顿抑心肌中腺嘌呤核苷酸转运体基因的动态表达

目的:通过观察大鼠心肌缺血再灌注模型中腺嘌呤核苷酸转运体(adeninenucleotidetranslocator,ANT)的动态表达情况,初步探讨顿抑心肌中ANT各单体的表达变化对心肌能量代谢的影响及其与心肌细胞凋亡的联系。方法:实验于2003-11/2004-04在解放军南京军区南京总医院心脏内科实验室和动物实验中心完成。将60只雄性SD大鼠随机分为对照组(n=8)和手术组(n=52)。将手术组大鼠冠状动脉左前降支结扎闭塞20min,然后剪断结扎线再灌注。按缺血后再灌注4h、1,3,7d4个时相分4组进行观察(n=13)。用反转录-聚合酶链反应计算机凝胶成像分析系统测定心肌中ANT1,ANT2mRNA相对含量。对照组大鼠不干预。结果:60只大鼠进入结果分析。①ANT1mRNA含量在缺血后再灌注4h达高峰(P<0.05)。在再灌注1d开始降低,再灌注3d时明显下降(P<0.05),逐渐恢复到对照水平(P>0.05),再灌注7d的结果与再灌注3d相似。②ANT2mRNA含量在再灌注4h时无明显增加,在再灌注1d开始升高并达峰值(P<0.01),从再灌注3d开始明显下降(P<0.01),并恢复到对照水平(P>0.05)。再灌注7d结果与再灌注3d相似。结论:①顿抑心肌中ANT的含量增加,顿抑心肌中能量短缺的现象可在缺血后再灌注3d内得以纠正。②心肌缺血可以导致细胞凋亡,心肌细胞凋亡主要发生在缺血再灌注早期(24h内),而且在体内存在时间短暂(缺血后再灌注3d内恢复)。

高浓度氧对早产大鼠肺组织中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚单位1表达的影响

目的探讨高浓度氧暴露对早产大鼠肺组织中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚单位1(ND1)表达的影响。方法早产SD新生大鼠生后1 d随机分为高氧组和空气组,高氧组持续暴露于≥85%氧气中,空气组置于同一室内常压空气中。分别取两组大鼠高氧或空气暴露后1、4、7、10和14 d肺组织标本,采用免疫组织化学和Western blot方法检测ND1蛋白的表达,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测ND1 mRNA的表达。结果①高氧组和空气组各时间点均有ND1蛋白表达;与空气组相比,高氧组在1、4和7 d ND1蛋白表达增高,随后其表达下降。②与同时间点空气组相比,高氧暴露后1、4和7 d ND1 mRNA表达显著增高(P<0.05),其后ND1 mRNA表达逐渐下降,10 d和14d时低于空气组,但两者相比差异无显著性意义(P>0.05)。③ND1蛋白的表达变化趋势与ND1 mRNA的表达变化趋势一致。结论高氧导致早产大鼠肺组织ND1表达改变,提示ND1可能参与了高氧肺损伤的病理生理过程。

还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶-1基因重组真核表达质粒的构建及其对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的构建含人还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶-1(NOX1)基因重组真核表达质粒,探讨其对血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的影响。方法通过美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库查找NOX1基因的mRNA序列,针对蛋白质编码区(CDS)设计引物,以人c DNA为模板扩增出NOX1基因全长CDS序列,经双酶切鉴定后,将NOX1基因与真核表达载体pc DNA3.1(+)连接,再经双酶切、测序鉴定。运用脂质体转染重组体pc DNA3.1(+)-NOX1至VSMC中,观察NOX1表达及VSMC凋亡情况。结果重组体中NOX1基因片段和载体DNA大小与预期一致。经BLAST(the basic local alignment search tool)比对,与NCBI数据库中的NOX1基因序列具有高度的同源性。pc DNA3.1(+)-NOX1能促进VSMC中NOX1蛋白高表达,并促使VSMC的凋亡。结论 NOX1基因重组真核表达质粒能促使VSMC凋亡,为阐明NOX1在主动脉夹层中的作用及分子机制研究奠定了基础。

幽门螺杆菌重组空泡细胞毒素A片段对人胃腺癌AGS细胞腺嘌呤核苷酸转移酶1基因表达的影响

目的探讨幽门螺杆菌(HP)重组空泡细胞毒素A(VacA)片段对人胃腺癌AGS细胞腺嘌呤核苷酸转移酶1(ANT1)基因表达的影响。方法HPVacA基因片段重组质粒转染AGS细胞后,分别于0、24、48、72 h收集细胞,提取总RNA和总蛋白,应用逆转录聚合酶链式反应和蛋白印迹法检测各时相点ANT1基因的mRNA和蛋白表达变化。结果重组VacA基因片段质粒转染AGS细胞后,ANT1基因mRNA和蛋白表达均随时间呈逐渐升高趋势,各时相点的表达量明显高于对照组(P<0.05)。结论HP可能通过上调ANT1基因的表达,使线粒体膜通透性改变,引起细胞凋亡。

丙酸睾酮与5-羟色胺对老年大鼠脊髓腰骶段年龄相关还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸黄递酶阳性体表达的影响

目的探讨丙酸睾酮与5-羟色胺对老年大鼠脊髓腰骶段年龄相关还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸黄递酶阳性体(ANB)表达的影响。方法选择无特定病原体级的SD大鼠进行析因设计:即LC组(6月龄,无干预对照);LT组(6月龄,丙酸睾酮干预);LS组〔6月龄,5-羟色胺(HT)干预〕;MC组(21月龄,无干预对照);MT组(21月龄,丙酸睾酮干预);MS组(21月龄,5-HT干预);HC组(24月龄,无干预对照);HT组(24月龄,丙酸睾酮干预);HS组(24月龄,5-HT干预),每组8只。干预后,取大鼠脊髓腰骶段,观察ANB和一氧化氮合酶(NOS)的表达。结果 ANB和NOS主要分布在大鼠脊髓腰骶段背侧部,随着大鼠的衰老,ANB的表达逐渐增多。丙酸睾酮干预组ANB表达要明显少于对照组。5-HT干预组ANB表达与无干预对照组无明显变化。随着大鼠的衰老,NOS的表达逐渐增少。丙酸睾酮干预组NOS表达要明显多于对照组,5-HT干预组NOS表达与无干预对照组无明显变化。各组脊髓腰骶段ANB和NOS含量呈负相关。结论脊髓腰骶段ANB的出现与衰老有关,随着机体的老化ANB的表达逐渐增多。脊髓腰骶段ANB的出现可能与体内衰老过程中睾酮的减少存在一定的关系,补充丙酸睾酮可以减少衰老过程中ANB的出现;而补充5-HT则未见类似效果。

腺嘌呤核甘酸转运子-1在大鼠压力超负荷致心肌重塑中的表达

目的:探讨心肌线粒体腺嘌呤核甘酸转运子-1(adeninenucleotidetranslocator-1,ANT1)对压力超负荷致心肌重塑的影响。方法:利用腹主动脉缩窄法建立大鼠压力超负荷模型,假手术组大鼠3只作为对照组。观察时间点为术后1,2,4,7,14,21和30天。ANT1mRNA含量的测定采用RT-PCR法,利用TUNEL法检测心肌细胞的凋亡。心肌纤维化的改变采用心肌胶原形态定量分析。结果:①与对照组比较,缩窄后4天ANT1mRNA的含量上调,并于第7天达到峰值,术后14天其含量回落至对照组水平,并保持至30天。②手术组心肌细胞凋亡在术后1天即升高,在4天时进入高峰期并持续至7天,其后低水平持续存在,直至实验结束。而对照组未发现凋亡的存在。③与对照组比较,心肌胶原容积分数于术后14天方明显增加,并持续增高。结论:ANT1参与了压力超负荷致心肌重塑早期心肌细胞凋亡的调节,并可能影响了这一过程的发生和发展。

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和Sirtuins在衰老和疾病中的作用

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD^(+))作为氧化还原反应的重要辅酶,是能量代谢的核心。NAD^(+)也是非氧化还原NAD^(+)依赖性酶的共底物,包括沉默信息调节因子(Sirtuins)、聚ADP-核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerases,PARPs)、CD38/CD157胞外酶等。NAD^(+)已成为细胞信号转导和细胞存活的关键调节剂。最近的研究表明,Sirtuins催化多种NAD^(+)依赖性反应,包括去乙酰化、脱酰基化和ADP-核糖基化。Sirtuins催化活性取决于NAD^(+)水平的高低。因此,Sirtuins是细胞代谢和氧化还原状态关键传感器。哺乳动物中已经鉴定并表征了7个Sirtuins家族成员(SIRT1-7),其参与炎症、细胞生长、生理节律、能量代谢、神经元功能、应激反应和健康衰老等多种生理过程。本文归纳了NAD^(+)的生理浓度及状态、NAD^(+)的生物合成途径,并阐述了Sirtuins的生物学功能,重点讨论了SIRT1-7表达及活性与衰老和疾病之间的关系。此外,本文还进一步探讨了NAD^(+)和Sirtuins依赖的衰老机制,机体NAD^(+)水平随着年龄增长而下降,导致Sirtuins活性下降,尤其是SIRT1、SIRT3和SIRT6,引发细胞核和线粒体功能下降,衰老及老化相关疾病也随之发生。研究表明,NAD^(+)前体补充剂能够快速提高机体NAD^(+)水平和Sirtuins活性,是一种有效的抗衰老干预措施,为全球老龄化社会带来希望。

烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶1对视网膜发育过程中中央碳代谢稳定性的作用

目的:探讨烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶1(NMNAT1)在视网膜发育过程中对于中央碳代谢的作用。方法:构建NMNAT1条件性敲除小鼠及其同窝对照小鼠模型,使用PCR法进行基因型鉴定。在出生后第4天,取NMNAT1敲除小鼠和同窝对照小鼠的视网膜进行液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)靶向代谢组学检测和全转录组测序。代谢物提取物通过Shimadzu LC Nexera X2 UHPLC与QTRAP 5500 LC-MS/MS联用进行分析,并使用MultiQuant 3.0.3软件对提取的MRM峰进行积分。在NovaSeq6000平台上利用Illumina TruSeq Stranded mRNA Library Prep Kit进行全转录组测序,每个样本的总读数深度为100 M。使用FastQC验证读取质量,并使用BBTools包的Bbduk实用程序修剪引物。使用HISAT22.1.0进行读取比对,使用StringTie 1.3.6组装和量化转录本。使用DESeq2 R包鉴定差异表达的基因。结果:与对照小鼠相比,NMNAT1敲除小鼠视网膜中共有39种代谢物的含量发生了显著改变(P<0.05);通过代谢物集富集分析发现多种不同生化途径受到了不同程度的破坏,主要包括氨基酸代谢、糖酵解/糖异生、烟酸和烟酰胺代谢以及嘌呤代谢。其中,NMNAT1敲除组小鼠视网膜总NMNAT1水平和烟酸腺嘌呤二核苷酸(NaAD)水平降低约40%(P<0.05);烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)和烟酸单核苷酸(NAM)的水平分别降低了约25%和55%(P<0.05);线粒体编码的NADH脱氢酶1(MT-ND1)的水平略有降低(P>0.05);上游糖酵解代谢物葡萄糖、葡萄糖6磷酸(G6P)和1,6-二磷酸果糖(F16bP)的水平大幅升高(P<0.05);磷酸二羟基丙酮(DHAP)和葡萄糖3磷酸(G3P)的水平大幅降低(P<0.05);a-KG和琥珀酸的水平降低了约30%(P<0.05);磷酸肌酸和肌酸的水平略有降低(P>0.5);赤藓糖醇(Erythritol)水平显著降低(P<0.05)。结论:NMNAT1缺失会导致视网膜中严重的特异性代谢缺陷,中央碳、嘌呤核苷酸和氨基酸代谢均受到损害,可能是导致严重视网膜变性的原因。

腺苷酸转位酶诱导自身免疫性心肌病小鼠的异常T细胞受体信号通路

目的:通过研究T细胞信号分子的表达,探讨自身免疫性扩张型心肌病发生的分子机制。方法:以线粒体腺苷酸转位酶(ANT)合成肽免疫液免疫Balb/c小鼠,建立自身免疫性扩张型心肌病动物模型(DCM组),运用实时荧光定量PCR法检测其T细胞内P56lck的表达,流式细胞术检测其Th细胞内IFN-γ和IL-4的含量,ELISA法检测其血清抗ANT自身抗体水平,免疫组化法观察其T细胞表面CD45的表达。以不含ANT合成肽免疫液免疫小鼠作为对照组(control),试验期6个月。结果:DCM组小鼠P56lck的基因表达(1369·51±874·05vs47·93±10·21,P<0·01)、IFN-γ和IL-4的百分含量(尤其是IL-4)(8·27±1·29vs5·58±0·59,P<0·01;9·93±1·53vs2·05±0·21,P<0·01)、抗ANT自身抗体的水平(0·105±0·015vs0·006±0·002,P<0·01)、CD45的表达强度(0·154±0·021vs0·026±0·008,P<0·01)均明显高于对照组。结论:异常的T细胞受体信号转导通路在ANT肽诱导扩张型心肌病发生中起着重要作用。

缺氧对大鼠心肌线粒体能量代谢和腺苷酸转位酶活性的影响

目的:探讨高原低压缺氧暴露过程中大鼠心肌能量代谢及腺苷酸转位酶活性变化特点。方法:雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、缺氧1d组、5d组、15d组和30d组。缺氧组于模拟海拔5000m高原低压舱内连续缺氧23h/d。提取心室肌线粒体,Clark氧电极法测定线粒体氧化呼吸活性;HPLC法测量线粒体内腺苷酸含量;[3H]-ADP掺入法测量线粒体ANT转运活性。结果:大鼠经缺氧1d、5d、15d后,ST3和RCR显著降低,缺氧30d时ST3仍显著低于对照组,ST4在缺氧1d、5d、15d时显著升高,缺氧30d时降低,RCR在30d时接近正常。缺氧1d和5d心肌线粒体ATP含量、ANT活性明显下降,缺氧15d时接近正常,缺氧30d时则再次降低。结论:缺氧对心肌线粒体氧化呼吸功能的抑制是导致线粒体内ATP含量下降的主要原因。缺氧过程中ANT活性与线粒体内ATP含量成协调变化。

基于胱氨酸-谷氨酸反向转运体的抗肿瘤代谢治疗新策略

代谢重编程是恶性肿瘤的重要特征之一,是促使肿瘤细胞在营养匮乏的情况下存活并促进其恶性进展的重要原因。近些年研究发现,胱氨酸-谷氨酸反向转运体(system Xc^(-))不仅是诱导铁死亡的关键靶点,同时对肿瘤代谢起重要调控作用,该转运体是导致肿瘤细胞对葡萄糖高度依赖的原因之一,这提示对于高表达system Xc^(-)的肿瘤,抑制葡萄糖摄取及糖代谢是一种有效的治疗策略。本文从system Xc^(-)的表达调控、功能及其对肿瘤代谢的影响等方面进行综述,以期为抗肿瘤代谢治疗提供新思路。

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)对人类精子活力、DNA和顶体酶的保护作用

目的探讨烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)及其前体物质烟酰胺腺嘌呤单核苷酸(NAM)对人类精子活力、DNA和顶体酶活性的保护作用。方法选取在我院生殖医学中心就诊的男性精液标本50例,检测其活力(PR级)、DNA碎片指数(DFI)和顶体酶活性。按照NAD/NAM的添加时机不同将每份精液均分为冻前干预组和复苏后干预组。将冻前干预组的标本均分为三份:分别加入PBS、NAD和NAM后37℃孵育30 min,检测其精子活力、DFI和顶体酶活性三项指标后加入精子冷冻保护剂冷冻大于24 h后复苏,再次检测该三项指标。复苏后干预组的标本直接加入精子冷冻保护剂冷冻大于24 h后复苏,复苏后的标本均分为三份:分别加入PBS、NAD和NAM后37℃孵育30 min,检测其精子活力、DFI和顶体酶活性三项指标。另选取男性精液标本38例,每例均分为两份,一份冷冻24 h后复苏、另一份冷冻大于两年后复苏;复苏后的标本均分为三份:分别加入PBS、NAD和NAM后37℃孵育30 min,检测其三项指标。结果精液在冷冻前加入NAD/NAM孵育后精子活力增强、顶体酶活性升高(P<0.05),DFI无明显变化(P>0.05);复苏后活力(前向运动精子百分率)明显降低(30.5%±4.5%)vs(63.3%±6.8%),精子顶体酶活性显著降低(78.2±8.5μIU)vs(135.0±8.2μIU)(P<0.05),DFI显著升高(25.5%±7.5%)vs(10.2%±8.3%)(P<0.05),但冻前NAD/NAM孵育组的精子活力显著高于对照组(38.4%±8.4%)/(36.5%±7.4%)vs(30.5%±4.5%)(P<0.05),顶体酶活性显著高于对照组(90.4±6.5μIU)/(92.5±5.8μIU)vs(78.2±8.5μIU)(P<0.05),DFI显著低于对照组(16.5%±6.8%)/(18.8%±8.7%)vs(25.5%±7.5%)(P<0.05)。复苏后干预组的精液经NAD/NAM孵育后精子活力升高(40.2%±6.3%)/(42.2%±8.8%)vs(31.2%±7.5%);顶体酶活性升高(98.5±7.6μIU)/(93.8±8.2μIU)VS(80.3±5.8μIU)(P<0.05),DFI未见明显变化(P>0.05)。冷冻大于两年后复苏组的精子活力低于冷冻24 h复苏组(24.5%±4.7%)vs(33.5%±7.4%);顶体酶活性也出现类似的变化(62.4±8.3μIU)vs(83.5±8.3μIU)(P<0.05),经NAD/NAM孵育后的精子活力和顶体酶活性提高(P<0.05),这一作用在冷冻大于两年组更加明显。结论在精液冷冻前加入NAD可对精子的活力、DNA和顶体酶活性起到很好的保护作用,且这一作用可以延续至精子复苏后,对于长时间冷冻保存的精子,NAD的保护作用更加显著。

H.pylori对胃癌细胞线粒体膜蛋白ANT1表达的影响

目的观察幽门螺杆菌(H.pylori,HP)作用于胃癌细胞后线粒体膜蛋白ANT1 mRNA及蛋白的表达变化,探讨H.pylori致胃癌的分子机制。方法HP分别作用于胃癌细胞0、12、24、48h后,收集细胞,应用RT-PCR和Western blot法检测各时相点ANT1基因和蛋白表达变化。结果HP与胃癌细胞共培养12h后,ANT1 mRNA的表达增加,24h增加更明显,48h达到高峰。各时相点的表达量明显高于对照组(P<0.05)。ANT1蛋白表达在各时相点均增加,明显高于对照组(P<0.05)。结论HP可上调胃癌细胞线粒体膜蛋白ANT1 mRNA及蛋白的表达,影响线粒体膜通透性改变,这可能是HP通过线粒体途径诱发凋亡的分子靶点之一。

腺病毒介导过表达ANT1基因诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡

目的利用腺病毒载体转染体外培养的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs),研究过表达腺嘌呤核苷酸转位酶1(adenine nucleotide translocase 1,ANT1)对大鼠VSMCs凋亡的影响。方法用携带ANT1的腺病毒载体(Ad-ANT1)或空载体腺病毒载体(Ad-GFP)感染VSMCs,采用激光共聚焦观察Hoechst33258染色后细胞凋亡情况,流式细胞术检测Annexin V标记细胞凋亡率。Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达。结果激光共聚焦观察转染Ad-ANT1后48 h细胞出现凋亡,且凋亡率[(13.40±1.14)%]与转染空载体对照组[(1.80±0.84)%]相比较差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞术检测转染Ad-ANT1后48 h细胞凋亡率[(10.66±1.75)%]明显高于转染空载体组细胞[(3.13±0.37)%](P<0.05)。Western blot结果显示转染Ad-ANT1后Bax蛋白表达明显高于转染空载体组,Bcl-2蛋白表达2组比较无明显差异。结论腺病毒介导过表达ANT1可诱导大鼠VSMC的凋亡,其机制可能通过上调Bax实现。

血清NOX4 MUC1表达水平与Ⅲ期非小细胞肺癌患者放疗疗效及随访1年总生存率的关系研究

目的:研究血清还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)、黏蛋白1(MUC1)表达水平与Ⅲ期非小细胞肺癌(NSCLC)患者放疗疗效及随访1年总生存率的关系。方法:选取2020年4月至2023年3月我院收治的102例Ⅲ期NSCLC患者,均进行放疗干预,并在放疗前检测血清NOX4、MUC1水平,另选择51例健康志愿者作为对照,比较两组血清NOX4、MUC1水平,以及放疗前不同临床特征的Ⅲ期NSCLC患者血清NOX4、MUC1水平。根据放疗效果将Ⅲ期NSCLC患者分为疗效良好组和疗效不佳组,对比两组血清NOX4、MUC1水平。所有患者均进行随访,以中位血清NOX4、MUC1水平为界,比较不同血清NOX4、MUC1水平的患者1年总生存率,并采用单因素和多因素Cox回归分析Ⅲ期NSCLC患者1年生存的影响因素。结果:NSCLC组血清NOX4、MUC1水平均高于对照组(P<0.05)。放疗前不同性别、年龄、体质指数(BMI)、肿瘤位置、肿瘤最大直径、病理分型的Ⅲ期NSCLC患者血清NOX4、MUC1水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。本次102例Ⅲ期NSCLC患者放疗结果显示,疗效良好组例数为55例,疗效不佳组例数为47例。疗效良好组血清NOX4、MUC1水平低于疗效不佳组(P<0.05)。高水平NOX4组患者1年总生存率低于低水平NOX4组(P<0.05),高水平MUC1组患者1年总生存率低于低水平MUC1组(P<0.05)。单因素和多因素Cox回归分析结果显示,血清NOX4、MUC1水平是Ⅲ期NSCLC患者放疗后1年生存的影响因素(P<0.05)。结论:Ⅲ期NSCLC患者血清NOX4、MUC1表达水平与其放疗疗效及随访1年总生存率有关,检测血清NOX4、MUC1水平有利于辅助评估患者放疗疗效和早期预后生存情况。

醌烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸脱氢酶1和血红素氧合酶1 mRNA及蛋白表达与燃煤型砷中毒肝损伤关系探讨

目的了解贵州省燃煤型砷中毒病区砷暴露者外周血中核因子E2相关因子2（Nff2）诱导的下游醌烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADH）脱氢酶1（NQ01）和血红素氧合酶1（HO-1）mRNA及蛋白表达情况，探讨其在燃煤型砷中毒肝损伤发生发展中的作用。方法以贵州省兴仁县燃煤型砷中毒病区交乐村和长庆村为调查点，在健康体检基础上选择161例砷暴露者为砷暴露组，按照《地方性砷中毒诊断标准》（WS／T211-2001）分为病区非病例组（21例）和病例组（140例）。病例组参照《职业性中毒性肝病诊断标准》（GBZ59-2010）进一步分为轻度肝病组（52例）、中重度肝病组（36例），其余病例为无明显肝病组（52例）；同时以相邻的非病区村45例居民作为对照组；采集研究对象外周血，实时荧光定量PCR检测NQ01和HO-1 mRNA相对表达量，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测NQ01和HO-1蛋白表达水平。结果①NQO1和HO-1 mRNA表达结果：随砷暴露人群肝损伤程度的加重，外周血NQO1和HO-1 mRNA相对表达量逐渐升高（F=5．548、10．961，P均〈0．05）。其中，轻度肝病组NQO1 mRNA相对表达量（中位数，0．918）高于对照组（0．576，P〈0．05），中重度肝病组NQO1 mRNA相对表达量（1．243）高于对照组、病区非病例组（0．653）、无明显肝病组（0．636）、轻度肝病组（P均〈0．05）；病区非病例组、无明显肝病组、轻度肝病组及中重度肝病组HO-1 mRNA相对表达量（1．059、1．225、11553、1．604）均高于对照组（0．767，P均〈0．05）；轻度肝病组HO-1 mRNA相对表达量高于病区非病例组（P〈0．05）；中重度肝病组HO-1 mRNA相对表达量高于病区非病例组、无明显肝病组（P均〈0．05）。②NQO1和HO-1蛋白表达结果：随砷暴露人群肝损伤程度的加重，血清中NQO1和HO-1蛋白表达水平逐渐升高（F=19．685、17．725，P均〈0．05）。其中，无明显肝病组、轻度肝病组及中重度肝病组NQO1和HO-1蛋白表达[NQO1：（6．272±0．744）、（6．336±0．628）、（6．714±0．540）U／L；HO-1：（45．150±4．813）、（45．283±5．049）、（48．610±5．365）U／L]显著高于对照组和病区非病例组[NQO1：（5．550±0．730）、（5．750±0．427）U／L；HO-1：（39．856±5．249）、（42．375±3．014）U／L，P均〈0．05]，中重度肝病组NQO1和HO-1蛋白表达显著高于无明显肝病组和轻度肝病组（P均〈0．05）。结论砷暴露后NQO1和HO-1 mRNA表达及蛋白表达增强，二者与燃煤型砷中毒肝损伤的发生发展密切相关。

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1及其介导的活性氧在创伤修复细胞中的作用研究进展

活性氧是一类含有未配对电子的氧原子或氧原子团，主要由超氧阴离子、过氧化氢和羟自由基等组成，具有信号转导、免疫调节和激素合成等生物学功能。活性氧被认为是细胞增殖和分化过程中信号级联反应的第二信使，参与基因表达、细胞生长和细胞凋亡等生物学效应的信号转导。

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸及其前体防治衰老相关疾病作用机制研究进展

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD+)是多种脱氢酶的辅酶,在糖酵解、三羧酸循环等生理过程中发挥着重要作用,并参与能量代谢、蛋白质翻译和修饰、DNA修复和细胞应激等多种生物过程以对抗疾病。大量研究显示,衰老伴随着细胞和组织NAD+水平的下降,而这种下降与代谢性疾病、神经退行性疾病、免疫炎症、肿瘤等许多衰老相关疾病存在因果关系。NAD+及其前体(烟酸、烟酰胺单核苷酸、烟酰胺核糖等)在延缓衰老、防治许多衰老相关疾病等方面具有重要作用。本文主要综述了逆转NAD+年龄依赖性下降防治衰老相关疾病的调控机制,并简述了NAD+代谢、NAD+前体功能及有效补充NAD+的途径,为衰老相关疾病的预防和治疗方案提供参考。

高迁移率族蛋白B-1和NADPH氧化酶衍生活性氧对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜电图波幅和玻璃体通透性的影响

目的:探究高迁移率族蛋白B-1(HMGB1)和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶衍生活性氧(ROS)对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠视网膜电图波幅和玻璃体通透性的影响及机制。方法:选取40只雄性SD大鼠,根据实验目的将大鼠分为对照组、DR模型组、HMGB1注射组和ROS抑制剂组。使用链脲佐菌素诱导大鼠糖尿病,进而发展DR模型。通过2’-7’-二氯荧光素-二乙酸酯(DCFH-DA)检测大鼠视网膜组织匀浆中ROS的生成。通过蛋白印迹分析视网膜组织中Nox2、HMGB1、Occludin和ZO-1的蛋白表达。通过PCR分析大鼠视网膜组织匀浆中PARP-1和Caspase 3的mRNA表达。通过视网膜电图分析大鼠a波和b波振幅。通过测量FITC-BSA荧光评估大鼠玻璃体通透性。结果:DR模型组和HMGB1注射组较对照组大鼠视网膜ROS水平升高(均P<0.05),ROS抑制剂组较DR模型组和HMGB1注射组ROS水平降低(均P<0.05)。DR模型组和HMGB1注射组较对照组Nox2和HMGB1的蛋白表达升高(均P<0.05),ROS抑制剂组较HMGB1注射组和DR模型组Nox2和HMGB1的蛋白表达降低(均P<0.05)。HMGB1注射组和DR模型组较对照组大鼠视网膜PARP-1和Caspase 3的mRNA表达升高(均P<0.05)。HMGB1注射组和DR模型组较对照组a波和b波振幅减少(均P<0.05),ROS抑制剂组较HMGB1注射组和DR模型组振幅升高(均P<0.05)。HMGB1注射组和DR模型组较对照组Occludin和ZO-1的蛋白表达降低(均P<0.05),ROS抑制剂组较HMGB1注射组和DR模型组Occludin和ZO-1的蛋白表达升高(均P<0.05)。DR模型组和HMGB1注射组较对照组荧光强度升高(P<0.05),ROS抑制剂组较DR模型组和HMGB1注射组荧光强度降低(P<0.05)。结论:糖尿病视网膜组织中HMGB1和Nox衍生的ROS之间存在正反馈,这可能是促进糖尿病诱导的视网膜电图波幅降低和玻璃体通透性增加的机制。