免疫检查点抑制剂治疗晚期下颌腺腺样囊性癌1例

患者女性,38岁,既往体健,2013年10月无明显诱因左侧颌下部出现肿物,就诊北京大学口腔医院,增强CT提示左侧下颌腺恶性肿瘤可能,行左颌下腺切除术,病理:腺样囊性癌,淋巴结转移(0/3),术后未行其他治疗。2014年8月复查增强CT及PET/CT,考虑局部复发及颈部淋巴结转移。

趋化因子受体CXCR4在涎腺腺样囊性癌肺高转移细胞株中的表达

目的:观察趋化因子受体CXCR4在涎腺腺样囊性癌(adenoidcysticcarcinoma,ACC)肺高、低转移细胞株中的表达,探讨趋化因子受体CXCR4表达在ACC肺侵袭转移中的作用。方法:选取ACC肺高转移细胞株(ACCM)和低转移细胞株(ACC2)以及舌癌8113细胞株(Tca-8113),分别应用单克隆抗体免疫荧光标记流式细胞术和Western印迹检测CXCR4在上述3种细胞中的表达。结果:3种细胞表面均有CXCR4受体的表达,其中ACC肺高转移细胞株ACCM表达阳性率为(77.32±6.96)%,显著高于肺低转移细胞株ACC-2的(35.32±6.71)%和舌癌Tca-8113细胞株的(33.82±5.56)%,(P<0.05)。Western印迹结果证实3种细胞株均有特征性的蛋白质表达条带,其中ACCM的蛋白质表达条带最为显著。结论:趋化因子受体CXCR4在ACC肺高转移细胞株中高表达,提示CXCR4可能与ACC嗜肺转移的生物学特性有关。

nm23-h1抑制腺样囊性癌高转移细胞株肺转移的实验研究

目的:研究nm23-h1对腺样囊性癌细胞株(adnoid cystic carcinoma cell line-M,ACC-M)的肺转移是否具有抑制作用。方法:20只裸鼠,随机分为两组,实验组每只裸鼠经尾静脉注入5×106个用阳离子脂质体介导nm23-h1质粒体外转染所得阳性表达的ACC-M细胞,对照组注入等量的未转染ACC-M细胞,1周及4周时处死动物获取肺标本,常规组织学观察。结果:1周时实验组未见转移,而对照组有少量小转移灶;4周时实验组肺内仍未见转移灶,对照组可见大量灰白色转移结节。结论:nm23-h1对ACC-M的肺转移具有抑制作用。

ADAM9、ADAM10基因沉默对腺样囊性癌高转移潜能细胞生物学行为的影响

目的:探讨ADAM9、ADAM10基因沉默对腺样囊性癌高转移潜能细胞生物学行为的影响。方法:采用免疫组化检测15例腺样囊性癌原发灶和相应淋巴结转移组织中ADAM9、ADAM10蛋白的表达情况;采用RNA干扰方法抑制腺样囊性癌高转移潜能细胞系ACC-M、SACC-LM中ADAM9、ADAM10基因的表达,检测该基因沉默后对肿瘤细胞周期及体外增殖、转移能力的影响。采用SPSS11.0软件包对数据进行单因素方差分析及Fisher确切概率检验。结果:ADAM9、ADAM10蛋白在腺样囊性癌淋巴结转移组织中的表达比在原发灶组织中显著增高(P<0.05);ADAM9、ADAM10基因沉默后细胞增殖能力下降(P<0.05),肿瘤细胞出现S期阻滞;并且ADAM9、ADAM10基因沉默后,肿瘤细胞的体外侵袭能力显著下降(P<0.01)。结论:ADAM9和ADAM10基因表达与腺样囊性癌的转移有关。ADAM9、ADAM10基因沉默可改变腺样囊性癌细胞体外增殖能力、侵袭能力等生物学特性。

nm23-h1基因转染对腺样囊性癌ACC-M细胞系淋巴结转移的影响

目的 :研究阳离子脂质体介导nm2 3-h1质粒转染腺样囊性癌ACC -M细胞株对其颌面部移植瘤区域淋巴结转移的影响。材料与方法 :体外用阳离子脂质体 (Lipofectamine)介导将nm2 3-h1质粒转染nm2 3-低表达的腺样囊性癌ACC -M高转移细胞株 ,经G4 18筛选得到高表达nm2 3-h1的细胞并以 5× 10 5/只植入 10只裸鼠颌下区 ,以未转染的细胞作对照。观察肿瘤生长及淋巴结转移情况。 4周后处死动物 ,获取标本 ,作组织病理学检查。结果 :未转染组有一只裸鼠颌下淋巴结转移 (1/ 10 ) ,4只 (4/ 10 )裸鼠淋巴结反应性增生 ,转染组未见淋巴结转移及明显增生。结论 :nm2 3-h1可能在腺样囊性癌的区域淋巴结转移中起重要的作用。

EGFR及C-erbB-2蛋白表达与腺样囊性癌细胞系转移力之间的关系

目的:研究表皮生长因子受体(EGFR)和C-erbB-2在涎腺腺样囊性癌2个细胞系中的表达,探讨其与腺样囊性癌肺转移的关系。方法:培养人涎腺腺样囊性癌SACC-83和肺高转移性腺样囊性癌SACC-LM细胞系,分别提取它们的胞质和胞膜样品并采用Western Blot技术检测EGFR和C-erbB-2在其中的表达差异,利用电泳凝胶成像分析软件对结果进行量化分析。结果:EGFR在SACC-83细胞的细胞膜中呈现高表达(P<0.01),而在SACC-LM细胞的胞质中呈现高表达(P<0.01)。SACC-83与SACC-LM细胞比较,前者胞膜中EGFR的表达明显高于后者,而胞质中的表达却明显低于后者(均为P<0.01)。C-erbB-2无论在SACC-LM细胞的胞质和胞膜中的表达都明显高于SACC-83细胞系,经灰度值分析,差异非常显著(P<0.01)。结论:EGFR基因在胞质中的高水平积累以及C-erbB-2基因的高水平表达可能在腺样囊性癌肺转移中发挥重要作用。

沉默miR-222上调PUMA基因表达诱导高转移潜能腺样囊性癌细胞凋亡

目的:研究沉默miR-222靶向p53上调凋亡调控因子(PUMA)对高转移潜能腺样囊性癌细胞系SACC-LM的影响。方法:用As-miR-222和对照(As-miR-222 NC)分别转染SACC-LM细胞,并设立空白对照,进行Transwell、CCK-8和流式细胞术,观察miR-222沉默对SACC-LM细胞迁移、增殖、凋亡和周期分布的影响。通过实时荧光定量PCR (qRT-PCR)与蛋白印迹测定(Western Blot)证实沉默miR-222靶向PUMA表达。结果:转染As-miR-222可抑制SACC-LM细胞的迁移和增殖,增加细胞凋亡率,并使G0/G1期的细胞比例显著增加(P<0. 01)。qRT-PCR与蛋白印迹实验证实,miR-222的沉默通过上调PUMA表达参与上述行为的调节。结论:沉默miR-222通过上调PUMA抑制SACC-LM细胞的迁移、增殖,诱导凋亡。

体外沉默ICMT基因对人唾液腺腺样囊性癌细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶(isoprene cysteine carboxymethyl transferase,ICMT)基因对唾液腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)细胞迁移和侵袭的影响及相关机制,为SACC的分子靶向治疗提供实验依据。方法 体外培养腺样囊性癌细胞SACC-LM和SACC-83,采用脂质体载体瞬时转染的方法,将ICMT siRNA转染至人SACC-LM和SACC-83细胞中(实验组),并分别设置空白对照组和阴性对照组(转染NC-siRNA)。通过qRT-PCR检测转染后各组细胞中ICMT和RhoA的m RNA表达并明确沉默效率;Western blot检测各组的ICMT、膜RhoA、总RhoA、Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1(Rho associations contain curly helical binding protein kinase 1,ROCK1)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达;通过CCK-8实验检测SACC细胞的增殖能力;通过比较细胞划痕实验的相对愈合面积和Transwell实验细胞穿膜数目,分别检测SACC细胞的迁移和侵袭能力。结果 SACC-LM和SACC-83细胞转染ICMT-siRNA后,实验组相较于空白对照组和阴性对照组,ICMT mRNA和蛋白表达显著下降(P<0.05),但RhoA mRNA和RhoA总蛋白表达均无显著性差异(P>0.05);膜RhoA、ROCK1、MMP-2、MMP-9的蛋白表达显著下降(P<0.05),细胞增殖能力明显下降(P<0.05),迁移和侵袭能力明显降低(P<0.05)。结论 体外沉默ICMT基因可有效抑制人SACC-LM和SACC-83细胞迁移及侵袭能力,其机制可能与RhoA-ROCK信号通路有关。

纤维粘连蛋白对人涎腺腺样囊性癌细胞株侵袭和转移的影响

为了研究纤维粘连蛋白（FN）与人涎腺腺样囊性癌（Acc）转移的关系，本研究应用免疫组织化学染色，Boyden小室体外移动试验和体外粘附试验，对人涎腺腺样囊性癌细胞系ACC—2和从其克隆出的高转移细胞株ACC—M细胞进行比较研究。结果发现FN在ACC—M表达明显高于ACC—2。在加入外源性FN后，ACC—2体外移动性、粘附率均明显提高，已接近ACC—M，而ACC—M无明显变化。结果表明FN在Acc侵袭和转移中起重要的调节作用。

雌二醇对人涎腺腺样囊性癌细胞增殖和转移作用的研究

目的根据雌二醇(E2)临床用药在体内的药物浓度,探讨E2对人涎腺腺样囊性癌细胞(SAcc83)增殖和转移的影响。方法通过MTT法、细胞分裂指数、流式细胞仪等方法研究E2对SAcc83细胞增殖的影响;通过鸡胚心侵袭实验研究E2对SAcc83细胞的转移影响情况;通过对去势的雌裸鼠尾静脉注射方法建立动物转移模型和皮下致瘤实验,研究E2在动物体内对SAcc83的增殖和转移能力的影响。结果1×10-7、1×10-8、1×10-9mol/L的E2对SAcc83均有促增殖作用,其中10-7mol/L的E2作用最显著,作用1、2、3d时细胞分裂指数分别增加了33.3%,40.9%,17.8%,作用12、18、24h时S期细胞分别增加了12.3%,3.3%和9.7%。裸鼠皮下致瘤性实验中每只鼠每天皮下注射0.2ml9.55×10-5mol/LE2,注射10d,试验组肿瘤比对照组增加了24.8%。裸鼠肺转移实验中试验组裸鼠用药42d后,肺转移结节形成率增加了41.2%。结论10-7mol/L的E2对SAcc83细胞有明显的促增殖和转移作用,提示这类雌激素应在严密监控下使用。

细胞外基质与涎腺腺样囊性癌的远处转移

目的研究涎腺腺样囊性癌与细胞外基质的关系。方法通过肿瘤手术标本的免疫组化染色和超微结构观察、细胞系体外粘附实验及人工重组基底膜侵袭实验,并采用整合素受体抑制剂精氨酸-天冬氨酸进行体外及荷瘤动物体内实验,观察其预防及治疗肺转移的效果。结果肿瘤团索周围的基膜样物质呈多层、溶解或断裂现象。出现腺样囊性癌远处转移患者的肿瘤标本组织蛋白酶D免疫组化阳性反应率(75%)明显高于无转移患者(43.8%)。肺高转移涎腺腺样囊性癌细胞株对人工重组基膜的侵袭细胞数明显高于其相应的非高转移细胞系。精氨酸-天冬氨酸在体外能抑制肺高转移涎腺腺样囊性癌细胞对人工重组基膜的侵袭,在体内能显著延长涎腺腺样囊性癌实验性肺转移动物的生存期。结论涎腺腺样囊性癌的远处转移与细胞外基质有密切关系。

肺高、低转移性涎腺腺样囊性癌细胞株核形的比较分析

本研究比较分析了肺高、低转移性涎腺腺样囊性癌细胞株的核形。结果：高转移性细胞株染色体众数为６１～６５，主干为６５；而低转移性细胞株染色体众数为５８～６１．主干为６０。与低转移性细胞相比，高转移性细胞株染色体数目没有明显增加，形态无明显变异；与正常体细胞相比，染色体数目增加主要发生在小体积组。结果提示：高转移性涎腺腺样囊性癌细胞其ＤＮＡ含量无明显增加，单纯ＤＮＡ含量的测定，并不能充分反应其转移特性，而应ＭＤＮＡ的结构上进行探讨。

BDNF对唾液腺腺样囊性癌细胞株抗失巢凋亡能力和转移的影响

目的:观察脑源性神经营养因子(BDNF)对唾液腺腺样囊性癌细胞系抗失巢凋亡能力和转移的影响,揭示BDNF与唾液腺腺样囊性癌高转移特性的关系。方法:以唾液腺腺样囊性癌(SACC)高、低转移细胞系ACC-2和ACC-M为研究对象,利用MTT、悬浮培养、流式细胞仪、软琼脂克隆形成实验观察BDNF对SACC细胞系体外培养过程中增殖和抗失巢凋亡的影响。以SPSS10.0软件对实验结果进行配对t检验。结果:ACC-2和ACC-M在体外培养过程中均具有一定的抗失巢凋亡能力,且ACC-M高于ACC-2(P<0.01)。25、50、100ng/mlBDNF对ACC-2和ACC-M增值均无显著影响(P>0.05)。50ng/mlBDNF可以显著提高ACC-2的抗失巢凋亡能力(P<0.01)和克隆形成(P<0.01)。结论:SACC的转移特性与抗失巢凋亡能力相关,适合浓度的BDNF可以提高SACC的抗失巢凋亡能力。

DNMT1干扰对唾液腺腺样囊性癌细胞系ACC-M E-cadherin表达的影响

目的:建立DNA甲基转移酶1(DNMT1)表达稳定抑制的唾液腺腺样囊性癌细胞系ACC-M,探讨DNMT1表达抑制对ACC-M细胞E-cadherin表达的影响。方法:设计靶向干扰DNMT1的shRNA序列,构建携带该序列的慢病毒载体并转导ACC-M细胞,对筛选出的抗性克隆采用RT-PCR、荧光定量PCR、免疫印迹方法分别检测DNMT1mRNA、蛋白质水平,筛选获得DNMT1表达稳定抑制的ACC-M细胞,并通过甲基化特异性PCR检测E-cadherin基因启动子的甲基化状态,荧光定量PCR检测E-cadherin的表达情况。采用SPSS11.0软件包对数据进行t检验。结果:筛选获得DNMT1稳定表达抑制的ACC-M细胞,其mRNA、蛋白相对表达水平(0.156±0.008,0.163±0.013)显著低于空白对照组和空载对照组。进一步检测发现,E-cadherin基因启动子甲基化水平明显降低,E-cadherinmRNA表达水平显著增高,P<0.05。结论:shRNA慢病毒载体介导的RNA干扰能够有效、稳定地抑制ACC-M细胞DNMT1的表达,并降低ACC-M细胞E-cadherin基因启动子的甲基化水平,从而使E-cadherin基因表达增强。

48例头颈部腺样囊腺癌肺转移瘤手术切除的临床分析

背景与目的头颈部腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)发病率低,常发生肺转移,目前ACC肺转移的研究较少,其最佳治疗措施尚无共识。本研究旨在探讨胸腔镜肺转移瘤剥除和亚肺叶切除治疗ACC肺转移瘤的临床效果,并分析影响患者近期预后的因素。方法回顾性分析2019年11月至2021年12月期间,在首都医科大学附属北京同仁医院治疗的48例胸腔镜下切除并术后病理证实为头颈部ACC肺转移瘤患者的临床资料,其中,男性27例、女性21例,平均年龄(47.0±11.7)岁。根据不同手术方式分为剥除组和亚肺叶组,比较两组患者的预后与临床特征的相关性。结果48例患者均进行了电视辅助胸腔镜手术,25例行肿瘤单纯剥除,23例行亚肺叶切除。亚肺叶组的平均手术时间少于剥除手术组[(128.5±46.6)min vs(166.2±53.0)min],差异有统计学意义(P<0.05)。两组在术中出血量、引流管留置时间、术后住院天数方面的差异无统计学意义(P>0.05)。剥除组和亚肺叶切除组的术后无进展生存期分别为20.5个月和25.2个月,差异无统计学意义(P=0.234)。多因素分析显示,无病间隔时间和转移瘤数量是肺转移瘤术后无疾病生存期的独立影响因素。结论在确保头颈部ACC肺转移瘤R0切除的前提下,胸腔镜肺转移瘤剥除提供了一个安全、可行的治疗选择,无病间隔时间和转移瘤数量是肺转移瘤术后无疾病生存期的独立影响因素。

蛋白激酶CK_2-β在腺样囊性癌肺转移细胞中的表达及意义

目的探讨蛋白激酶CK2-β在唾液腺腺样囊性癌肺转移细胞(SACC-LM)中的表达及其与肺转移的关系。方法利用Western印迹对蛋白激酶CK2-β在SACC-LM和SACC-83细胞核及细胞质中的表达进行检测分析;采用RT-PCR方法检测蛋白激酶CK2-β被不同浓度抑制剂(DRB)处理后nm23-H1的mRNA表达。结果与对照组SACC-83细胞相比,SACC-LM细胞中蛋白激酶CK2-β具有较高的表达;在SACC-LM细胞中,其在细胞核中的表达高于在细胞质中的表达。并且随着蛋白激酶CK2-β被抑制程度的提高,nm23-H1的表达增加。结论蛋白激酶CK2-β的表达与唾液腺腺样囊性癌的肺转移呈正相关。

涎腺腺样囊性癌裸鼠肺转移灶细胞时相分析及定量形态学研究

本研究利用流式细胞仪及Ｖｉｄａｓ自动图象分析系统，检测了涎腺腺样囊性裸鼠肺转移灶细胞周期时相分布及其定量形态学参数，结果表明：肺转移灶细胞Ｓ期明显低于皮下移植癌细胞（Ｐ＜０．０１），而Ｇ０／Ｇ１期高于皮下移植癌；肺转移灶细胞之核浆比、核面积、核周长、等效径、形态因子等定量形态学参数提示肺转移灶细胞趋向高分化。本研究结果对于解释涎腺腺样囊性癌临床生物学行为及制定临床治疗计划均有重要意义。

长非编码RNA lncRNA ADAMTS9-AS2促进唾液腺腺样囊性癌侵袭转移的研究

目的检测不同转移能力的唾液腺腺样囊性癌(salivary gland adenoid cystic carcinoma,SACC)细胞中差异表达的长非编码RNA(lncRNA),探讨lncRNA在唾液腺腺样囊性癌侵袭转移中的作用。方法以腺样囊性癌高转移细胞株SACC-LM为实验组,低转移细胞株SACC83为对照组,采用lncRNA芯片初步筛选差异表达的lncRNA,通过qRT-PCR进一步验证差异表达的lncRNA。通过侵袭迁移实验检测转染差异表达的lncRNA siRNAs前后腺样囊性癌细胞株侵袭迁移能力的变化。并对差异表达的lncRNA与SACC患者的临床病理特征和预后进行分析。结果芯片筛选出ADAMTS9-AS2在高转移细胞系(SACC-LM)中高表达,实时定量RT-PCR进一步验证了其在高转移细胞系(SACC-LM)显著上调,通过侵袭迁移实验发现在转染后下调ADAMTS9-AS2的表达水平后侵袭迁移能力明显降低(P<0.001)。临床病理资料分析表明,ADAMTS9-AS2在SACC组织中高度表达。高表达的ADAMTS9-AS2与SACC患者预后不良和肿瘤转移率高有关。结论高表达ADAMTS9-AS2促进SACC细胞迁移和侵袭,ADAMTS9-AS2在SACC组织中上调,并且与高转移率和不良预后相关。

神经生长因子、血管内皮生长因子在腺样囊性癌侵袭转移中的作用

目的:观察神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)组织中的表达,探讨NGF和VEGF在ACC侵袭转移机制中的作用。方法:采用免疫组化SP法对NGF、VEGF在63例ACC组织中的表达进行检测,并采用Cox比例风险回归模型对影响预后的多项临床因素进行分析。结果:NGF、VEGF在ACC组织中具有较高阳性表达,Cox模型提示NGF、VEGF、神经是否有侵袭、TNM分期、复发等是预后的危险因素,腺样-管状型的预后较实性型好。结论:ACC的预后与多因素相关,其中NGF、VEGF与ACC的侵袭转移有较大关系,可望作为判断预后的参考指标。

人涎腺腺样囊性癌肺转移裸鼠模型的建立

应用经体内外筛选和克隆化的肺高转移性涎腺腺样囊性癌Ａｃｃ－Ｍ细胞株建立肺转移裸小鼠模型。选用３月周龄雌性ＢＡＬＢ／Ｃｎｕ／ｎｕ裸小鼠６０只，经尾静脉接种１×１０６／０．２ｍｌ单细胞悬液。接种后１～３周内，组织学观察可见血管内有癌栓形成；接种后３～４周内为微转移灶期；接种后４～８周为巨视期，肉眼下可见转移灶；接种后８周动物死于肺转移。转移灶体内生长曲线表明，转移灶在４～５周时生长最快；转移灶潜伏期及带瘤生存期均较长，该模型是研究涎腺腺样囊性癌肺转移的良好模型。