蛋鸡Ⅰ亚群禽腺病毒与大肠杆菌混合感染的诊断

腺病毒科目前被分为哺乳动物腺病毒属和禽腺病毒属,其中禽腺病毒属包含14个与禽类有关的腺病毒种,它们具有共同的抗原性。根据群特异性抗原的差异,禽腺病毒属被分为3个亚群,Ⅰ亚群禽腺病毒主要引起鸡包涵体肝炎、心包积水综合征和肌胃糜烂症,Ⅱ亚群禽腺病毒主要引起火鸡出血性肠炎,Ⅲ亚群禽腺病毒主要引起鸡减蛋综合征。根据六邻体基因和血清交叉中和试验,已分离的I亚群禽腺病毒可进一步分为禽腺病毒A、B、C、D、E 5个种,包含12个血清型(血清1、2、3、4、5、6、7、8a、8b、9、10、11型)。其中,血清4型Ⅰ亚群禽腺病毒感染是我国家禽中流行的优势血清型。

1146例腺病毒抗原检测阳性呼吸道感染住院患儿病例分析

目的分析近两年重庆医科大学儿童医院住院患儿腺病毒(ADV)感染情况。方法对该院2009年6月至2011年12月呼吸道感染住院1 146例患儿、经鼻咽分泌物免疫荧光检测显示腺病毒抗原阳性者进行病例分析。结果 (1)腺病毒抗原检测阳性呼吸道感染住院患儿共1 146例,其中,男739例,女407例,年龄呈偏态分布,中值年龄为1岁。(2)病例来源于重庆及周边地区。(3)发现自2010年12月鼻咽分泌物中检出腺病毒抗原阳性病例逐渐增多,2011年5月达高峰(最多128例/个月),2011年8月后下降至普通水平。(4)2010年12月开始腺病毒抗原阳性住院患儿中重症肺炎的百分比明显增高,到2011年2月达高峰(40.30%),其后缓慢下降,到2011年9月降至正常水平。(5)2010年12月至2011年7月腺病毒肺炎预后不良率(包括死亡和病重放弃治疗)比较2009年6月至2010年11月显著增高(χ2=6.75>3.84,P<0.05)。(6)重症组的平均(1.28±0.09)岁,非重症组的平均(2.18±0.08)岁,两组有显著性差异(P<0.01);重症组合并先天性心脏病的比例高于非重症患组(χ2=17.64>3.84,P<0.05),合并先天性气道发育异常的比例也高于非重症组(χ2=26.44>3.84,P<0.05)。结论年龄小、合并先天性心血管发育畸形或气道发育畸形是患儿发生重症感染的危险因素。

LR重组法构建重组腺病毒rAd5-Vpr

目的:构建携带HIV-1Vpr基因的重组腺病毒。方法:采用限制性内切酶消化和T4DNA连接酶连接的方法,将Vpr基因克隆至腺病毒穿梭质粒pTrack-C上,然后通过重组穿梭质粒pTrack-C-Vpr和腺病毒骨架质粒pAdeno体外LR位点特异性重组的方法,将Vpr基因转移至腺病毒骨架质粒pAdeno上,最后重组骨架质粒pAdeno-Vpr鉴定正确后经PacI酶切,转染HEK293细胞,包装成重组腺病毒rAd5-Vpr。同时在HEK293细胞中进行病毒扩增,利用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,用微量全细胞病变法检测病毒滴度。结果:PCR鉴定重组腺病毒rAd5-Vpr构建成功;扩增后检测病毒滴度约为5×108PFU/mL。结论:应用LR重组法能成功构建携带HIV-1 Vpr基因的重组腺病毒,扩增后滴度能满足实验需要,为进一步相关研究的开展奠定了基础。

点滴性银屑病患者咽拭子腺病毒的相关检测

目的:探讨点滴性银屑病患者是否存在腺病毒的近期感染。方法:应用病毒培养、PCR方法对44例点滴性银屑病患者咽拭子标本进行腺病毒相关检测,并对PCR阳性结果进行测序分析。结果:患者咽拭子腺病毒培养阳性率为13.6%,腺病毒DNAPCR检测阳性率为18.2%,高于健康对照组(P<0.05)。DNA测序结果表明腺病毒种类主要为3型和7型,与流行病学分型一致。结论:腺病毒感染可能和点滴性银屑病的发病有关。人群中存在人类腺病毒的隐伏感染。

腺病毒载体介导四环素调控的DT/VEGF体系的基因治疗

目的研究重组腺病毒在四环素调控下传递 DT_(390)-VEGF_(165)及DT_(390)-VEGF_(exon7)融合基因治疗肝癌的可行性.方法构建4种四环素 tet-off 调控的 DT_(39)-VEGF_(165)或 DT_(390)-VEGF_(exon7)融合基因重组腺病毒载体,用脂质体介导包装出4种重组腺病毒,分别感染肝细胞癌 HepG2细胞,在没有四环素的情况下观察肝癌细胞的形态变化,用2种粗制重组腺病毒治疗荷肝癌裸鼠,用免疫组化鉴定融合基因的表达.结果在培养液中加入 3mg·L^(-1)的四环素可包装出携带毒素融合基因的重组腺病毒,用噬斑分析法测定重组腺病毒滴度均为1×10^(10)pfu·L^(-1);粗制重组腺病毒感染 HepG2细胞8h 后换以无四环素的正常培养液,发现72h 后 HepG2细胞发生病变,细胞死亡率达95%;感染细胞经白喉抗毒素-FITC 免疫荧光抗体染色均呈现黄绿色荧光;用粗制重组腺病毒AdCA13-tTA-TRE-DT_(390)-VEGF_(165)和 AdCA13-tTA-VEGF_(165)-DT_(390)-TRE 注射肝癌瘤体可观察到瘤体生长明显得到抑制,AFP 值显著下调,免疫组化结果显示融合基因在瘤体内得到了表达.结论重组腺病毒可以提高转基因效率.

80例成人腺病毒B组55型感染临床分析

目的对80例成人腺病毒B组55型感染者的资料进行总结,以进一步指导临床诊治。方法主要采用描述性流行病学方法对患者资料进行回顾性分析。结果本组患者多为18～29岁的青年,呈人群聚集分布,有接触史,主要症状包括发热(100%)、咳嗽(92.5%)、咽痛(88.8%)、咳痰(85.0%)和畏寒(78.8%)。最常见体征为咽部充血(88.8%)。患者外周血白细胞计数正常或偏低,多数中性粒细胞比例升高。结论成人腺病毒B组55型感染可引起暴发流行,以发热、咳嗽、咽痛和咳痰为主要表现,临床症状轻,预后良好。

HCVC基因腺病毒表达载体骨架质粒pAd.HCV-C的构建、鉴定及表达

目的构建能表达HVC基因的腺病毒表达载体的重组骨架质粒,为进一步包装能高效表达HCVC基因的腺病毒载体做准备。方法用分别含有BgⅡ及HindⅢ酶切位点的HCVC区基因上、下游引物,以含有HCV H株基因序列的质粒pBRTM/HCV1-3011为模板,通过PCR扩增获得HCVC区基因片段,基因片段回收后,以BglⅡ及HindⅢ双酶切,定向插入到腺病毒骨架质粒pAd,CMV-Link.1中CMV启动子下游BglⅡ与HindⅢ位点之间,获得重组表达质粒pAd.HCV-C通过BglⅡ/HindⅢ双酶切、PCR及插入片段序列测定对质粒进行了鉴定,以抗HCVC单克隆抗体为一抗,利用间接免疫荧光法检测了pAd.HCV-C在人肝癌细胞7721中的瞬时表达。结果酶切、PCR及测序鉴定证实,pAd,HCV-C插入片段为HCVC区基因片段,免疫荧光法检测表明其可以在7721细胞中瞬时表达。结论构建的质粒pAd.HCV-C可以在7721细胞中瞬时表达HCVC区基因,为包装表达HCVC基因的腺病毒载体奠定了基础。

IRE1α重组腺病毒载体对ATDC5软骨干细胞增殖及凋亡的影响

目的构建重组人IRE1α腺病毒,观察其对软骨干细胞ATDC5增殖与凋亡的影响。方法应用pAdEasyTM腺病毒载体系统构建包含全长IRE1α基因和RNase+Kinase核心结构域的重组穿梭质粒pAdTrack-IRE1α、pAdTrack-R+K,通过电转法分别与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组,获得重组腺病毒pAd-IRE1α、pAd-R+K。随后在HEK-293细胞中包装并扩增重组腺病毒颗粒Ad-IRE1α、Ad-R+K。用直接PCR法鉴定重组腺病毒,后者体外感染软骨干细胞ATDC5,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)感染效率,并应用流式细胞仪分别检测在内质网应激(ERS)和非ERS状态时重组腺病毒对ATDC5细胞增殖和凋亡的影响。结果酶切鉴定和PCR证实成功构建了重组腺病毒质粒pAd-IRE1α、pAd-R+K。流式细胞仪检测结果显示,在ERS状态时,重组腺病毒质粒Ad-IRE1α、Ad-R+K感染后ATDC5细胞G1期比例明显降低,S期细胞比例明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显增高(P<0.05)。结论含IRE1α基因的重组腺病毒感染可促进ATDC5细胞的增殖和凋亡。

121例成人55型腺病毒肺炎胸部CT影像分析

目的回顾性分析121例成人55型腺病毒肺炎的胸部CT影像学表现,为该病的影像学诊断提供参考。方法总结2012年2月某单位暴发的55型腺病毒感染疫情,选择其中121例经肺部CT确诊的肺炎患者为研究对象,分析其临床表现及胸部CT特点。结果 121例体温为(39.22±0.77)℃,热程为(7.12±2.23)d,所有患者均有咳嗽、咳痰、咽痛及咽充血,其中87.60%扁桃体肿大,64.46%颈部淋巴结肿大。90例表现为肺部单叶或多叶段少许渗出性病变,22例为多叶段片状团簇状影,8例为肺部单叶条索状影,1例为支气管扩张伴感染。单肺叶病变组热程短于多肺叶病变组(P<0.05),但2组间最高体温、白细胞计数、中性粒细胞比例及CRP差异无统计学意义。结论成人55型腺病毒感染与普通上呼吸道病毒感染临床表现类似,胸部CT提示多数患者存在肺部影像学异常,肺外表现较少;多肺叶受累者并未表现出明显的重症倾向。

人乳头瘤病毒E6E7基因重组腺病毒的构建及鉴定

目的:利用AdEasy系统构建人乳头瘤-16(HPV-16)E6E7基因重组腺病毒,并通过WesternBlot方法检测E6E7蛋白的表达.方法:将质粒pET-32a(+)-E6E7扩增、酶切获得E6E7片段插入腺病毒穿梭载体质粒pAdTrack-CMV的巨细胞病毒(CMV)启动子下游,构建重组穿梭载体pAdTrack-CMV-E6E7,线性化后与骨架载体AdEasy-1在细菌BJ5183内同源重组得到腺病毒质粒pAd-E6E7,经人胚肾293细胞包装后得到复制缺陷型重组腺病毒Ad-E6E7;用包装后的病毒上清再次感染293细胞,提取细胞中的蛋白,通过WesternBlot方法检测E6E7蛋白的表达.结果:连接、重组后通过酶切和测序法筛选出pAd-E6E7;经人胚肾293细胞包装,3d后观察到绿色荧光蛋白(GFP)明显表达,氯化铯梯度离心纯化最终获得6.9×1010pfu/L滴度的重组病毒;用该滴度的Ad-E6E7重新感染人胚肾293细胞3d后,提取细胞蛋白,WesternBlot检测,E6E7有明显表达.结论:利用新型腺病毒载体AdEasy系统可在短期内制备同时表达GFP和E6E7的重组腺病毒AdE6E7.

腺病毒CNHK200-hEndostatin质量控制方法的研究

目的:建立基因-病毒治疗系统CNHK200-hEndostatin的质量控制方法。方法:分别建立腺病毒蛋白鉴定、腺病毒基因组鉴定、人内皮抑素(hEndostatin)基因鉴定、人内皮抑素表达量检测、腺病毒颗粒数测定、腺病毒滴度和比滴度测定、纯度测定、野生型腺病毒(AdWT)检测、残余宿主DNA含量检测和牛血清蛋白残余量检测等腺病毒质量控制项目的方法,并对纯化的腺病毒样品进行初步检测。结果:建立用SDS-PAGE方法对腺病毒进行蛋白鉴定,用限制性内切酶图谱分析的方法对腺病毒进行基因组鉴定,用PCR方法鉴定人内皮抑素基因,用ELISA方法检测人内皮抑素表达量,用D260法和HPLC方法进行腺病毒颗粒数测定,用D260/D280方法和HPLC方法进行纯度检测,用PCR方法进行野生型腺病毒检测,用杂交方法进行残余宿主DNA含量检测,用反向间接血凝实验测定牛血清蛋白残余量。结果表明建立的方法可有效应用于腺病毒样品检测,并且我们制备的纯化腺病毒样品均符合要求。结论:基本建立了腺病毒CNHK200-hEndostatin的质量控制方法,改良的应用HPLC对腺病毒颗粒数进行定量检测的方法准确迅速,优于传统方法。应用建立的方法对纯化的腺病毒样品进行检测,基本符合临床应用要求。

负载肝素酶复制缺陷型腺病毒的包装及鉴定

目的包装负载人肝素酶(hpa)全长cDNA的复制缺陷型腺病毒载体(Adhpa)。方法将肝素酶正义腺病毒穿梭质粒pDC315hpa与腺病毒包装质粒pBHGloxDeltaE1,3Cre共转染人胚肾293细胞(HEK293),包装Adhpa,并大量扩增,收集纯化。对纯化后的Adhpa进行滴度测定、感染性鉴定、电镜鉴定及双引物PCR鉴定。结果包装成功的腺病毒载体具有良好的感染性,纯化浓缩后的病毒滴度可达5×1010pfu/ml。电镜证实病毒浓缩液中存在病毒颗粒,并可见病毒在HEK293细胞中复制。PCR双引物鉴定Adhpa可扩增出Ad及hpa特异片段,而对照则不能扩增出hpa片段。结论成功包装了负盘。

BMP-2和EGFP重组腺病毒体外转染兔骨髓间充质干细胞的研究

目的体外培养兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)并观察其生物学特性,通过腺病毒介导人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)和EGFP基因转染兔BMSCs后,观察BMP-2和EGFP的表达情况。方法通过密度梯度离心联合贴壁法,分离、培养兔BMSCs,流式细胞仪检测细胞周期和表面标记,体外诱导兔BMSCs向成骨细胞方向分化。转染后,免疫细胞化学染色及蛋白质印迹法(Western blot)检测外源基因的表达。结果兔BMSCs周期约有56.84%处于G1期;CD44表达阳性,CD45表达阴性;经成骨细胞诱导后,Ⅰ型胶原免疫组织化学染色阳性,茜素红染色阳性。转染后,Western blot及免疫细胞化学染色显示细胞内BMP-2有较强的表达。结论成功分离、培养兔BMSCs,并鉴定其具有成骨分化能力;构建的Ad-BMP-2/EGFP可高效转染兔BMSCs,并能稳定表达BMP-2目的基因。

人HCN4基因重组腺病毒载体的构建和鉴定

目的:构建超极化激活环核苷酸门控通道基因(HCN4)重组腺病毒载体.方法:采用基因工程技术,将HCN4cDNA定向克隆至穿梭载体pAdTrackCMV中,利用胞包装、扩增,CsC1密度梯度超速离心纯化.采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒中带有绿色荧光蛋白GFP报告基因,对病毒滴度和感染效率进行监测.结果:测序结果证明成功构建了HCN4基因重组腺病毒载体,病毒滴度达2.0×1015pfu/L.结论:应用细菌内同源重组法成功构建了含人HCN4基因的重组腺病毒载体.

白细胞介素18重组腺病毒对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响

目的 :研究白细胞介素 1 8重组腺病毒 ( Adms IL -1 8)对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响 ,并对其机理作一探讨。方法 :重组腺病毒腹腔注射 BAL B/ C小鼠 ,每周注射 1次 ,共 2次。 2周后制备腹腔巨噬细胞 ,经 L PS刺激 ,采用 EL ISA法检测培养上清 m IL-1 8、m IL-1 β、m TNFα的水平 ;酶还原法检测 NO的含量 ;L DH释放法检测巨噬细胞的杀伤活性。结果 :Adms IL -1 8注射后 ,小鼠腹腔巨噬细胞高效表达 m IL-1 8,同时巨噬细胞分泌 m IL-1 β、m TNFα、NO水平明显增加 ,并增强巨噬细胞的杀伤活性 ,与其它对照组比较均 P<0 .0 1。结论 :小鼠腹腔注射 Adms IL-1 8,能显著增加巨噬细胞表达 m IL -1 8、m IL -1β、m TNFα、NO,增强巨噬细胞的杀伤活性。

腺病毒介导XAF1基因诱导人肝癌细胞株SMMC7721凋亡的实验研究

背景：X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）相关因子1（XAF1）是新近鉴定的肿瘤抑制基因,在许多人类恶性肿瘤中低表达甚至不表达。目的：研究Ad5/F35腺病毒介导XAF1基因诱导人肝癌细胞株SMMC7721凋亡的作用及其可能机制。方法：构建重组腺病毒Ad5/F35-XAF1、对照病毒Ad5/F35-Null和报告病毒Ad5/F35-增强型绿色荧光蛋白（EGFP）,分别按不同感染复数（MOI）在同一作用时间点感染人肝癌细胞株SMMC7721。以荧光显微镜和流式细胞仪检测Ad5/F35-EGFP的感染效率;分别以逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法检测XAF1mRNA和蛋白表达;以甲基噻唑基四唑（MTT）法检测细胞增殖率;以Annexin V-FITC/PI双染法和原位末端标记TUNEL法检测细胞凋亡率;以蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-8和caspase-9的表达。结果：Ad5/F35-EGFP感染48h,MOI为2.0时,92%以上的SMMC7721细胞表达绿色荧光蛋白。Ad5/F35-XAF1感染48h后,SMMC7721细胞中XAF1 mRNA和蛋白表达增高,细胞增殖受到抑制,细胞凋亡剂量依赖性地增多,并伴随凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-8和caspase-9的裂解。结论：重组腺病毒Ad5/F35-XAF1在人肝癌细胞株SMMC7721中具有很强的感染效率,可促进XAF1基因表达,且能明显抑制人肝癌细胞增殖和诱导凋亡,此作用可能与XAF1激活了内、外源性凋亡通路有关。

寻找基因转染人脂肪来源的成体干细胞合适载体:脂质体介导质粒pEGFP-N1、重组腺病毒Ad5-EGFP与重组腺相关病毒rAAV-2/1-EGFP

目的:观察脂质体介导质粒pEGFP-N1、重组腺病毒Ad5-EGFP、重组腺相关病毒rAAV-2/1-EGFP基因转染人脂肪来源成体干细胞后增强型绿色荧光蛋白的表达及细胞毒性,探讨适用于脂肪来源的成体干细胞的转基因方法。方法:实验于2006-01/07在国家人类基因组北方中心和北京大学第三医院完成。全髋关节置换术患者的皮下脂肪由北京大学第三医院骨科提供,均征得患者及其家属同意。pEGFP-N1(Clotech公司),Ad5-EGFP,rAAV-2/1-EGFP(本元正阳公司)。②自成人皮下取少量脂肪组织,经机械剪切及Ⅰ型胶原酶消化后获取脂肪来源的成体干细胞,体外培养扩增。③采用脂质体介导质粒pEGFP-N1、重组腺病毒Ad5-EGFP、重组腺相关病毒rAAV-2/1-EGFP3种转染方法,观察增强型绿色荧光蛋白的表达及对细胞毒性的影响。④细胞转染后24h,将5×104细胞悬液接种于24孔板中,每周换液3次,绘制细胞生长曲线。以正常未转染细胞作为正常对照。观察不同转染方法对细胞增殖的影响。结果:①不同转染方法的感染效率比较:pEGFP-N1脂质体转染后细胞毒性较大,且感染效率低,仅为10.5%。重组腺病毒Ad5-EGFP转染率高,当感染复数为5×102时,感染效率达82.5%;当感染复数低于1×103时,对细胞无明显损害。重组腺相关病毒rAAV-2/1-EGFP转染法不能有效感染人脂肪来源的成体干细胞。②不同转染方法对细胞增殖的影响:重组腺病毒Ad5-EGFP转染和重组腺相关病毒AAV-2/1-EGFP转染人脂肪来源的成体干细胞后,对细胞增殖能力无明显影响,基本同正常对照细胞(P>0.05)。而pEGFP-N1脂质体转染后细胞增殖能力较正常对照明显下降,转染后3～10d差异有显著性意义(P<0.05)。结论:重组腺病毒Ad5-EGFP可作为一种高效的脂肪来源成体干细胞的示踪工具,提示5型复制缺陷型腺病毒是其合适的转基因载体。

EEF1A2嵌合型重组腺病毒载体的构建及鉴定

目的:克隆人类真核翻译延长因子1A2(EEF1A2)基因全长,构建其重组腺病毒载体。方法:应用RT-PCR方法从人胰腺癌组织中扩增人EEF1A2基因全长,经T-A克隆后,亚克隆到腺病毒穿梭质粒pDC316,构建穿梭质粒pDC316-EEF1A2。利用同源重组的方法将腺病毒骨架质粒pBHG35和穿梭质粒pDC316-EEF1A2共转染293细胞,获得腺病毒重组质粒Ad5/F35-EEF1A2,经过在293细胞中包装和扩增之后,获得高滴度的腺病毒重组质粒Ad5/F35-EEF1A2。PCR、WesternBlot检测EEF1A2基因的表达。结果:用RT-PCR方法,从人胰腺癌组织中扩增出1400bp的cDNA片段,经测序证实为人EEF1A2基因。构建及包装出高滴度的重组腺病毒载体Ad5/F35-EEF1A2。结论:成功地克隆了人EEF1A2基因全长,并构建其表达的重组腺病毒载体,为进一步研究人EEF1A2基因在相关疾病中的作用奠定了基础。

人血管内皮生长因子165基因腺病毒载体的构建及其在C17.2神经干细胞的表达

【目的】构建含有人血管内皮生长因子165(VEGF_(165))基因的重组腺病毒载体并观察其在 C17.2神经干细胞的表达,为下一步脑缺血的转基因细胞移植治疗提供基础。【方法】将 VEGF_(165)基因克隆至腺病毒穿梭质粒 pAdTrackCMV,获得重组质粒 pAdTrack VEGF_(165)。经酶切线性化后,与腺病毒骨架质粒 pAdEasy 共同转染大肠杆菌 BJ5183同源重组获得重组腺病毒质粒,将线性化的重组腺病毒质粒转染293细胞包装获得有感染能力但复制缺陷的重组腺病毒 pAdCMV VEGF_(165),转化体外培养的 C17.2神经干细胞。通过 RT-PCR、原位杂交、免疫组化、Western blot 法检测其在 C17.2神经干细胞中的表达。【结果】重组腺病毒 AdCMV VEGF_(165)在293细胞中包装成功,病毒滴度达2×10^(11)efu/mL。病毒上清液经 ELISA 检测VEGF_(165)表达的量为(1135±138)ng/L。重组腺病毒转染神经干细胞后有稳定表达。【结论】成功构建 pAd VEGF_(165)重组腺病毒,获得了稳定表达 VEGF_(165)的神经干细胞克隆,为下一步脑缺血的转基因细胞移植治疗提供了基础。

脑源性神经营养因子基因重组腺病毒体外转染胚胎大鼠神经干细胞及其鉴定

目的:以脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)基因重组腺病毒体外转染神经干细胞,建立能稳定表达BDNF的神经干细胞系,为下一步的动物实验提供材料。方法:(1)分离SD大鼠胎鼠的间脑,加入神经生长因子表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在神经干细胞条件培养基中克隆培养。用免疫细胞化学方法鉴定分离的神经干细胞。(2)用BDNF基因重组腺病毒转染神经干细胞,并通过RT-PCR和Western-blot实验检测外源性BDNF基因的表达。结果:(1)分离培养出了大量具有不断增殖能力、表达神经巢蛋白的神经干细胞,并能经过诱导分化为神经元和神经胶质细胞。(2)60%～70%的神经干细胞感染BDNF基因重组腺病毒,Western-blot及RT-PCR实验显示BDNF大量表达。结论:本试验成功建立了神经干细胞的分离培养方法及能长期稳定表达BDNF的神经干细胞系。