别为72.2%(13/18)、67.9%(19/28)和72.7%(40/55),差异无统计学意义(P=0.492)。ERα在不典型增生内膜组织中的阳性表达率显著低于增生内膜组织(P=0.029),而与EA组织相比差异无统计学意义(P=0.579)。(2)EA组织中,E-cadherin表达与肿瘤浸润肌层相关(P=0.023),与患者月经状态、临床分期、组织学分级无关(P>0.05);ERα、PR表达与肿瘤组织学分级相关(P=0.003,P=0.035),与患者月经状态、肌层浸润及临床分期无关(P>0.05)。(3)EA组织中,E-cadherin与ERα的表达呈正相关(r=0.299,P=0.028),与PR表达无相关性(r=-0.046,P=0.737)。结论 E-cadherin异常和ERα蛋白减少可能与EA的发生、发展有关。在EA的发生发展过程中两者可能具有某种协同作用。检测Ecadherin与ERα蛋白对EA的临床诊断及预后评估有一定参考价值。

ALYREF对肺腺癌细胞增殖、迁移和上皮-间质转化的影响

目的探讨ALYREF在肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞增殖、迁移和上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法利用TCGA数据库分析ALYREF在肺腺癌中的表达及其与预后的关系;应用免疫组化验证肺腺癌及其癌旁组织中ALYREF的表达水平。构建沉默ALYREF的A549和H1299稳转细胞株;通过RTCA和克隆形成实验检测细胞增殖,采用Transwell实验评估细胞迁移,运用Western blot检测增殖、迁移及EMT相关蛋白的表达水平。RNA-seq测序沉默ALYREF的A549细胞及对照细胞,进行GO/KEGG通路富集分析,分析ALYREF可能参与的功能通路,并通过功能回复实验进行验证。结果TCGA数据库分析结果显示:ALYREF在肺腺癌组织中显著高表达(P<0.001);高表达ALYREF患者的总生存期(overall survival,OS)更短(P<0.05)。沉默ALYREF可以抑制A549和H1299细胞的增殖、迁移和EMT进程。RNA-seq测序显示:差异表达基因在TGF-β通路富集最明显;Western blot检测显示沉默ALYREF可抑制肺腺癌细胞中TGF-β的表达;功能回复实验显示激活TGF-β可以逆转沉默ALYREF引起的细胞迁移能力下降。结论ALYREF在肺腺癌组织中高表达,且与不良预后相关,可能通过TGF-β通路促进肺腺癌细胞的增殖、迁移和EMT。

表皮生长因子受体在甲状腺乳头状癌中的表达及其与上皮-间质转化的关系

目的:研究表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)在甲状腺乳头状癌中的表达及其与上皮-间质转化的关系。方法:采用免疫组织化学EnVision法检测EGFR、上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)在44例甲状腺乳头状癌组织、癌旁组织中的表达,并分析其与甲状腺乳头状癌临床病理参数的关系及EGFR与E-cadherin和vim-entin的相关性。结果:44例甲状腺乳头状癌中,EGFR、E-cadherin和vimentin阳性表达率分别为68.2%(30/44)、79.5%(35/44)和63.6%(28/44),与癌旁组织[6.8%(3/44)、4.5%(2/44)和9.1%(4/44)]比较,差异有统计学意义(χ2=35.35,P=0.00;χ2=50.78,P=0.00;χ2=28.59,P=0.00)。甲状腺乳头状癌组织中EGFR表达与E-cadherin呈负相关(r=-0.306,P=0.043),与vimentin呈正相关(r=0.595,P=0.000)。在伴淋巴结转移患者中和不伴淋巴结转移患者中EGFR、E-cadherin和vimentin表达差异均有统计学意义(χ2分别为7.79、5.81及4.32,P均<0.05)。结论:甲状腺乳头状癌中EG-FR表达升高伴随E-cadherin下调和vimentin上调,它们的变化可能与上皮-间质转化相关,并可能在甲状腺乳头状癌的淋巴结转移中起重要作用。

雌、孕激素受体和基质金属蛋白酶-2在子宫腺肌症中的表达及意义

目的探讨雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在子宫腺肌病(UAM)中的表达和意义。方法应用免疫组化二步法检测35例UAM患者的异位内膜、在位内膜及38例非UAM患者正常内膜中ER、PR和MMP-2的表达情况,通过统计学方法行对照研究。结果 (1)UAM异位内膜组织中ER、PR的表达较对照正常内膜低(P<0.05);(2)UAM异位内膜中MMP-2表达水平显著高于正常内膜组(P<0.01);(3)MMP-2蛋白在UAM异位内膜中表达有周期性变化,增生期高于分泌期(P<0.05),而在在位内膜及对照内膜中表达无明显周期性变化。结论 ER表达并非子宫腺肌病的主要致病因素;MMP-2在异位内膜的高表达可能使异位内膜具有更高的侵袭性,并且在增生期表达活跃。

上皮间质转化介导的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂耐药机制及中医药治疗进展

肺癌是全世界肿瘤患者死亡的主要原因^([1])。约85%的肺癌患者为非小细胞肺癌(NSCLC),其中表皮生长因子突变率为40%~80%^([2])。目前表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)治疗已成为EGFR突变的NSCLC患者的一线治疗方法,但大多数患者会发生进展,这极大限制EGFR TKIs的获益^([3])。