靶向人c-Cbl基因重组干扰慢病毒与过表达腺病毒载体的构建、鉴定以及病毒功效研究

目的:构建可调控c-Cbl基因表达的重组慢病毒与腺病毒并评估其功效。方法:应用基因重组技术,分别构建靶向人c-Cbl基因的干扰慢病毒和过表达腺病毒。采用定量PCR和免疫印迹法检测病毒感染后白血病细胞(HL60、THP1)c-Cbl基因表达与转录本的变化。结果:3个靶向人c-Cbl基因的重组干扰慢病毒载体经测序验证构建成功,包装的病毒滴度均大于1×10^(8)TU/ml,其中shRNA-2号慢病毒干扰效率最高,白血病细胞感染后c-Cbl基因的表达约下调95%,CBL蛋白的表达约下调60%;同时,靶向人c-Cbl基因的重组过表达腺病毒载体也经测序验证构建成功,包装的病毒滴度大于1×10^(9)TU/ml,细胞感染腺病毒后,c-Cbl基因表达可瞬时上调约10倍,CBL蛋白表达约上调1.5倍。结论:重组干扰慢病毒和过表达腺病毒均可高效感染白血病细胞,并能分别下调和上调c-Cbl基因与CBL蛋白的表达,为后续研究肿瘤细胞内c-Cbl基因功能打下前期基础。

11例儿童腺病毒肺炎合并塑型性支气管炎特征分析

目的 研究儿童腺病毒肺炎合并塑型性支气管炎(PB)的临床特点及预后。方法 回顾性分析2018年1月至2022年12月确诊的11例腺病毒肺炎合并塑型性支气管炎患儿的临床资料及随访结果。结果 11例患儿,男7例、女4例,中位年龄6(1~7)岁,均有发热咳嗽,3例伴有喘息,6例有气促,7例有呼吸音减低。热程(7.55±3.59)天,热峰(39.95±0.79)℃。7例合并中毒性脑病,8例存在肝功能损害。所有患儿均有乳酸脱氢酶(LDH)、白细胞介素6(IL-6)、降钙素原(PCT)不同程度升高,C-反应蛋白(CRP)>30 mg/L者7例。胸部CT加三维重建提示以肺实变为主,肺不张6例,胸腔积液4例。6例给予了丙种球蛋白,9例接受了甲基泼尼松龙,5例予面罩给氧,1例予机械通气,后改为静脉-静脉体外膜肺氧合(V-V-ECMO)。所有病例均行支气管镜下塑型物取出,行1次支气管镜者7例,2次支气管镜者4例。1例死亡,余均好转出院。随访中1例出现反复咳喘,余预后良好。结论 腺病毒肺炎合并PB者多表现为持续高热、气促、低氧、呼吸音减低,伴有CRP、PCT、LDH明显升高,影像学多存在肺不张、肺实变,易合并其他器官损伤,应给予积极抗炎、尽早行纤维支气管镜检查治疗,多数预后良好,少数可出现反复咳喘等不良预后。

基于Penton蛋白禽腺病毒血清4型间接ELISA抗体检测方法的建立

Penton蛋白是构成禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)衣壳的主要结构蛋白,具备高度保守性与良好的免疫原性。以纯化的Penton蛋白为包被抗原,建立一种基于禽腺病毒血清4型Penton蛋白的间接ELISA抗体检测方法。结果显示,Penton蛋白最佳包被质量浓度为2μg/mL,血清稀释倍数为200倍,酶标抗体稀释倍数为1∶5000,阳性临界值为0.222,敏感性可达到1∶6400,与鸡传染性支气管炎病毒、鸡传染性法氏囊病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒均无交叉反应,特异性良好,批间批内重复性变异系数均<10%,在100份临床血清中阳性检出率为77%,与商品化试剂盒检出符合率可达98%。综上,建立的ELISA抗体检测方法可以用于禽腺病毒4型临床抗体检测。

Ⅰ群4型禽腺病毒Y17215-1株体外增殖规律及免疫原性研究

为探讨禽腺病毒4型分离株Y17215-1的体外增殖特性和免疫原性,本研究以LMH细胞为模型,摸索Y17215-1株最佳接种剂量和收获时间;通过活毒滴鼻接种和灭活疫苗肌肉注射的方式免疫SPF鸡,测定其免疫原性。结果显示:Y17215-1株0.1 MOI接种LMH细胞,培养48~72 h病毒滴度达到峰值108.625 TCID_(50)/mL。该病毒经肌肉注射对42日龄SPF鸡具有较强致病性,LD_(50)为103.000 TCID_(50)/0.2 mL。以10^(7.676) TCID_(50)的Y17215-1株滴鼻免疫21日龄SPF鸡,免疫后7 d 100%试验鸡产生中和抗体,14 d达到高峰。以Y17215-1株制备灭活疫苗肌肉注射免疫21日龄SPF鸡(10^(7.676) TCID_(50)/羽),免疫后7 d 70%试验鸡产生中和抗体,21 d达到高峰。在免疫后21 d用1000LD_(50)的Y17215-1株进行攻毒,活毒和灭活疫苗的保护率均为100%。以上结果表明:Y17215-1株具有很好的体外增殖特性和免疫原性,可以作为候选疫苗毒株。

血清4型禽腺病毒的分离鉴定及致病性分析

旨在从送检的病鸡中分离鉴定出禽腺病毒(fowl adenovirus,FAdV),为临床诊断和疫病防控提供参考依据。本研究将阳性样品接种SPF鸡胚并传代,利用PCR检测、基因序列分析、动物回归试验等方法鉴定病毒。结果:经过鸡胚传代及病毒特异性检测获得了纯净的FAdV,命名为HB2306;分析Hexon基因序列可知,HB2306株属于血清4型分支,与国内外分离的FAdV-4毒株核苷酸序列同源性为98.2%~99.9%,HB2306株与国内外的4型高致病性毒株氨基酸序列相似性在97.9%~99.8%;受试动物临床病理变化显示,HB2306株以104.5EID50/只的剂量经胸部肌肉注射后,引起宿主心包积液,肝脏变黄肿胀、淤血出血,肾出血、肿胀等典型的病理变化,与流行的高致病性毒株所致临床症状相似,且死亡率为100%。综上,本研究成功分离并鉴定出一株FAdV-4高致病力毒株,丰富了毒种库,为该病毒感染的流行情况调查和综合防控奠定了基础。

鸽源禽腺病毒XY20株Hexon全基因克隆与序列分析

为了明确鸽源禽腺病毒主要致病性相关基因的分子特征,试验对Hexon基因分段进行PCR扩增,并在测序后拼接为完整的XY20株Hexon基因,通过DNAStar 7.1软件将其与从GenBank中选择的49株参考毒株的核苷酸和氨基酸进行序列比对,绘制系统进化树,分析氨基酸位点变异情况;通过SOPMA在线软件预测分析Hexon基因编码的Hexon蛋白的二级结构,通过http://www.cbs.dtu.dk/services/NetNGlyc/程序预测Hexon蛋白的N-糖基化位点。结果表明:XY20株Hexon基因序列全长为2814 bp,编码937个氨基酸;XY20株属于C群FAdV-4型,与各群代表毒株Hexon基因的核苷酸相似性在71.7%~100%之间,推导氨基酸序列相似性在76.8%~100%之间,与我国近几年禽腺病毒流行毒株GX-1、HB1510、HLJ 160826等的Hexon基因相似性为100%。与国外C群FAdV-4型毒株相比,XY20株的氨基酸中存在31个变异位点。XY20株Hexon蛋白的二级结构及11个N-糖基化位点与FAdV-4型早期毒株ON1相比没有发生明显变化。说明XY20株与早期FAdV-4型毒株Hexon蛋白抗原性一致,且极有可能源自鸡群FAdV-4型流行毒株。

一株鹅源禽腺病毒4型的分离及致病性

2023年,昆明一朗德鹅场部分雏鹅出现软脖子症状,伴有零星死亡,病变疑似禽心包积液综合征(hydropericardium syndrome,HPS)。本研究旨在对本次雏鹅病因进行分子病毒学诊断和病原的致病性研究。采集肝病料接种鸡肝癌细胞(leghorn male hepatocellular cells,LMH):1)观察细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),取培养液负染、电镜观察病毒粒子形态;2)靶标4型禽腺病毒(serotype 4 fowl adenovirus,FAdV-4)的衣壳蛋白编码基因hexon基因进行PCR诊断,对扩增基因序列进行遗传演化分析;3)以5×10^(5.5)TCID_(50)/羽的剂量皮下注射感染10日龄健康泰州鹅,进行动物回归感染以确证其致病性。结果显示,将病料上清接种LMH细胞48~72 h后CPE明显,细胞圆缩、间隙变大、随后碎裂、逐渐脱落,电镜观察见二十面体无囊膜病毒粒子;PCR检测FAdV-4阳性,分离纯化病毒,命名为YNKM2023株;hexon基因的遗传演化分析显示,分离株与国内已有的鸡、鸭FAdV-4流行毒株相似性高达99.8%~99.9%,与印度分离株相似性为99.5%~99.6%。接种感染后,泰州鹅未出现典型的临床症状,但感染后3 d开始出现HPS的特征性病变,感染后6 d检测到中和抗体。综上,本研究成功分离到鹅源FAdV-4/YNKM2023株,该毒株与国内已有的鸡鸭流行毒株高度同源,尚未发生明显的基因漂移。分离株可以感染鹅,病毒可以在雏鹅体内复制引起组织器官病变并产生免疫应答,对鹅表现出一定的致病性,这有助于了解FAdV-4在鹅群的流行情况及其对雏鹅的致病性。

ki-67核心启动子调控E1A表达的腺病毒的构建和鉴定

目的构建含有ki-67启动子的腺病毒Ad-pki-67-E1A-GFP,实现特异在ki-67阳性的脑胶质瘤细胞中复制。方法利用分子生物学的方法将ki-67启动子序列克隆到pGL3-basic载体中,双荧光素酶报告基因实验检测ki-67启动子活性;将ki-67启动子构建到穿梭质粒,并与辅助质粒共转染293T细胞,重组腺病毒Ad-pki-67-E1A-GFP;Ad-pki-67-E1A-GFP加入到脑胶质瘤细胞中,荧光显微镜观察GFP表达情况,同时实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法检测细胞中ki-67基因表达、腺病毒复制必需基因E1A表达和病毒拷贝数。结果克隆的ki-67序列在脑胶质瘤细胞中能够启动报告基因表达;酶切和测序证明ki-67启动子构建到穿梭质粒中,并重组得到腺病毒Ad-pki-67-E1A-GFP;Ad-pki-67-E1A-GFP能够感染脑胶质瘤细胞,并且E1A的表达和病毒拷贝数与细胞中ki-67表达呈正相关。结论ki-67启动子改造后的腺病毒在脑胶质瘤细胞中复制,为进一步改造用于基因治疗恶性脑胶质瘤奠定了基础。

儿童腺病毒肺炎并发呼吸衰竭的危险因素分析

目的探讨腺病毒感染致重症社区获得性肺炎患儿并发呼吸衰竭的临床特点和相关危险因素。方法回顾性分析2019年1月至12月江西省儿童医院收治的127例重症腺病毒肺炎(SAP)住院患儿的临床资料,根据有无并发呼吸衰竭分为呼吸衰竭组(n=51)和非呼吸衰竭组(n=76),选取同期住院的轻症腺病毒肺炎(AVP)患儿作为对照组(n=80),分析SAP患儿并发呼吸衰竭的危险因素。结果呼吸衰竭组、非呼吸衰竭组与对照组在热程、住院天数、患基础疾病情况、C反应蛋白(CRP)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、胸腔积液比例、肺实变比例、合并感染比例比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。单因素分析结果显示,呼吸衰竭组和非呼吸衰竭组的热程、住院天数、CRP、AST、LDH、肌酐、血糖、白细胞(WBC)、中性粒细胞计数、血红蛋白(Hb)比较,差异有统计学意义(P<0.05);呼吸衰竭组与非呼吸衰竭组患基础疾病情况、胸腔积液比例、肺实变比例、合并感染比例比较,差异有统计学意义(P<0.001)。多因素logistic回归分析结果显示,热程>14.5 d(β=0.209,OR=1.233,95%CI=1.043~1.458)、住院天数>16.5 d(β=0.270,OR=1.309,95%CI=1.080~1.588)、患基础疾病(β=2.059,OR=7.839,95%CI=1.277~48.106)、CRP>14.9 mg/L(β=0.033,OR=1.033,95%CI=1.002~1.066)是SAP患儿发生呼吸衰竭的危险因素。结论SAP患儿热程、住院时间长于轻症腺病毒肺炎患儿,患胸腔积液、肺实变及合并感染比例、CRP、AST、LDH高于轻症腺病毒肺炎患儿。当SAP患儿存在发热持续时间长、住院治疗时间长、罹患基础疾病及CRP增高时,会增加发生呼吸衰竭风险,在临床上应进行早期评估病情及干预。

儿童腺病毒感染后闭塞性细支气管炎的临床特征及预后影响因素分析

目的 探讨儿童腺病毒感染后闭塞性细支气管炎的临床特征及预后影响因素。方法 选取2020年1月—2022年2月在长江大学附属荆州医院治疗的腺病毒感染肺炎后闭塞性细支气管炎(BO)患儿60例(观察组),另取同期该院腺病毒感染肺炎后未发生BO患儿60例(对照组),比较观察组与对照组临床特征、高分辨率CT,分析腺病毒感染肺炎后BO患儿预后不良的影响因素。结果 观察组患儿年龄<3岁、热程≥7 d、热峰≥40℃、喘息、气促、低氧血症、机械通气、有马赛克灌注征象、支气管扩张、支气管壁增厚及受累> 3叶的构成比高于对照组(P <0.05)。观察组预后不良患儿年龄<3岁、有低氧血症和受累> 3叶的构成比高于预后良好患儿(P <0.05)。多因素一般Logistic回归分析结果显示,年龄≥3岁[O^R=0.505(95%CI:0.350,0.728)]、低氧血症[O^R=2.779(95%CI:1.505,5.132)]、受累> 3叶[O^R=4.540(95%CI:2.061,10.003)]是腺病毒感染肺炎后BO患儿预后不良的影响因素(P <0.05)。结论 腺病毒感染后BO患儿年龄较小,临床症状较重,其预后受年龄、低氧血症及肺叶受累情况的影响。

顺铂联合重组人5型腺病毒腹腔灌注治疗胃癌合并恶性腹腔积液的临床疗效

目的探讨顺铂联合重组人5型腺病毒(H101)腹腔灌注治疗胃癌合并恶性腹腔积液的临床疗效。方法采用随机数字表法将68例胃癌合并恶性腹腔积液患者分为顺铂组(n=34,顺铂腹腔灌注)和顺铂联合H101组(n=34,顺铂联合H101腹腔灌注)。比较两组患者的腹腔积液缓解情况、腹腔积液间隔时间、生存情况、生活质量及不良反应发生情况。结果顺铂联合H101组患者腹腔积液总缓解率为73.5%,高于顺铂组患者的50.0%,差异有统计学意义(P﹤0.05)。顺铂联合H101组患者腹腔积液间隔时间为(34.02±9.79)天,明显长于顺铂组患者的(27.56±9.36)天,差异有统计学意义(P﹤0.01)。顺铂联合H101组患者的中位总生存期长于顺铂组(P﹤0.05)。两组患者的不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P﹥0.05)。结论顺铂联合H101腹腔灌注治疗胃癌合并恶性腹腔积液患者,能够安全有效地控制腹腔积液生成,改善患者的生活质量,延长患者的生存期。

表达SFTSV Gn基因的重组5型腺病毒的构建与鉴定

为了构建出表达新布尼亚病毒(SFTSV)Gn基因的重组5型腺病毒,试验根据GenBank上发表的SFTSV Gn基因序列(登录号为ADZ04482.1)设计合成引物,采用特异性PCR方法在Gn基因前添加了KOZAK序列和tPA信号肽序列;然后通过酶切、连接等方法构建重组穿梭质粒PGA-KOZAK-tPA-Gn,与腺病毒骨架质粒pAd5-ΔE1ΔE3-5E4在BJ5183感受态细胞中进行同源重组,得到重组腺病毒质粒rAd5-KOZAK-tPA-Gn,用PacⅠ酶酶切重组腺病毒质粒,并将线性化的质粒转染至HEK 293细胞中进行病毒包装、扩繁和纯化;采用PCR扩增、Western-blot等技术检测病毒基因的表达情况,并测定重组腺病毒效价。结果表明:通过PCR扩增获得了1 546 bp的KOZAK-tPA-Gn基因,并成功构建了重组穿梭质粒;SFTSV Gn基因在重组腺病毒传代过程中稳定存在;重组腺病毒在HEK 293细胞中表达出分子量约为61 ku的SFTSV Gn蛋白;测得重组腺病毒效价为1×10^(-7.63)/0.1 mL TCID_(50)。说明试验成功构建出表达SFTSV Gn基因的重组5型腺病毒。

一起赛鸽禽腺病毒与球虫混合感染的诊治

2023年9月,陕西咸阳某赛鸽公棚发生鸽群死亡病例。通过临床症状观察、解剖学病变分析与实验室检测,确定病因为禽腺病毒感染并发球虫感染。通过采取禽腺病毒高免卵黄抗体注射、抗球虫药物饮水以及对症疗法等综合性防制措施,鸽群恢复正常。

人腺病毒55型致青年肺炎的临床特征分析

目的 分析人腺病毒55型(HAdV-55)所致肺炎青年患者的临床特征。方法 通过医院医疗信息系统收集人腺病毒55型(HAdV-55)所致肺炎青年患者的病历资料,采用描述性流行病学方法对资料进行回顾性研究,并分析患者一般情况、临床症状和体征、实验室检查及影像学检查等结果。结果 临床症状以发热、咳嗽、咳痰、咽痛、乏力、畏寒为主,体征主要为咽部充血、呼吸音异常、扁桃体肿大。实验室检查以白细胞计数(WBC)正常、淋巴细胞计数(LYM)降低、C反应蛋白升高、丙氨酸氨基转移酶(ALT)升高、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)升高、乳酸脱氢酶(LDH)升高为主。影像学检查病变以斑片状实变影及团块样实变影多见,可伴有磨玻璃影。结论 HAdV-55可引起疫情暴发,患者以发热、咳嗽、咽痛为主要症状,影像学以斑片状实变影及团块样实变影多见。

甲泼尼龙治疗儿童腺病毒感染的临床效果

目的观察甲泼尼龙治疗儿童腺病毒感染的临床效果。方法选取2023年1—12月南京市妇幼保健院收治的腺病毒感染反复高热患儿98例为研究对象,以抽签法将入选患者随机分为甲泼尼龙治疗组和常规对症治疗组,各49例。常规对症治疗组给予常规对症治疗,甲泼尼龙治疗组在常规对症治疗组基础上加用甲泼尼龙治疗。比较2组临床疗效、症状缓解时间、住院时间,治疗前后炎性指标[白细胞计数(WBC)、血清铁蛋白(SF)、C反应蛋白(CRP)]水平、T淋巴细胞亚群(CD3^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)),不良反应及再入院率。结果甲泼尼龙治疗组总有效率(95.92%)高于常规对症治疗组(81.63%)(χ^(2)=5.018,P=0.025)。甲泼尼龙治疗组症状缓解时间及住院时间均较常规对症治疗组短(P<0.01)。治疗后7 d,2组WBC、SF及CRP水平均低于治疗前,且甲泼尼龙治疗组低于常规对症治疗组(P<0.01);2组CD3^(+)及CD4^(+)/CD8^(+)高于治疗前,且甲泼尼龙治疗组较常规对症治疗组高(P<0.05或P<0.01)。甲泼尼龙治疗组与常规对症治疗组不良反应总发生率比较差异不大(6.12%vs.2.04%,χ^(2)=1.043,P=0.307)。随访1个月,甲泼尼龙治疗组再入院率为2.04%(1/49),低于常规对症治疗组的14.29%(7/49)(χ^(2)=4.900,P=0.027)。结论甲泼尼龙治疗儿童腺病毒感染可缩短病程,缓解患儿症状,抑制炎性反应,调节免疫功能,降低患儿近期再入院率,并具有较高的安全性。

一株具有插入和缺失突变特征鸭腺病毒B2毒株的分离鉴定

【目的】对一份疑似鸭腺病毒B2(Duck adenovirus B2,DAdV B2)感染的番鸭白肝病的病例进行确诊,并对分离株进行测序,为福建省DAdV B2流行病学研究提供参考。【方法】开展病料PCR检测,并进行病毒的分离鉴定、全基因二代测序,利用MegAlign和SnapGene软件对测序结果进行同源性及遗传进化分析,再进行动物回归试验,确定对雏番鸭的致病性。【结果】病料样本检测为DAdV B2阳性,并成功分离到一株DAdV B2毒株,命名为DAdV B2/BG48。该分离株感染鸡肝癌细胞(LMH)后细胞变大变圆、最后死亡崩解,形成特征性细胞病变;感染MDEF后细胞由长梭形变为圆形并聚集,细胞间出现空隙。测序结果表明,BG48基因组在pX基因区域中有3 bp的插入,在ORF19B基因区域有33 bp的插入,在ORF64和ORF67基因区域的交界处有42 bp的缺失,ORF67基因起始密码子往后第133位碱基为G,没有突变为终止密码子,其他编码基因与CH-GD-12-2014、实验室之前鉴定的BG27和BG18无特征性差异。动物回归试验显示,2日龄的番鸭对DAdV B2分离株BG48易感,致病率为50%,死亡率为0,发病鸭可见与自然感染病鸭相似的临床症状和病理变化。【结论】成功从番鸭白肝病病例中分离鉴定1株DAdV B2突变株BG48,BG48具有多位点插入和缺失特征,提示DAdV B2毒株容易突变,临床流行毒株复杂。本结果为DAdV B2的分子流行病学调查和遗传进化研究提供了参考。

血清4型禽腺病毒胶体金免疫层析检测方法的建立

为建立对血清4型禽腺病毒(FAdV-4)进行快速检测的胶体金免疫层析法,将FAdV-4的hexon-L1蛋白进行原核表达,免疫兔制备多克隆抗体,将多抗包被在检测(T)线,将羊抗兔IgG包被在质控(C)线,用胶体金标记的多抗作为示踪剂,制备胶体金免疫层析检测卡,用于检测FAdV-4抗原,并对其敏感性和特异性进行评价,用其检测临床样本并与PCR检测结果相比较。结果显示,制备的胶体金检测卡可检出FAdV-4含量为10^(2.094)^(5)EID_(50),FAdV-8、新城疫病毒、禽白血病病毒等均不出现特异性条带,对临床样本的检测与PCR检测的符合率达98%。建立的胶体金检测方法可用于FAdV-4感染的快速检测。

重症腺病毒肺炎患儿血清IL-6R和MYD88水平与患儿预后的关系

目的分析重症腺病毒肺炎患儿血清白细胞介素-6受体(IL-6R)和髓样分化因子88(MYD88)水平与患儿预后的关系。方法将沧州市中心医院2020年6月至2022年6月收治的腺病毒肺炎患儿146例纳入研究,根据患儿病情严重程度分为非重症组(50例)和重症组(96例);根据重症腺病毒肺炎患儿出院时病情将患儿分为预后良好组(63例)及预后不良组(33例)。血清IL-6R和MYD88水平检测采用酶联免疫吸附法(ELISA)。分析重症腺病毒肺炎患儿血清IL-6R、MYD88水平及二者与序贯器官功能衰竭(SOFA)评分、Murray肺损伤评分、白细胞计数(WBC)、C反应蛋白(CRP)、血小板计数(PLT)的相关性。采用Logistic回归分析重症腺病毒肺炎患儿预后的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清IL-6R和MYD88水平对重症腺病毒肺炎患儿预后的预测价值。结果重症组血清IL-6R、MYD88水平及SOFA评分、Murray肺损伤评分均高于非重症组(P<0.05)。预后不良组WBC>10×10^(9)/L、CRP≥8 mg/L及PLT≥10×10^(9)/L患儿比例均高于预后良好组(P<0.05),IL-6R、MYD88水平及SOFA、Murray肺损伤评分均高于预后良好组(P<0.05)。血清IL-6R和MYD88呈正相关(P<0.05)。血清IL-6R、MYD88均与SOFA评分、Murray肺损伤评分、WBC、CRP以及PLT呈正相关(P<0.05)。经Logistic回归分析,IL-6R、MYD88升高是影响重症腺病毒肺炎患儿预后的危险因素(P<0.05)。经ROC曲线分析,血清IL-6R和MYD88联合预测重症腺病毒肺炎患儿预后的曲线下面积(AUC)优于各自单独预测(P<0.05)。结论重症腺病毒肺炎患儿血清IL-6R和MYD88水平显著升高,二者与患儿预后密切相关,二者联合较各自单独使用可更好地预测患儿预后。

猪流行性腹泻病毒nsp1、nsp5和N蛋白的重组腺病毒载体的构建及免疫原性比较

为研究猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)nsp1、nsp5和N蛋白的免疫原性,试验以复制缺陷型人腺病毒5型(AdMax系统)为载体,利用PEDV-GDgh毒株(登录号为MG983755),通过PCR方法扩增出GDgh毒株nsp1、nsp5、N基因,并将其连接到腺病毒穿梭载体上,构建重组穿梭质粒。将3个重组穿梭质粒和腺病毒骨架载体共转染至HEK-293A细胞中获得第1代重组腺病毒,分别命名为rAd-nsp1、rAd-nsp5、rAd-N。用第1代3株重组腺病毒接种HEK-293A细胞,连续传代,通过RT-PCR和Western-blot方法鉴定第3代重组腺病毒,并采用Reed-Muench法计算病毒半数组织培养感染剂量(TCID_(50))。以3株重组腺病毒的第3代病毒液免疫小鼠,收集血清并检测特异性IgG抗体水平。结果表明:试验成功构建出带有nsp1、nsp5、N基因的重组穿梭质粒;分别用重组腺病毒rAd-nsp1、rAd-nsp5、rAd-N感染正常HEK-293A细胞,可产生典型的细胞病变并观察到荧光信号;目的基因正常转录后得到的目的蛋白可正确表达;3株重组腺病毒rAd-nsp1、rAd-nsp5、rAd-N的TCID_(50)依次为1×10^(-8.35)/mL、1×10^(-8.50)/mL、1×10^(-7.66)/mL;免疫小鼠后均可产生针对目的蛋白的特异性抗体。说明试验成功构建的3株正常表达目的蛋白的重组腺病毒均具有免疫原性。

2021—2022年我国部分地区Ⅰ群禽腺病毒的分离鉴定及Hexon基因序列分析

为了解2021—2022年我国禽类养殖场中Ⅰ群禽腺病毒(GroupⅠfowladenovirus,FAdVⅠ)分子流行情况,试验通过病毒分离、PCR鉴定、鸡胚致病性试验、Hexon基因测序等方法对采集自2021—2022年我国15个地区共计250份疑似感染禽腺病毒的组织病料进行病原分析。结果显示:共分离出43株FAdVⅠ;Hexon基因扩增测序分析表明,其中36株与FAdV-C4型参考株核苷酸序列相似性在99.8%~100%,2株与FAdV-E8b型参考株核苷酸序列相似性达到93.8%~94.2%,1株与FAdV-A1型参考株核苷酸序列相似性达到99.5%,4株与FAdV-D11型参考株核苷酸序列相似性达到95.4%;FAdVⅠ感染在夏秋季节为高发期,阳性检出率较高的时间主要集中于4—10月。研究表明,我国15个主要养禽地区禽群中FAdVⅠ流行情况较为复杂,存在交叉感染和病毒基因重组风险,需要进一步调查其流行病学特征及研究其致病性。