人肺腺癌细胞A549放射前后蛋白质组测定及分析

筛选了人肺腺癌细胞A549放射前后的差异蛋白质,并探讨了其在放射中的作用。用双向凝胶电泳对人肺腺癌细胞A549放射前后的蛋白质谱进行分析,寻找差异蛋白质,并用MALDI-TOF-MS进行蛋白质鉴定。检测出25个差异蛋白质点,对其中差异2倍以上的7个蛋白质点用MALDI-TOF-MS鉴定,鉴定出锰超氧化物歧化酶B亚型前体、角蛋白8、角蛋白9、dystrobrevin、不均一核糖核蛋白1(HNRPH1)、烯醇化酶1等6种蛋白质。用双向凝胶电泳筛选细胞系放射前后差异蛋白质,筛选的蛋白质与抗氧化、辐射防护、信号转导、RNA加工和转运、能量代谢及细胞凋亡有关,对于揭示放射的分子机制有一定的意义。

H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的克隆及其诱导肺腺癌细胞A549凋亡的研究

通过RT-PCR的方法克隆H5N1亚型禽流感病毒NS1基因,并构建了真核表达载体pCMV-Myc/NS1。将此真核表达质粒转染肺腺癌细胞A549,48 h后,经Western印迹检测,NS1基因能在细胞中正确表达。经荧光显微镜、透射电镜观察和流式细胞仪检测,发现该株流感病毒的NS1蛋白可诱导肺腺癌细胞A549凋亡。

莪术油对人肺腺癌细胞A549增殖的影响

目的探讨莪术油对人肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用。方法体外培养肺腺癌细胞A549,MTT比色法测定莪术油对A549细胞作用24、48、72 h后抑制率;流式细胞术分析莪术油对A549细胞作用24 h后细胞周期的变化;AnnexinⅤ-FITC/PI双染检测莪术油对A549细胞作用24 h后细胞凋亡与坏死情况。结果莪术油对A549细胞增殖的抑制率随时间延长明显升高,随药物浓度增加抑制作用增强;莪术油对A549细胞作用24 h后,细胞周期停滞在G0/G1期,阻止其进入S期;细胞的早期凋亡、晚期凋亡和坏死比例随着莪术油浓度的增加而增加,且坏死细胞的比例高于凋亡细胞。结论莪术油对A549细胞的增殖具有抑制作用,并呈时间、浓度依赖,其作用是通过阻滞细胞周期及诱导凋亡和坏死来实现的。

白藜芦醇对人肺腺癌细胞A549增殖及迁移的抑制作用

目的探讨白藜芦醇对人肺腺癌细胞A549增殖及迁移的抑制作用。方法取对数生长期A549细胞,分别应用0、10、30、50、100、300及500μmol/L的白藜芦醇进行干预,24 h、48 h及72 h后检测各组人肺腺癌细胞A549的增殖抑制率。分别应用0、10、30、50、100、300μmol/L白藜芦醇干预A549细胞,24 h、48 h、72 h后测定各组细胞迁移能力。结果在10~100μmol/L浓度范围内,相同作用时间下A549细胞增殖抑制率随着白藜芦醇浓度的增加而提高,且在相同的白藜芦醇浓度下A549细胞增殖抑制率随着白藜芦醇作用时间延长而提高(P<0.05)。在大于100μmol/L浓度范围时,相同作用时间下不同浓度白藜芦醇对人肺腺癌A549细胞增殖抑制率比较,差异无统计学意义(P>0.05),但同一浓度下A549细胞增殖抑制率随着白藜芦醇作用时间延长而提高(P<0.05)。相同作用时间下10~300μmol/L白藜芦醇浓度组细胞的划痕宽度较0μmol/L白藜芦醇组增大,且10~300μmol/L白藜芦醇浓度组的划痕宽度随作用时间延长而增大(P<0.05)。结论白藜芦醇对人肺腺癌A549细胞增殖及迁移有较好的抑制作用,在一定的浓度范围内抑制率呈时间和剂量依赖性。

制滴菌素A治疗人肺腺癌细胞A549裸鼠移植瘤的实验研究

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂制滴菌素A (trichostatinA ,TSA)对人肺腺癌细胞A5 4 9裸鼠移植瘤的治疗作用。方法 建立人肺腺癌细胞A5 4 9裸鼠模型 ,瘤内注射TSA和 0 9%生理盐水 (NS) ,对治疗前后的裸鼠进行瘤重量、瘤体积、细胞形态和凋亡的观察。结果 在实验组和对照组之间 ,瘤重量差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;TSA治疗 1周和 2周后瘤体积与治疗前瘤体积相比 ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。NS治疗 1周后瘤体积与治疗前相比差异无显著性 ,而治疗 2周后瘤体积与治疗前相比 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。电镜下可见肿瘤细胞的凋亡现象经TSA干预后明显增多。结论 TSA治疗人肺腺癌细胞A5 4 9裸鼠模型有效。

8-Br-cAMP联合顺铂作用于肺腺癌细胞A549的初步研究

目的:观察8-溴-环腺苷酸(8-Br-cAMP)联合顺铂(DDP)对人肺腺癌细胞A549生长及其表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响。方法:MTT法测定不同浓度8-Br-cAMP、DDP以及两药联用处理人肺腺癌细胞A549后细胞增殖活性的差异;应用RT-PCR技术检测EGFR mRNA表达水平的变化;Western blot技术检测EGFR蛋白表达水平的变化;利用流式细胞术测定细胞周期的改变。结果:8-Br-cAMP及DDP均能抑制人肺腺癌细胞A549的增殖,并呈浓度及时间依赖性;DDP联合8-Br-cAMP细胞抑制率显著高于相应浓度单药组(P<0.05),两者呈现出相加的抗瘤效果。8-Br-cAMP可下调人肺腺癌A549细胞EGFR mRNA和蛋白的表达。8-Br-cAMP将细胞周期阻滞在G2/M期(P<0.05)。结论:8-Br-cAMP、DDP均可抑制A549细胞增殖。8-Br-cAMP可显著提高顺铂的细胞毒作用,增强化疗效果,并将细胞阻滞于G2/M期。8-Br-cAMP可以下调EGFR表达,可一定程度地逆转化癌细胞。

曲古抑菌素A下调人肺腺癌细胞A549内IDO表达的分子机制

【目的】研究曲古抑菌素A(TSA)抑制γ干扰素(IFN-γ)诱导的人A549细胞内吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)表达的分子机制。【方法】采用蛋白质免疫印迹技术检测TSA在IFN-γ诱导的A549细胞中IDO的表达、信号转导及转录激活子1(STAT1)的磷酸化和干扰素调节因子1(IRF-1)的激活等过程中的作用,在激光共聚焦显微镜下观察TSA对STAT1核转位的影响,利用双荧光素酶报告基因系统检测TSA对γ-干扰素激活位点(GAS)、干扰素刺激应答元件(ISRE)和核因子-κB(NF-κB)的激活的影响。【结果】TSA以浓度依赖方式下调A549细胞中IFN-γ诱导的IDO表达,并能明显抑制STAT1第701位酪氨酸的磷酸化和STAT1的核转位。双荧光素酶报告基因分析和Western blot结果表明:TSA能显著抑制GAS、ISRE和IRF-1的激活却不能抑制NF-κB的激活。【结论】TSA能下调IFN-γ诱导的A549细胞中IDO的表达,其机制可能是与其抑制STAT1的磷酸化和核转位,以及抑制STAT1与GAS的结合有关。

苯丁酸钠对体外人肺腺癌细胞A549的影响

目的观察苯丁酸钠(PB)对体外人肺腺癌细胞A549的影响。方法采用MTT法观察不同浓度PB对人肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用,流式细胞术分析不同浓度PB对生长期人肺腺癌细胞A549的细胞周期及凋亡情况的影响。结果 PB作用后人肺腺癌细胞A549的生长缓慢,细胞阻滞于G0/G1期(P<0.05),凋亡增加(P<0.05),其抑制作用呈时间和浓度依赖性。结论 PB能抑制人肺腺癌细胞A549的生长,促进其凋亡。

EGCG对人肺腺癌细胞A549增殖和分化的影响研究

探讨EGCG对人肺腺癌细胞A549增殖和分化的影响。方法:购买30株人肺腺癌细胞A549为实验标本,随机将其分为高剂量组、低剂量组和空白对照组,各10例,分别采取不同的干预措施,对比A549细胞增殖、分化情况。结果:干预后,高剂量组人肺腺癌细胞A549增值率、NF-kB信号通路活性明显低于其余两组,而凋亡率则显著偏高(P<0.05)。结论:EGCG可能通过抑制NF-kB信号通路降低人肺腺癌细胞A549的增值率,提高其凋亡率,从而抑制人肺腺癌细胞A549的增殖和分化。

蛋白激酶CK2β siRNA对肺腺癌细胞A549生长的抑制作用

目的：探讨蛋白激酶CK213特异性干扰RNA对肺腺癌细胞系A549增殖的影响。方法：构建蛋白激酶CK2psiRNA表达质粒pGPU6-CSNK2B，以与人编码序列无同源性的通用阴性对照表达质粒pGPU6一NC作对照，分别用脂质体转染法转染A549细胞。采用RT-PCR、Western Blot、免疫细胞化学技术检测转染后（K2pmRNA和蛋白表达，同位素参入法检测CK2活性，细胞计数法检测转染后A549的细胞生长曲线和倍增时间，流式细胞术检测转染后对A549细胞周期的影响。结果：重组质粒稳定转染A549细胞后，转染pGPU6一CSNK2B组CK213mRNA、细胞胞浆蛋白表达和CK2激酶活性均较转染pGPU6一NC组和未转染组细胞明显下降（P〈0．05），各组间细胞胞核蛋白CK213表达无明显差异（P〉0．05）；CK2活性的抑制率与CK213蛋白表达抑制率大致平行；转染pGPU6一CSNK2B组细胞生长相对缓慢，细胞的倍增时间为56h，而未转染组细胞的倍增时间为39h；流式细胞结果显示转染pGPU6-CSNK2B组A549细胞增殖指数明显降低（P〈0．05），细胞阻滞于G0／G1期。结论：蛋白激酶CK2B特异性siRNA表达质粒可以阻抑A549细胞CK2t3的表达，抑制细胞增殖和CK2激酶活性，为CK2 siRNA作为抗肿瘤药物的开发和CK2药靶的研究奠定了基础。

吴茱萸碱对人肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用

采用MTT法研究了不同浓度的吴茱萸碱在不同时间点对人肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用。结果表明,吴茱萸碱对A549细胞增殖有一定的抑制作用,且呈时间-剂量依赖性;吴茱萸碱对A549细胞作用72h时的IC50值最小,抑制作用相对最好;作用24h时,吴茱萸碱对A549细胞增殖的抑制作用明显优于顺铂。

吗啡与布托啡诺对肺腺癌细胞A549侵袭与迁移的影响

目的分析吗啡与布托啡诺对肺腺癌细胞A549侵袭与迁移的影响及可能的作用机制。方法人肺腺癌A549细胞随机分为吗啡组与布托啡诺组。每组均分别设置吗啡、布托啡诺与拮抗剂不同浓度。采用免疫组化法、Transwell法、细胞划痕法评估吗啡与布托啡诺及其对应的拮抗剂对肺腺癌细胞A549侵袭与迁移及相关蛋白表达的影响及作用机制。结果随着布托啡诺剂量的增加,A549细胞侵袭数明显减少,而随着吗啡剂量的增加,A549细胞侵袭数明显增加(P<0.05);随着布托啡诺剂量的增加及时间延长,A549细胞迁移变化不明显,而随着吗啡剂量的增加A549细胞迁移数明显增加(P<0.05);Nor-Binaltorphimine(Nor-BNI)剂量为0.1μmol/L时,A549细胞侵袭数明显增加。与单纯布托啡诺组比较,加入Nor-BNI后,每组对应剂量的A549细胞侵袭数明显增加。与单纯吗啡组比较,随着甲基纳曲酮剂量的增加,A549细胞侵袭数明显减少。10μmol/L布托啡诺作用肺腺癌A549细胞24 h后,相关蛋白表达下调,而吗啡作用后表达上调(P<0.05)。结论吗啡可促进肺腺癌细胞A549的迁移与侵袭,并上调MMP-2、MMP-9、Fascin蛋白表达,而布托啡诺则抑制肺腺癌细胞A549的迁移与侵袭,并下调MMP-2、MMP-9、Fascin蛋白表达。

胰岛素对人肺腺癌细胞A549的化疗增敏作用

目的探讨用胰岛素提高人肺腺癌细胞A549生长代谢水平后对其化疗敏感性的影响。方法采用MTT法检测顺铂对A549细胞抑制率达30%时的药物浓度(IC30),检测胰岛素促进细胞增殖的最佳作用浓度和最佳作用时间,并检测不同浓度及不同时间胰岛素作用后对A549细胞化疗敏感性的影响。用流式细胞仪测定胰岛素对A549细胞周期的影响。结果顺铂的IC30约为36.87μg/ml;胰岛素促进细胞增殖的最佳作用浓度为4.0～16mU/ml,取8mU/ml为终浓度时,胰岛素促进细胞增殖的最佳作用时间为8～16h;胰岛素(2.0～16.0mU/ml,8～16h)可增强顺铂(36.87μg/ml)的细胞毒作用(P<0.01)。流式细胞仪分析显示,胰岛素(8mU/ml)作用4～12h,S期细胞随作用时间延长而逐渐增多,但作用16h后S期细胞数目又逐渐接近于对照组水平。结论胰岛素可通过提高人肺腺癌细胞A549的生长代谢水平而提高顺铂对该细胞的抑制率,且该作用呈时间和浓度依赖性。

胰岛素对人肺腺癌细胞A549化疗增敏作用机制的研究

目的探讨胰岛素对化疗药物顺铂(DDP)敏感性的影响和机制。方法选用人肺腺癌细胞A549为靶细胞,采用MTT法检测顺铂对A549细胞抑制率达30%时的药物浓度(IC30),检测胰岛素不同浓度或作用不同时间后,对A549细胞化疗敏感性的影响。流式细胞仪检测不同加药处理组的周期时相变化情况。Western Blot印迹方法检测不同加药处理组的细胞周期蛋白CyclinA和CyclinD1的表达情况。结果顺铂的IC30约为36.87μg/mL;胰岛素(2.0～16.0mU/mL;8h～16h)可增强顺铂(36.87μg/mL)的细胞毒作用(P<0.01)。流式分析显示DDP能引起A549的S期细胞阻滞,胰岛素可增加DDP对A549的S期细胞阻滞。Western Blot印迹方法检测显示单用顺铂组较对照组比较,CyclinA的表达明显增强,CyclinD1的表达变化不明显。胰岛素联合顺铂组较单用顺铂组比较,CyclinA、CyclinD1的表达变化均不明显。结论胰岛素具有化疗增效作用,胰岛素用药的时机选择是实现增效的关键。其机制可能为:胰岛素能够使A549的S期细胞比例增加,与DDP有协同作用。顺铂对人肺腺癌细胞株A549细胞周期的影响表现为S期的阻滞,CyclinA的表达增强在其作用机制上起着重要的作用。

短期机械拉伸加载对人肺腺癌细胞A549细胞的增殖效应

目的测量人肺腺癌细胞株A549对机械拉伸加载的短期响应。方法用加载Flexercell-4000TTM系统在4h内对A549细胞进行正常生理参数范围的应变刺激,并测量细胞的增殖效应。结果细胞的增殖率均有不同程度的提高,增殖响应系数M(%)为:0.5h,M=18%;1h,M=22%;4h,M=5%。结论研究证明细胞对短期加载的增殖响应与人成骨细胞特征相似,在1800循环数左右有一峰值,间歇式加载能保持长期高增长率,而过去的研究表明连续加载相反,只会抑制细胞的增长。

尼妥珠单抗联合X射线照射对肺腺癌细胞A549的作用

目的:探讨表皮生长因子(Epidermal growth factor receptor,EGFR)受体抑制剂尼妥珠单抗(h-R3)联合X射线照射,对肺腺癌细胞系的A549细胞的作用。方法:肺腺癌细胞系A549细胞常规培养48 h后,分为对照组,单纯h-R3组,单纯照射组,h-R3联合照射组。h-R3组分别以终浓度0.5、5、50、100、1 000 μg/mL处理后继续培养24 h.照射组采用Varian-6MV直线加速器X射线照射2、4、8、10Gy后继续培养24 h;h-R3联合照射组在照射前以50 μg/mL浓度h-R3处理后继续培养24 h。收集各组细胞进行甲基噻唑基四唑(MTT)法检测。测定细胞的光密度值(Optical Density,OD),绘制细胞存活情况,并在倒置显微镜下观察细胞形态变化。结果:对照组A549细胞的OD值为0.7867±0.0764,不同浓度h-R3组的OD值分别为0.793 6±0.0846,0.823 4±0.0688,0.760 3±0.057 3,0.790 2+0.063 7,0.820 8±0.0770,与对照组比较无明显差异(P>0.05);不同剂量照射组OD值分别为0.246 0±0.023 1,0.330 8±0.0336,0.343 0±0.0281,0.3175±0.0307,明显低于对照组(P<0.05);50 μg/mL浓度h-R3联合不同剂量照射组OD值分别为0.192 3±0.014 6,0.231 8±0.020 6,0.293 0±0.024 3,0.193 7±0.021 8,与单纯照射组相比,其OD值均明显减少(P<0.01);h-R3联合照射组的A549细胞形态变化明显,存活细胞数明显少于单纯照射组。结论:尼妥珠单抗(h-R3)单独应用对A549细胞的生长增殖未见明显抑制作用,但增强了照射对A549细胞的生长抑制作用,其放射增敏的作用机制值得进行分子生物学水平的深入研究。

E盒结合锌指蛋白2促进肺腺癌细胞A549迁移的作用研究

目的研究转录因子E盒结合锌指蛋白2(zinc finger E-box-bindingprotein,ZEB2)在肺癌组织中的表达及促进结肺癌细胞A549迁移的作用。方法研究起止时间为2018年3月至2019年5月。采用免疫组化法检测肺癌组织及癌旁组织中ZEB2蛋白的表达情况;Transwell法检测干扰或过表达ZEB2对A549细胞迁移作用的影响;RT-PCR和蛋白质印迹法(Western blotting)检测ZEB1对A549细胞中转移相关分子-E钙黏素(E-cadherin)表达的影响。结果与对照组相比,干扰ZEB2表达可抑制A549细胞的迁移能力,对照组穿过Transwell小室的细胞数量为(37.6±8.1)个,干扰ZEB2组为(12.3±3.2)个;相反,过表达ZEB2可促进A549细胞的迁移能力,对照组为(48.3±4.2)个,过表达ZEB2组为(129.6±12.1)个;干扰ZEB2可促进E-cadherin基因和蛋白的表达,过表达ZEB2则可抑制E-cadherin基因和蛋白的表达;ZEB2在肺癌组织中的表达明显高于在癌旁组织中的表达。结论ZEB2在肺癌组织中高表达并可促进肺腺癌细胞迁移能力。

白藜芦醇抑制A549人肺腺癌细胞增殖与IGF-ⅠR的关系

目的探讨白藜芦醇对人肺腺癌A549细胞增殖的抑制效应及其与IGF-ⅠR的关系。方法以人肺腺癌A549细胞株为研究对象,采用MTT方法测定细胞增殖,用RT-PCR与免疫印迹方法测定IGF-Ⅰ受体mRNA与蛋白表达水平。结果 2.5～15 nmol/L IGF-Ⅰ可显著促进A549细胞增殖(P<0.05),给予12.5、25.0、50μmol/L白藜芦醇对A549细胞增殖具有明显抑制作用(P<0.05)。白藜芦醇(6.25～50μmol/L)与10 nmol/L IGF-Ⅰ共作用于A549细胞,均可抑制IGF-Ⅰ的促A549细胞增殖作用,其中尤以25、50μmol/L白藜芦醇的抑制增殖作用显著(P<0.05),白藜芦醇可有效降低IGF-ⅠR mRNA与蛋白表达。结论白藜芦醇可通过降低IGF-ⅠR mRNA与蛋白表达有效抑制IGF-Ⅰ介导的A549肺癌细胞增殖。

RASSF1A基因转染对人肺腺癌细胞株A549增殖的抑制作用

目的:观察外源性RASSF1A基因对人肺腺癌细胞A549增殖及NF κB亚单位P65表达的影响。方法:利用脂质体转染技术将真核表达重组体pcDNA3. 0 RASSF1A质粒和空载体pcDNA3. 0质粒分别导入A549细胞,经G418筛选后获得稳定转染细胞克隆,Westernblotting检测RASSF1A基因表达。采用MTT(四甲基偶氮唑盐)法、流式细胞仪分析转染细胞的生物学行为。RT PCR和Westernblotting检测基因转染对P65表达的影响。结果:经脂质体转染和筛选,建立了稳定表达RASSF1A基因的A549细胞系。与未转染组和转染空白载体组比较,转染RASSF1A基因的细胞生长速度明显减慢(P<0. 05),细胞周期中G1 /G0期比例明显增加(P<0. 05),而S期比例减少;转染组细胞核内P65蛋白表达明显降低(P<0. 05),而全细胞P65蛋白及mRNA表达未见明显变化。结论:RASSF1A基因可能通过抑制P65活性而抑制人肺腺癌细胞A549的生长。