基于嘌呤配体P2X门控离子通道型受体7的资生肾气丸镇痛机制研究

目的:探索资生肾气丸对醋酸致小鼠扭体模型的镇痛作用。方法:将42只小鼠随机分为7组,分别给予相应药液灌胃,末次灌胃1 h后造模,建立醋酸致小鼠扭体模型。观察小鼠扭体次数,计算其扭体抑制率,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组小鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)、前列腺素E 2(PGE 2)、神经生长因子(NGF)含量,采用实时PCR(RT-PCR)检测嘌呤配体P2X门控离子通道型受体7(P2X7R)mRNA、Nod样受体蛋白3(NLRP3)mRNA、NIMA相关激酶7(NEK7)mRNA的表达情况。结果:与模型组比较,随着时间的增加,资生肾气丸低剂量、中剂量、高剂量均可抑制小鼠扭体反应,降低扭体次数,增加小鼠扭体抑制率,降低小鼠血清中IL-1β、PGE_(2)、NGF的含量,降低P2X7RmRNA、NLRP3mRNA、NEK7mRNA的表达以抑制疼痛反应,以高剂量效果最优(P<0.05),与吲哚美辛、痛风舒片疗效相近。结论:资生肾气丸高剂量对小鼠血清疼痛因子的降低效果显著,其机制可能与嘌呤配体P2X门控离子通道型受体7信号通路有关。

肺炎支原体肺炎患儿血清腺嘌呤核苷酸离子通道型7、维生素D表达水平与疾病严重程度的关系

目的探讨肺炎支原体肺炎(Mycoplasma pneumoniae pneumonia,MPP)患儿血清腺嘌呤核苷酸离子通道型7(adenine nucleotideionchanneltype7,P2X7)、维生素D表达水平及其与疾病严重程度的关系。方法选取2015年7月至2017年5月于河北省秦皇岛市妇幼保健院就诊的MPP患儿共136例,按照病情严重程度分为严重组(52例)和非严重组(84例)。选择同期来院体检的健康儿童50例作为对照组。比较三组患儿血清P2X7、25-羟基维生素D3、炎性因子和免疫球蛋白水平,分析其与MPP严重程度的相关性。结果严重组患儿血清P2X7、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1beta,IL-1β)水平显著高于非严重组和对照组(P<0.05),而25-羟基维生素D3、IgA、IgG水平显著低于非严重组和对照组(P<0.05)。MPP患儿P2X7与TNF-α、IL-1β正相关,25-羟基维生素D3与IgA正相关,而与IgG负相关(P<0.05)。P2X7、25-羟基维生素D3、TNF-α、IL-1β、IgA、IgG均为严重MPP的独立影响因素(P<0.05)。结论血清P2X7、维生素D表达水平与MPP存在显著相关性,高P2X7水平以及低25-羟基维生素D3水平预示着更严重的MPP。

甘珀酸抑制eATP-P2X7R-NLRP3信号通路减轻慢性胰腺炎纤维化的实验研究

目的探讨细胞外ATP(eATP)-P2X7R-NLRP3信号通路在慢性胰腺炎(CP)胰腺纤维化中的作用以及ATP抑制剂甘珀酸(CBX)对CP的治疗作用。方法将6周龄雄性C57BL/6小鼠随机均分为5组:正常组,模型组,CBX低、中、高剂量组(分别为25、50、100 mg/kg)。造模结束后,CBX各剂量组小鼠分别腹腔注射相应剂量的药物。末次给药24 h后将小鼠脱颈处死。HE染色评估胰腺组织病理学改变;ATP化学发光法测定小鼠胰腺组织eATP水平;免疫荧光染色检测P2X7R、NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)蛋白表达;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qPCR)检测P2X7R、NLRP3、Caspase-1、缝隙连接蛋白(PAN-1)mRNA的表达。结果HE染色,光镜下可见正常组小鼠胰腺细胞分布紧密,排列规则,无纤维化及炎症细胞浸润。模型组细胞间隙增宽、腺泡萎缩、炎症细胞浸润且有大量胶原纤维生成,组织学评分较正常组显著升高(P<0.01);与模型组相比,CBX中、高剂量组炎症细胞浸润及胶原纤维生成均减少,组织学评分降低。模型组小鼠造模后eATP水平较正常组显著升高(P<0.01),CBX中、高剂量组给药2周后,胰腺组织eATP水平均低于模型组。免疫荧光染色法和qPCR检测均显示,与正常组相比,模型组P2X7R、NLRP3、Caspase-1蛋白和mRNA表达升高(P<0.01);与模型组相比,CBX中、高剂量组表达均下调(P<0.05)。此外,qPCR检测结果还显示,模型组小鼠PAN-1 mRNA表达较正常组显著上调;与模型组相比,CBX中、高剂量组表达均下调(P<0.01)。结论CP病程中eATP水平显著增加并激活P2X7R,促进NLRP3炎性体组装,加重胰腺纤维化,CBX可下调P2X7R、NLRP3、Caspase-1,减轻胰腺炎症损伤及纤维化,从而发挥治疗作用。

嘌呤能离子通道型受体7及其在周围神经再生中的作用

在周围神经系统的神经节内,神经元胞体被周围的卫星胶质细胞包裹形成神经结构功能单元,而嘌呤能离子通道型受体7(P2X7R)是卫星胶质细胞膜上的一个腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)门控的非选择性离子通道,有研究表明,P2X7R可促进细胞增殖和促进神经轴突生长,也有研究报道,其被激活后可导致环氧化酶2(COX-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)等炎症介质的释放,介导细胞的损伤,因此P2X7R的功能尚存争议。本文就P2X7R的结构、功能以及在周围神经系统中作用的研究方法做一简单综述,为研究P2X7R在神经再生中的具体功能提供方法学支持。

P2X7R拮抗剂对小鼠慢性胰腺炎的作用及机制研究

目的探讨嘌呤能P2X7受体(P2X7R)拮抗剂——氧化三磷酸腺苷(OxATP)和亮蓝G(BBG)在抑制下游靶蛋白——核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)炎性体活化和慢性胰腺炎(CP)胰腺纤维化进程中的作用及可能机制。方法 40只C57BL/6小鼠随机均分为正常对照组、CP模型组、Ox ATP组和BBG组。除正常对照组腹腔注射与处理组等体积的生理盐水外,其余组均通过腹腔注射雨蛙素法制作CP小鼠模型(6周)。造模结束后,CP模型组、Ox ATP组和BBG组分别予以腹腔注射生理盐水、Ox ATP(20μL,300μmol/L)和BBG(20μL,10μmol/L)处理,连续注射2周。然后处死各组小鼠并取胰腺组织,行病理学检查,以HE染色对胰腺病理组织学(炎性细胞浸润、腺泡萎缩及纤维化程度)进行评分,天狼星红染色和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组化染色分别对胰腺纤维化程度进行评估;免疫组化法检测胰腺P2X7R、NLRP3和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)中的累积光密度(IOD)值。结果与正常对照组比,CP模型组炎症损伤组织学评分增加,胰腺纤维化程度显著增加,P2X7R、NLRP3和Caspase-1免疫组化IOD值显著升高(P<0.05);与CP模型组相比,Ox ATP和BBG组炎症损伤组织学评分降低,HE染色纤维化评分、天狼星红染色和α-SMA免疫组化染色均显著减轻(P<0.05),胰腺P2X7R、NLRP3和Caspase-1 IOD值均明显降低(P<0.05)。结论 P2X7R拮抗剂Ox ATP和BBG能够显著减轻CP小鼠模型的慢性炎症和纤维化程度,阻断P2X7R-NLRP3炎性体信号通路,这有望成为治疗CP及其纤维化进程的一种潜在新策略。

脑出血病人血清P2X7R水平与脑水肿程度及认知功能相关性研究

目的 检测脑出血病人血清胞膜上嘌呤配体P2X门控离子通道型受体7(P2X7R)水平以及脑水肿程度,并分析二者与脑出血病人认知功能障碍的相关性。方法 前瞻性选取2019年7月~2021年7月本院收治的115例脑出血病人为研究组,另取同期体检健康者90例为健康对照组。检测血清P2X7R水平以及脑水肿体积;采用Pearson分析血清P2X7R水平与脑水肿体积的相关性;根据病人是否出现认知功能障碍分为无认知功能障碍组(78例)和认知功能障碍组(37例),多因素Logistic回归分析脑出血病人认知功能障碍的影响因素,绘制血清P2X7R水平与脑水肿体积对脑出血病人认知功能评估的ROC曲线。结果 研究组病人发病第1天时血清P2X7R水平高于健康对照组(P<0.05),脑出血病人血清P2X7R水平、脑水肿体积在1~5天出现逐渐升高的趋势,在第5天达到峰值然后降低(P<0.05);脑出血病人发病第1、3、5、7天血清P2X7R水平与脑水肿体积均呈正相关(r=0.712、0.583、0.589、0.472,P<0.05);认知功能障碍组血清P2X7R水平、脑水肿体积均高于无认知功能障碍组(P<0.05);血清P2X7R水平、脑水肿体积是影响脑出血病人认知功能的危险因素(P<0.05);血清P2X7R水平、脑水肿体积单独及联合预测病人认知功能障碍的曲线下面积分别是0.763、0.750和0.829。结论 脑出血病人血清P2X7R水平升高,脑水肿体积增大,二者呈正相关,联合检测可预测病人认知功能障碍的发生。

腺嘌呤核苷三磷酸-嘌呤受体P2X配体门控离子通道7-白细胞介素-1β通路参与痛风性关节炎发病的初步研究

目的 探讨腺嘌呤核苷三磷酸-嘌呤受体P2X配体门控离子通道7-IL-β（ATP-P2X7R-IL-1β）通路在调控痛风性关节炎发病中的作用.方法 分离痛风与高尿酸血症患者外周血白细胞,分别用尿酸钠盐（MSU）和MSU＋ATP（5＇-三磷酸腺苷二钠盐水合物）刺激细胞培养,ELISA检测培养上清液中IL-1β浓度;流式细胞术检测外周血CD14＋P2X7R＋细胞.统计学处理采用t检验、非参数检验、Pearson相关分析.结果 ①单独MSU刺激时,痛风和高尿酸血症患者细胞培养液中IL-1β 的浓度[（50.9±1.5）pg/ml,（6.5±7.1）pg/ml]差异无统计学意义（Z=-1.088,P＞0.05）;用MSU＋ATP共同刺激白细胞时,痛风患者细胞培养液中 IL-1β 的浓度[（148±218） pg/ml]显著高于高尿酸血症患者[（24 ±39） pg/ml]（Z=-2.177,P＜0.05）.②高尿酸血症患者中,MSU刺激组[（6±7） pg/ml]和MSU＋ATP共同刺激组[（24±39） pg/ml]细胞培养液 中 IL-1β浓度差异无统计学意义（Z=-1.514,P＞0.05）;痛风患者中MSU＋ATP共同刺激组IL-1β浓度[（148± 218） pg/ml],显著高于MSU刺激组[（50.9±1.5） pg/ml],差异有统计学意义（Z=-2.704,P＜0.05）.③痛风患者外周血中CD14＋P2X7R＋细胞的百分比显著高于高尿酸血症患者[（1.6±0.5）％,（1.0±0.5）％],差异有统计学意义（t=-3.567,P＜0.05）.④痛风和高尿酸血症患者CD14＋P2X7R＋细胞的百分比与细胞培养液IL-1β浓度相关性均无统计学意义（r=-0.504,P＞0.05;r=-0.379,P＞0.05）.结论 ATP参与了痛风的发病,可能是引起急性痛风性关节炎发病的重要信号;其受体P2X7R的功能状态可能是决定痛风能否发病的重要因素.

脑内P2X7受体研究进展

三磷酸腺苷（ATP）是细胞供能和储能的物质，在研究中发现它还是中枢神经系统的一种重要神经递质。1970年Burnstock G证实ATP是非胆碱能和非肾上腺素能神经释放的神经递质，正式提出了神经元细胞膜表面存在嘌呤受体。1985年他将ATP结合的受体命名为嘌呤能受体，并将其分为P1（腺苷）、P2（腺嘌呤核苷酸）两大类受体。

P2X7R/NLRP3信号通路在酒精性肝损伤中的作用

目的探讨嘌呤P2X7R及其介导的NLRP3炎性体信号通路在酒精诱导的肝损伤中的作用。方法采用NIAAA法建立小鼠急性酒精性肝损伤模型,将30只♂C57BL/6小鼠随机分为3组(n=10):对照组、模型组、P2X7特异性阻断剂A438079干预组,最后1周,分组进行以下处理,对照组和模型组:给予等剂量的生理盐水腹腔注射(每只约0.2 mL),每日1次;A438079组:根据小鼠体质量,腹腔注射200μmol·kg^(-1)的A438079(按7 g·L^(-1)配制A438079,每只约0.2mL),每日1次。最后1天清晨给予单次31.5%酒精溶液灌胃,剂量为10 mL·kg^(-1)。9 h后小鼠眼眶取血,测定谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、胆固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)。HE染色观察肝脏病理变化;免疫组化方法检测肝组织中P2X7R的表达;Western blot法检测肝组织中的P2X7、NLRP3、ASC、IL-1β、IL-18水平。结果与对照组相比,模型组ALT、AST、TG、TCHO含量明显增强,且肝组织损伤明显;与模型组相比,A438079组ALT、AST、TG、TCHO含量明显降低。与对照组相比,模型组P2X7、NLRP3、ASC、IL-1β、IL-18的表达明显升高;与模型组相比,A438079组P2X7、NLRP3、ASC、IL-1β、IL-18的表达水平明显降低。结论酒精诱导的肝损伤可能与P2X7R-NLRP3信号通路有关。

血清铁蛋白、P2X7R、HSP70在痛风患者中的表达及其临床价值

目的分析血清铁蛋白(SF)、胞膜上嘌呤配体P2X门控离子通道型受体7(P2X7R)、热休克蛋白70(HSP70)在痛风患者中的表达及其临床价值。方法回顾性选取2018年1月至2020年1月十堰市太和医院收治的痛风患者83例,将其纳入观察组。另选取同期83例高尿酸血症患者,将其纳入对照组。比较两组患者血清SF、P2X7R、HSP70水平,分析观察组组内SF正常组(n=33)、SF升高组(n=50)、急性期组(n=52)和慢性期组(n=31)患者血清SF、P2X7R、HSP70水平,探讨其诊断价值。结果观察组患者血清SF、P2X7R、HSP70水平为(546.99±16.24)mg/m L、(678.98±20.19)pg/m L、(53.29±2.19)ng/m L,均高于对照组[(325.18±16.29)mg/m L、(384.29±20.17)pg/m L、(11.17±2.15)ng/m L],差异均有统计学意义(P<0.05)。SF正常组患者血清SF、P2X7R、HSP70水平为(646.89±12.64)mg/m L、(795.91±18.32)pg/m L、(65.97±4.06)ng/m L,均低于SF升高组[(415.81±15.29)mg/m L、(466.29±18.36)pg/m L、(36.98±4.01)ng/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。急性期组患者血清SF、P2X7R、HSP70水平为(598.02±32.14)mg/m L、(741.28±32.15)pg/m L、(72.15±12.69)ng/m L,均高于慢性期组[(308.47±32.19)mg/m L、(365.28±32.16)pg/m L、(40.25±12.61)ng/m L],差异均有统计学意义(P<0.05)。血清SF水平升高导致P2X7R、HSP70水平升高,血清SF水平与P2X7R、HSP70水平呈正相关(P<0.05)。血清SF、P2X7R、HSP70联合诊断痛风价值高于任何单一血清SF、P2X7R、HSP70指标或任2项指标。结论痛风患者血清SF、P2X7R、HSP70水平明显升高,且联合检测能明显提升痛风诊断价值,推荐使用。

脊髓P2X7受体参与链脲佐菌素诱导的小鼠糖尿病早期机械痛性神经病变

目的:探讨嘌呤能离子通道型受体7(P2X7R)在链脲佐菌素(STZ)诱导的1型糖尿病(T1DM)小鼠早期发生的机械痛性神经病变中的作用。创新点:探讨脊髓P2X7R在T1DM产生痛性神经病变的早期阶段所起的作用,将有望为研究糖尿病痛性神经病变药物提供新的靶点。方法:本实验采用健康雄性C57BL小鼠与P2X7RKO小鼠(体重20~23克,从20点至次日8点隔夜禁食12小时)为研究对象,连续三天腹腔注射STZ(浓度为100 mg/kg),从而制备T1DM动物模型。如果空腹血糖>11.1 mmol/L且三周后小鼠机械痛阈值明显下降,则表示模型制备成功。在小鼠机械痛阈下降的对应时间点,取腰段脊髓背角,采用蛋白质印迹法(western blot)和免疫组化方法测定P2X7R的表达情况。同时,在发生机械痛阈值下降的第3周时间鞘内给予其拮抗剂A740003,并进行机械刺激从而观察其痛阈值的变化。结论:STZ诱导的T1DM动物模型在早期表现为显著的机械诱发痛,并伴随脊髓背角P2X7R表达上调;在痛阈下降期鞘内给予其拮抗剂A740003可抑制糖尿病小鼠的痛行为。与腹腔注射STZ形成T1DM的C57BL/6小鼠相比,P2X7R基因敲除的糖尿病小鼠早期机械痛阈值下降的时间延迟,程度减轻。因此,我们推测P2X7R可能参与了STZ诱导的糖尿病小鼠早期机械痛性神经病变。

长链非编码RNA在痛风性关节炎研究中的新进展

随着基因技术的发展,长链非编码RNA(lncRNA)已成为当前研究的热点。痛风性关节炎是最常见的炎性关节炎,是尿酸以尿酸钠晶体的形式沉积在关节诱发的炎症反应。痛风发病率逐年升高,已严重影响人类的健康。目前已知痛风的免疫学发病机制主要包括核因子κB信号通路、NOD样受体蛋白3炎性小体信号通路和腺苷三磷酸-嘌呤能配体门控离子通道7信号通路。因此lncRNA与人类多种疾病尤其是免疫相关性疾病的发生密切相关。