结肠腺瘤性息肉病基因蛋白在二甲肼诱导大鼠大肠癌过程中的表达

目的观察结肠腺瘤性息肉病基因(APC)蛋白在二甲肼诱导大鼠大肠癌形成过程中的表达,为大肠癌的靶向治疗和早期诊断提供新思路。方法将雄性SD大鼠60只随机分为正常对照组和模型组,应用免疫印迹法和免疫组织化学SP法,检测20例大肠癌组、20例大肠腺瘤组及20例正常对照组大鼠大肠黏膜组织中APC蛋白的表达情况。结果免疫组织化学检测结果显示,APC蛋白在正常对照组大鼠大肠黏膜组织中均呈强阳性表达,在大肠腺瘤和大肠癌组大鼠大肠组织中未见表达;免疫蛋白印迹检测结果显示,正常大肠黏膜组织均表现为包含有1条相对分子质量约为300×103的特异性条带,而大肠癌和大肠腺瘤黏膜组织却均不含有该条带。结论APC蛋白在大肠腺瘤和大肠癌组织中呈不表达状态,而在正常大肠黏膜组织中呈强表达状态,提示其与大肠癌的发生、发展过程关系密切,可望成为大肠癌的肿瘤标志物。

结肠腺瘤性息肉病基因启动子区甲基化状态在乳腺癌演变过程中的作用

目的检测结肠腺瘤性息肉病(APC)基因在乳腺癌中的甲基化状态及其mRNA表达水平,探讨APC基因启动子区异常甲基化与乳腺癌发生的关系。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)检测17例癌旁正常乳腺组织(NBT),27例乳腺普通型导管增生(UDH),13例乳腺非典型导管增生(ADH),20例乳腺原位导管癌(DCIS)及46例乳腺浸润性导管癌(IDC)标本中APC基因的甲基化率,并分析其与临床病理参数的关系;采用定量聚合酶链反应(QPCR)检测26例IDC中APC基因的mRNA相对表达水平,分析APC基因甲基化对其mRNA表达的影响。结果ADH、DCIS及IDC标本APC甲基化率高于NBT及UDH标本(P<0.05);IDC标本APC甲基化水平高于ADH与DCIS标本(P<0.05),APC基因mRNA的相对表达水平低于NBT标本(P<0.05);APC基因的甲基化水平与APC基因mRNA表达量呈负相关(r=-0.0469,P<0.05)。IDC中APC基因甲基化状态与临床病理参数无关(P>0.05)。结论APC基因启动子区异常高甲基化及其导致的mRNA表达下调在乳腺癌发生过程中起着重要作用。

结肠腺瘤性息肉病蛋白通过与SMAP/KAP3相互作用与微管结合

结肠腺瘤性息肉病基因 (adenomatouspolyposiscoli,APC)的突变导致家族性结肠息肉腺瘤病和散发性结肠癌 ,APC基因编码一个具有多个结构域、多种磷酸化状态的大分子蛋白质 .APC蛋白可通过C段直接或间接与微管结合 ,同时还可以通过中段与微管结合 ,但其结合的机制目前还不清楚 .为进一步研究APC与其他蛋白质的相互作用 ,利用酵母双杂交技术运用APC中段 (15 0 0bp～ 4 80 0bp)构建诱饵质粒 ,筛选人胎脑cDNA文库 ,得到一个与APC相互作用的蛋白SMAP/KAP3,SMAP/KAP3是驱动蛋白KIF3A/ 3B的相关蛋白 .通过免疫共沉淀和双色免疫荧光共定位的方法 ,证实了APC与SMAP/KAP3在体内的相互作用 ,提示APC可能通过SMAP/KAP3

家族性腺瘤性息肉病的外科治疗

家族性腺瘤性息肉病（familial adenomatous polyposis，FAP）是由于第5号染色体上结肠腺瘤性息肉病基因（APC）种系突变导致的常染色体显性遗传病。通过在1例Gardner综合征患者发现的5号染色体长臂缺失，FAP致病基因被定位于5q21—22，并被克隆。其典型的临床表现为患病者从青春期开始结直肠黏膜出现成百上千的腺瘤性息肉，此病的严重性在于癌变率高，而且癌变常不限于一处，为多中心。

条件性敲除APC基因小鼠肠道腺瘤模型的构建

腺瘤性结肠息肉病(adenomatous polyposis coli,APC)基因是家族性腺瘤性息肉病(familial adenomatous polyposis,FAP)的致病基因,APC基因的突变导致小鼠多处产生肿瘤,但肠道条件性敲除APC基因后,小鼠的表型并不清楚。该研究利用Cre-LoxP重组酶系统,在肠道绒毛和隐窝上皮细胞条件性敲除APC基因,并对小鼠表型进行鉴定和分析。将Villin Cre小鼠和APC^(fl/fl)小鼠合笼得到Villin Cre;APC^(fl/+)小鼠;有意思的是后者进一步与APC^(fl/fl)小鼠合笼,却没有得到Villin Cre;APC^(fl/fl)小鼠。进一步解剖Villin Cre;APC^(fl/+)小鼠,发现其自发产生肠道肿瘤,并能携瘤生存,免疫组化显示瘤体组织激活了Wnt信号通路。结果表明成功地构建了小鼠肠道条件性敲除APC基因腺瘤模型,为进一步研究APC基因在肠道发育以及肠道肿瘤的作用提供了优良的工具。

结肠腺癌APC2基因表达及预后的生物信息学分析

目的基于癌症基因图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库分析腺瘤性结肠息肉病基因(adenomatous polyposis coli 2,APC2)的表达水平,评估其在结肠癌患者中的诊断及预后价值。方法从TCGA数据库中下载所有结肠腺癌(colon adenocarcinoma,COAD)患者APC2基因的RNA-Seq转录组数据以及对应的每例患者的临床参数,分析APC2基因的表达水平与COAD患者临床病理参数以及预后的关系,并利用String在线分析工具寻找与APC2蛋白相互作用的蛋白质网络。结果APC2基因在COAD患者癌组织中的表达量低于癌旁组织(0.87±0.42 vs 1.11±0.22,t=3.58,P<0.05);ROC曲线显示,APC2基因对COAD具有良好的诊断价值(AUC^(ROC)=0.7391,95%CI:0.6855~0.7926,P<0.0001);APC2基因的表达与COAD患者的淋巴结转移、TNM分期以及最终生存结局密切相关(P<0.05);APC2基因低表达COAD患者的总体生存时间显著长于APC2基因高表达者(P<0.05);蛋白质网络风险结果显示,CDC16、CDC23、CDC27、ANAPC15可与APC2蛋白相互作用,主要参与生物学过程中的有丝分裂调节,蛋白质连接的泛素化,蛋白质复合物依赖的分解代谢等过程。结论APC2基因在COAD癌组织中表达下调,并与疾病的进展以及预后密切相关,有潜力成为结肠癌诊断、预后评估以及靶向治疗的新型生物学标志物。

Wnt5a结肠腺瘤性息肉病基因和β-连环素在结直肠腺癌组织中的表达和意义

目的探讨Wnt5amRNA和蛋白、结肠腺瘤性息肉病基因（APC）和B-连环素（B—catenin）蛋白在结直肠腺癌组织中的表达及意义。方法应用实时定量PCR法，检测30例新鲜结直肠腺癌组织和配对的痛旁组织中Wnt5amRNA的表达。采用免疫组织化学sP法，检测62例结直肠腺癌和癌旁组织以及10例正常结直肠黏膜组织中Wnt5a、APC和B—catenin蛋白的表达情况，并分析Wnt5a、APC和B．catenin蛋白的表达与结直肠腺癌患者临床病理特征的关系。结果Wnt5amRNA在新鲜结直肠腺癌组织中的相对表达量为0．1232±0．0140，明显高于其在癌旁结直肠黏膜组织中的相对表达量（0．0497±0．0074，P=0．02）。Wnt5a蛋白在61．3％（38／62）的结直肠腺癌组织中低表达，在38．7％（24／62）的结直肠腺癌组织中高表达，其表达与肿瘤的组织学类型和分化程度有关（均P〈0．05）。APC蛋白住61．3％（38／62）的结直肠腺癌组织中低表达，其表达与肿瘤的组织学分犁有关（P〈0．05）。B—catenin蛋白在80．6％（50／62）的结直肠腺癌组织中呈胞质和（或）胞核的异位表达，其表达与肿瘤的分化程度、有无淋巴结转移、浸润深度以及TNM分期均有关（均P〈0．05）。在结直肠腺癌组织中，Wnt5a（r=0．271，P=0．027）和APC（r=0．343，P=0．004）蛋白的低表达均与B—catenin蛋白的异位表达相关，仉Wnt5a与APC蛋白的表达无关（r=0．218，P=0．078）。结论Wnt5a、APC和B—catenin基因可能参与了结直肠腺癌的发生和发展过程。在结直肠腺癌中，APC和Wnt5a蛋白的低表达可能是B-catenin蛋白异位表达的原因之一。

中国人家族性腺瘤性患肉病患者结肠腺瘤性息肉病基因的胚系突变

目的探讨中国人家族性腺瘤性息肉病（familial adenomatous polyposis，FAJP）患者的结肠腺瘤性息肉病（adenomatous polyposis coli，APC）基因的胚系突变类型。方法对9个FAP家系18名成员进行多重连接依赖性探针扩增（multiplex ligation-dependent probe amplification，MLPA）检测APC基因有无大片段缺失。再应用PCR扩增APC基因的15个外显子区域，经变性高效液相色谱（denaturing high performance liquid chromatography，DHPLC）对每个扩增片段进行筛查，流出峰异常的片段，经DNA测序验证小片段的改变。结果9个家系中有3个家系发现有APC基因的胚系突变：家系2为c．3184-3187delCAAA，家系4为c．5432C〉T，家系9为c．3925—3929del AAAAG。3种突变中c．5432C〉T在数据库中未见报道。结论中国人不同的APC基因的胚系突变可引起FAP；无APC胚系突变的FAP患者的发病可能存在其他的机制。

应用变性高效液相色谱检测31例家族性腺瘤性息肉病家系结肠腺瘤性息肉病基因突变

目的应用变性高效液相色谱（denaturing high performance liquid chromatography，DHPLC）技术检测我国家族性腺瘤性息肉病（famili aladenomatous polyposis，FAP）家系的结肠腺瘤性息肉病（adenomatous polyposis coli，APC）基因变异特征，研究其病因机制。方法采集31个家系的先证者、患者和家系成员的外周血淋巴细胞，抽提DNA并以降落式PCR扩增APC基因各外显子和启动子。基因突变检测先由DHPLE进行筛选，发现异常峰者进行测序鉴定并TA克隆鉴定，结果与网络数据进行比对。结果31个家系中共有15个家系检出了12种不同的突变类型，FAP家系APC基因的突变检出率为48．39％。发现了4种新的突变及3例不同的内含子突变。4个新的突变分别位于255、677、1192、1403密码子，均为移码突变。证明了DHPLC能检出APC基因的突变。在APC基因的突变中，移码突变占86．67％，无义突变占13．33％，说明移码突变是中国人APC基因突变的主要方式。在突变位点上，第15外显子突变最常见，约占86．67％。结论FAP家系APC基因的突变检出率为48．39％，发现了4种新的导致蛋白编码改变的突变。证实中国人FAP家系中APC基因突变位点以第15外显子最常见，类型以移码突变为主。

腺瘤性结肠息肉病基因D1822V单核苷酸多态性与结直肠癌风险的关系

目的 探讨腺瘤性结肠息肉病（APC）基因D1822V单核苷酸多态性与结肠癌风险的关系.方法 以“APC基因”、“多态性”、“结直肠癌”、“D1822V”、“Asp1822Val”、“APC”、“polymorphism”、“D1822V”、“Asp1822Val”、“colorectal cancer”、“colorectal carcinoma”为主题词联合检索中国期刊全文数据库、重庆维普数据库、Medline、Pubmed等数据库.对所获得文献,按纳入、排除标准进行筛选,并对最终所获文献进行异质性和敏感性分析,并以比值比（OR）值为合并效应指标,利用软件进行综合Meta分析.结果 共纳入9篇文献,累计病例数8143例,对照数8776例.当Picelli的这项研究以普通人群为对照时,DV基因型和VV基因型同DD基因型比较,OR值及其95％可信区间分别为0.97（0.91 ～1.03）,0.89（0.77～ 1.03）；当以超级对照组为对照,其相应的值为0.96（0.90 ～ 1.03）、0.84（0.72 ～0.98）.结论 APC基因D1822V单核苷酸多态性,其VV基因型可能降低结直肠癌的风险.

苦荞凝集素靶向抑制结肠癌细胞HCT116增殖的机制

苦荞凝集素(tartary buckwheat lectin,TBL)是一类兼具核糖体失活蛋白N-糖苷酶活性和芦丁水解酶活性的糖蛋白,具有显著的抑制结肠癌细胞增殖的功能。先前研究表明,TBL可以下调结肠癌细胞HCT116中包括miR-135a和miR-135b在内的一些oncomiRs的表达,并且可以抑制结肠癌细胞HCT116的增殖。因此,我们推测TBL可能通过调控oncomiRs从而抑制HCT116细胞的增殖。本研究中,我们构建了包含miR-135a和miR-135b结合位点的腺瘤性结肠息肉病基因(adenomatous polyposis coli,APC)的3'-UTR区。双荧光素酶报告系统表明,经过TBL处理后,实验组的荧光素酶活性较对照组高,而且用miR-135a&b的反义核酸anti-miR-135a&b处理后和实验组有相似的结果。Western印迹分析表明,TBL处理HCT116细胞24 h后,细胞中APC和p-β-catenin的表达上调,总β-catenin的表达下调,且存在剂量依赖效应,而对GSK-3β的表达无明显影响。进一步探究了TBL进入细胞的方式,我们发现,加入TBL作用2 h后,其主要存在于HCT116细胞的表面,部分进入细胞内部,在细胞表面可以同半乳糖凝集素galectin-3竞争结合细胞膜表面受体,并且存在剂量和时间依赖性。这些结果表明:TBL以HCT116细胞表面的galectin-3受体为靶点,通过内吞作用进入细胞,进而调控HCT116细胞中miR-135a&b的表达,影响Wnt信号通路而抑制结肠癌细胞的增殖。

左金丸对大肠癌APC表达及DNA甲基转移酶活性的影响

目的研究左金丸对结肠腺瘤性息肉基因(adenomatous polyposis coli,APC)的表达及DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,Dnmts)各亚型Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b活性的影响,探讨大肠癌的发病机制及左金丸中药的抑癌机理。方法将120只Wistar大鼠按随机数字表法分为3组:正常组、左金丸组和对照组,每组40只。正常组为健康大鼠不做任何处理,左金丸组和对照组大鼠每周注射1次化学致癌剂1,2-二甲基酰肼(1,2-di meth-ylhydrazine,DMH)共12周,左金丸组从注射药物开始每天灌服左金丸汤剂,对照组与正常组灌服同等体积的生理盐水,分别在第11、21、34周将部分大鼠处死,切取肿物、进行切片、HE染色、病理观察Duke分期,用Western blot-ting半定量法检测不同肿瘤时期APC蛋白的表达;Elisa方法检测Dnmts活性。结果 APC相对蛋白含量比较:正常组>左金丸组>对照组,各组两两比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),但与肿瘤Dukes分期无关;Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b的活性比较:对照组>左金丸组>正常组,各组两两比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),其中对照组中Dnmt1、Dnmt3b的活性与肿瘤Dukes分期有关,随着肿瘤浸润程度的增加而升高。结论 APC蛋白参与了结直肠癌的发生,并且是肿瘤形成的早期事件,与肿瘤的发展进程无关;Dnmt1、Dn-mt3a、Dnmt3b参与了结直肠癌的发生过程,且Dnmt1、Dnmt3b活性升高与结直肠癌进展有关;左金丸组APC蛋白表达量的增加及甲基转移酶活性的降低可能跟左金丸的抑癌作用有关。

pCS2-MT/Axin及pEGFP-N3/APC重组质粒在结肠癌细胞系SW480中的表达

目的在结肠癌细胞系SW480中成功表达Axin和APC基因片段。方法双酶切鉴定重组质粒pCS2-MT/Axin及pEGFP-N3/APC5,利用脂质体介导法将质粒共转染结肠癌细胞系SW480,RT-PCR鉴定细胞中目的基因APC和Axin mRNA的表达,western blotting鉴定标签蛋白GFP和myc的表达。结果重组质粒双酶切得到的片段大小与预期相符,质粒共转染SW480后,RT-PCR检测到目的基因APC和AxinmRNA的表达,western blotting检测到标签蛋白GFP和myc的表达。结论重组质粒pCS2-MT/Axin及pEGFP-N3/APC5在结肠癌细胞中成功表达,为下一步研究APC和Axin基因在细胞内的功能奠定了实验基础。

β-连环蛋白及APC基因与肿瘤

目的 探讨 β 连环蛋白和结肠腺瘤性息肉病 (APC)基因的分子结构和功能特征以及其在肿瘤发生、发展中的作用。方法 综述近年来有关 β 连环蛋白和APC基因分子生物学以及与肿瘤学方面的研究。 结果 β 连环蛋白和APC基因由于自身调节和相互调节异常 ,在肿瘤发生的早期表达异常增高 ,但与肿瘤的进展、转移关系似乎正相反。此外 ,β 连环蛋白和APC基因还可以调节 p5 3、c myc基因以及细胞周期蛋白D1等因子表达。 结论 β 连环蛋白和APC基因在多种肿瘤的发生、发展中可能起着中心作用 ,并与其它癌

结肠肿瘤前细胞系的建立及应用

结肠肿瘤前细胞即永生化结肠上皮细胞系(IMCE),来源于Immorto小鼠和腺瘤性结肠息肉病基因(Apc)min/+小鼠杂交后子代小鼠的结肠上皮细胞,其表型正常,可发生恶性转化,已成为肠道肿瘤发生发展相关研究较为理想的细胞模型。此文主要就该细胞系的建立及其在肠道肿瘤发生机制和筛选防治药物等领域中的应用进展作一综述。

胃腺癌患者术前腹腔冲洗液细胞中APC基因异常甲基化状态分析

目的探讨胃腺癌(GAC)患者术前腹腔冲洗液细胞DNA中结肠腺瘤性息肉(APC)基因启动子区域5'-CpG岛异常甲基化及其临床意义。方法用实时荧光甲基化特异性聚合酶链反应(real time-MSP)检测92例GAC患者术前腹腔冲洗液细胞中APC基因异常甲基化状况,分析APC基因异常甲基化与患者临床病理因素及预后之间的关系。结果在92例GAC患者术前腹腔冲洗细胞标本中,有49例(53.26%)APC基因异常甲基化,其中28例(30.43%)完全甲基化,21例(22.83%)半甲基化。APC基因异常甲基化分别与GAC的生长方式、分化程度、浸润程度、淋巴结转移、远处转移及临床分期有统计学意义(P<0.05);生存分析表明,胃癌患者中APC基因异常甲基化组的中位生存时间为21.5个月,非甲基化组为41.5个月,差异有统计学意义(P<0.05),COX回归分析显示APC基因异常甲基化与淋巴结转移、远处转移及TNM分期影响GAC患者的预后。结论术前腹腔冲洗液细胞DNA中APC基因异常甲基化可反映GAC进展状况,并提示患者预后不良。

RASSF1A和APC基因启动子区甲基化与前列腺癌的关系

目的研究Ras相关区域家族1A(Ras association domain family 1 isoform A,RASSF1A)及结肠腺瘤性息肉病(adenomatosis polyposis coli,APC)基因启动子区CpG甲基化及与前列腺癌(PCa)之间的关系,探索PCa早期诊断的检测方法。方法收集60例PCa和40例前列腺增生(BPH)病例的组织标本及其相关的临床指标。应用亚硫酸氢盐修饰后测序法检测PCa组织及BPH组织中RASSF1A、APC基因启动子区CpG甲基化情况。结果 PCa组RASSF1A、APC基因CG位点甲基化率高于BPH组(60.8%vs 14%,48.84%vs 1.19%,P<0.05);基因甲基化率与PSA、Gleason评分、病理分期和PCa危险分期关系密切(P<0.01);RASSF1A及APC基因甲基化联合检测用于判断PCa及BPH的敏感度和特异度是95.74%和82.9%。结论 RASSF1A、APC基因启动子区甲基化与PCa发生及发展有关,其甲基化率的变化与PCa的危险分期关系密切。检测前列腺组织中相关基因甲基化状态,有望成为诊断早期PCa的一种方法。

三氧化二砷对膀胱癌T24细胞增殖及APC基因表达的影响

目的:探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As_2O_3)对人膀胱癌T24细胞增殖及腺瘤性结肠息肉病相关基因(adenomatous polyposis coli,APC)表达的影响。方法:采用2、4、8μmol/L的As_2O_3处理T24细胞,MTT法检测T24细胞增殖抑制率;脱氧核糖核酸原位末端转移酶标记技术检测细胞凋亡;用RT-PCR及Western blot法分别检测As_2O_3对T24细胞中APC mRNA和蛋白表达的影响。结果:As_2O_3在2~8μmol/L浓度范围内处理T24细胞72 h可有效抑制细胞增殖(P<0.01);促进细胞凋亡(P<0.01);增加APC mRNA和蛋白表达(P<0.01)。结论:在一定浓度范围内(2~8μmol/L)As_2O_3可以有效抑制T24细胞增殖和诱导其凋亡,其机制可能与上调APC基因的表达有关。

结直肠癌患者血清中瘦素表达的研究

目的探讨血清瘦素水平与结直肠癌各种临床病理改变的关系。方法用双抗体夹心ABC-ELISA法检测30例无营养不良的结直肠癌患者(肿瘤组)和24例健康成年人(对照组)血清瘦素水平,分析结直肠癌不同临床病理特征下血清瘦素水平的差异;检测肿瘤组患者的血清CEA及CA19-9水平,用RT-PCR方法测定肿瘤组肿瘤标本中K-ras、p53、腺瘤性结肠息肉病(APC)基因及结直肠癌缺失基因(DCC)mRNA的表达水平。结果肿瘤组血清瘦素水平〔(3.53±1.72)μg/L〕明显高于对照组〔(2.27±1.01)μg/L〕,P<0.05,且这种差异与性别无关。肿瘤组中不同肿瘤部位、不同TNM分期间的血清瘦素水平差异无统计学意义(P>0.05);但随着肿瘤分化程度的降低,血清瘦素水平呈现下降趋势,其中低分化者的血清瘦素水平明显低于高分化者和中分化者(P<0.05)。肿瘤学的相关性分析结果显示,血清瘦素水平与结直肠癌患者的血清CEA和CA19-9水平,肿瘤组织的癌基因K-ras以及抑癌基因p53、APC和DCC的表达均无相关性(P>0.05)。结论结直肠癌患者血清中的瘦素水平高于正常人;肿瘤的分化程度影响了血清瘦素的表达,但结直肠癌的TNM分期、部位和血清肿瘤标志物的水平与血清瘦素水平无关,与结直肠癌发生、发展密切相关的各种基因的表达与血清瘦素水平也无关。