靶向EGFR基因siRNA腺病毒载体构建及其对EL-4影响

目的构建含EGFR基因siRNA腺病毒载体,并研究其对EL-4细胞株中EGFR基因表达的影响。方法合成双链寡核苷酸并克隆入pShuttleH1载体,pShuttleH1-siEGFR线性化后电转化到含pAdEasy-1的BJ5183感受态细菌中获取重组质粒,脂质体转染293细胞获取重组腺病毒Ad-siEGFR;TCID50法测定病毒效价;利用得到的重组腺病毒感染鼠EL-4细胞株,采用Western-blot检测感染前后EGFR蛋白表达水平的变化,观察AdH1/siEGFR对EL-4细胞EGFR表达的影响。结果成功构建EGFRsiRNA腺病毒载体,该载体可明显抑制EL-4细胞中EGFR蛋白的表达。结论构建的AdH1/siEGFR腺病毒能有效抑制EGFR基因在EL-4细胞株中的表达,为胸腺瘤基因治疗提供了新的方法和材料。