三种腺苷类似物抑制人高转移卵巢癌细胞侵袭的实验研究

背景与目的:腺苷作用于细胞信号转导系统,可抑制磷脂酰肌醇4-激酶活性、升高腺苷酸环化酶活性和细胞内cAMP水平、抑制血小板肌动蛋白聚合等。腺苷类似物有上述腺苷的生物活性,且不易为腺苷脱氨酶所降解,具有相对较长的生物半衰期。本研究拟观察2-氯腺苷、2-氯脱氧腺苷、2'-脱氧腺苷对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM体外侵袭的抑制作用。方法:以3种腺苷类似物处理HO-8910PM朱峰,等.三种腺苷类似物抑制人细胞、以5-氟尿嘧啶为细胞敏感对照,用台盼蓝拒染法观察药物对细胞的毒性效应;以人工重组基底膜观察细胞的侵袭、粘附和运动能力;以明胶酶显影法观察细胞基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)的分泌及活性;以RT-PCR检测细胞mta1mRNA、nm23H1mRNA表达。结果:2-氯腺苷和2-氯脱氧腺苷处理高转移卵巢癌细胞72h的IC50值分别为5.80μmol/L和2.61μmol/L,2'-脱氧腺苷对该细胞无明显抑制(对细胞的IC50值大于100μmol/L);6.0μmol/L的2-氯腺苷和2-氯脱氧腺苷对细胞侵袭的抑制率分别为(42.5±1.5)%(与对照组比较,P<0.01)和(9.9±0.5)%(P<0.05);对细胞运动的抑制率分别为(36.9±2.1)%(P<0.01)和(17.1±0.4)%(P<0.05);对细胞粘附的抑制率分别为(32.2±2.3)%(P<0.01)和(19.5±3.1)%(P<0.05)。而2'-脱氧腺?

腺苷及其类似物对猪血小板肌动蛋白聚合的抑制作用及可能机理

凝血酶和ADP刺激血小板肌动蛋白的聚合,腺苷、5′-氯-5′-脱氧腺苷及2′-脱氧腺苷抑制凝血酶和(或)ADP诱导的肌动蛋白聚合;腺苷和5′-氯-5′-脱氧腺苷对磷脂酰肌醇的磷酸化有抑制作用,且呈剂量效应关系;腺苷对凝血酶刺激的血小板中肌醇二磷酸的生成有抑制作用。本实验提示腺苷及其类似物对肌动蛋白聚合的抑制作用可能与它们对肌醇磷脂转换的抑制有关。

PLC-PKC途径参与腺苷类似物激活50pS钾离子通道过程

目的观察腺苷类似物cyclohexyladenosine(CHA)对大鼠肾小管髓袢升支粗段(medullary thick ascendinglimb,mTAL)管周膜钾离子通道的作用是否通过磷脂酶C-蛋白激酶C途径(phospholipase C-protein kinase C path-way,PLC-PKC pathway)。方法取SD大鼠肾小管髓袢升支粗段放置于倒置显微镜下的浴槽内,利用单通道膜片钳技术观察髓袢升支粗段管周膜钾离子通道活性改变。结果5μmol/L CHA对mTAL管周膜钾离子通道有激活作用(P<0.05)。在加入CHA基础上,分别加入PLC的抑制剂U-73122和PKC的抑制剂Calphostin C,钾离子通道的活性增加(P<0.05)。在加入CHA基础上,加入PKC的激活剂phorbol 12-myristate 13-acetate(PMA),通道活性降低(P<0.05)。结论激活PLC-PKC途径影响CHA对mTAL管周膜50 pS钾离子通道的激活作用。

腺苷类似物对肿瘤细胞的选择毒性效应

目的观察3种典型腺苷类似物对肿瘤细胞的毒性效应。方法以胎盼蓝活细胞拒染法测定药物对细胞生长、增殖的抑制及IC50;以流式细胞术(FCM)观察药物对细胞周期的影响;以荧光双染法(Hoechst33258 /PI)观察药物对细胞形态学的影响;以Westernblot法观察药物对细胞P53、Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。结果2-ClAdo、2- CldAdo对所研究的细胞均有程度不等的毒性; 2’dAdo对各细胞生长、增殖均无明显抑制(c=100μmol/L即30μg/mL内); 2 -CldAdo明显阻断细胞于S、G2 /M期, 2 ClAdo阻断细胞于G0 /G1 期; 2-CldAdo致细胞坏死为主, 2-ClAdo既致细胞坏死又诱导凋亡; 2 ClAdo下调Bcl 2,上调P53、Bax蛋白表达; 2 CldAdo小幅上调P53、小幅下调Bcl 2,不影响Bax蛋白表达。结论腺苷类似物对细胞生长、增殖呈选择性抑制, 2- ClAdo、2 -CldAdo对实体肿瘤细胞有程度不等的毒性,其毒性差异与凋亡相关因子P53、Bcl -2、Bax介导有关。

腺苷及类似物对猪血小板膜磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用

猪血小板膜与不同浓度的腺苷或100μmol/L的腺苷类似物及γ—^(32)P—ATP37℃反应5min.被标记的磷脂酰肌醇—4—单磷酸通过薄层层析法分离、放射自显影定位、液体闪烁计数定量的结果表明:腺苷可强烈抑制猪血小板膜磷脂酰肌醇磷酸化,半数抑制率为14μmol/L;腺苷类似物cAMP、5′—氯—5′—脱氧腺苷、腺嘌呤、α′—脱氧腺苷、AMP、阿糖腺苷、cGMP在浓度为100μmol/L时对猪血小板膜磷脂酰肌醇磷酸化有不同程度的抑制作用。

侧链键接腺嘌呤的高分子核酸类似物对N-磷酰化氨基酸偶联尿苷反应的模板效应

将高分子核酸类似物聚甲基丙烯酸 -β-( N7-腺嘌呤基 )乙酯加入到尿苷与 N-( O,O -二异丙基 ) -磷酰化丙氨酸的反应体系之中 ,研究其对此反应体系的影响 .结果表明 ,聚甲基丙烯酸 -β-( N7-腺嘌呤基 )乙酯参与了尿苷与磷酰化丙氨酸间的相互作用 ,并促进了具有较高离子密度、较大的流体动力学体积的大分子量产物及 Up U,Up Up U等寡核苷酸片断的生成 ,表现出明显的模板效应 .不含腺嘌呤的对应高分子则无此模板效应 ,聚甲基丙烯酸 -β-( N7-腺嘌呤基 )乙酯对尿苷与 N-( O,O -二异丙基 ) -磷酰化丙氨酸反应的模板效应并不是由于其高分子主链引起的 ,而应归因于其侧链所挂的腺嘌呤碱基的存在 。

一例应用腺苷核苷类似物GS-441524对猫传染性腹膜炎进行抗病毒治疗分析

猫传染性腹膜炎(FIP)是猫冠状病毒(FCoV)的特异性位点突变引起的。超过95%的患有FIP的猫在诊断后的几天到几个月内死于疾病,历史上使用了各种治疗方法,但最近开发的抗病毒药物GS-441524在治疗FIP方面显示出了希望,显示患有传染性腹膜炎的猫对治疗有积极反应。为探究GS-441524在临床应用效果,北京市天空之城宠物医院接诊一例疑似患有FIP的猫,对其进行实验室检测,应用临床症状、血液生化、B超探查、细胞涂片、RT-PCR检测,确诊之后对其应用此药物,按2mg·kg-1给药,连续12周,进行治疗分析。结果表明:患猫应用腺苷核苷类似物GS-441524药物,体温正常,明显腹水减少,体重增加,食欲加强,血液指标趋于正常,异常炎症反应得到控制。笔者对此这次诊疗结果做出以下总结:GS-441524对猫传染性腹膜炎有很好疗效,并为抗病毒药物的临床实验提供数据性,希望将来能够大量应用于治疗猫FIP的临床中。

腺苷及其类似物对猪红细胞膜上磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用

本文研究了腺苷及其类似物对猪红细胞膜上磷脂酰肌醇磷酸化的影响。研究结果表明:1、腺苷对磷脂酰肌醇磷酸化有明显的抑制作用,IC_(50)=15μmol/L;动力学分析表明,这种抑制作用机理是与ATP竞争性的;2、腺嘌呤、AMP、ADP、5＇-氯-5＇-脱氧腺苷、阿糖腺苷、2＇-脱氧腺苷对磷脂酰肌醇磷酸化有不同程度的抑制作用;3、cAMP对磷脂酰肌醇磷酸化也有抑制作用,这提示了cAMP与肌醇脂质信使系统有联系;5、6-氯-嘌呤核苷(100μmol/L)对该磷酸化无显著抑制作用。

新型α-黑素细胞刺激素类似物亲和力和生物学效应的测定

检测新型α-黑素细胞刺激素(α-MSH)类似物与受体的亲和力和生物学效应。构建黑皮质激素受体表达质粒,经测序鉴定后以磷酸钙-DNA共沉淀法转染HEK-293细胞,48h后加入含900μg.mL-1G418的细胞维持液,稳定表达后以流式细胞仪检测。采用放射性配体结合分析测定新型α-MSH类似物对受体的亲和力,并以[3H]环磷酸腺苷(cAMP)测定盒检测新型α-MSH类似物作用细胞后的cAMP水平。结果显示,新型α-MSH类似物对MC1R,MC3R,MC4R及MC5R的抑制常数Ki分别为(0.159±0.040),(35.430±6.743),(19.293±2.780)和(2.230±0.670)nmol.L-1。其对MC1R,MC3R,MC4R及MC5R的EC50值分别为(0.45±0.07),(7.80±0.65),(2.55±0.23)和(0.33±0.09)nmol.L-1。新型α-MSH类似物是MC1R和MC5R高选择性的激动剂。

三种核苷类似物治疗肝硬化失代偿期患者的疗效比较

目的观察核苷类药物治疗乙型肝炎肝硬化失代偿期的疗效。方法将83例乙型肝炎肝硬化失代偿期患者随机分为四组。所有患者在保肝、对症治疗的基础上,分别给予拉米夫定(A组)100 mg/d、阿德福韦酯(B组)10 mg/d、恩替卡韦(C组)0.5 mg/d口服,对照组(D组)仅给予保肝、对症治疗。观察所有患者临床症状、体征、肝功能、凝血酶原时间活动度(PTA)、乙型肝炎病毒(HBV)DNA定量、乙型肝炎e抗原(HBeAg)转阴情况等。结果在抗病毒治疗过程中,A组患者死亡2例,另1例在治疗过程中出现YMDD[酪氨酸(Y)、蛋氨酸(M)、2个天冬氨酸(D)]变异及时加用阿德福韦酯退出观察;B组患者死亡1例;C组患者无一例死亡;D组疗效最差,死亡4例。A、B、C组患者临床表现、肝功能及血清病毒学指标均较D组有明显改善,差异有统计学意义(P<0.01)。结论乙型肝炎肝硬化失代偿期患者应给予抗病毒治疗,可首选恩替卡韦,亦可选用阿德福韦酯或拉米夫定。

腺苷的结构改造与细胞毒活性研究

目的：为寻找新型抗肿瘤化合物和探讨糖环羟基对８Ｃｌ腺苷的抗肿瘤活性的影响，合成了腺苷的维甲类似物和８Ｃｌ腺苷衍生物。方法：对腺苷的８位和８Ｃｌ腺苷的糖环羟基进行了结构改造，以酰胺键和酯键在腺苷的８位连接了具共轭基团的肉桂酰基和苯甲酰基，得到腺苷的维甲类似物；对８Ｃｌ腺苷的５′羟基进行了甲磺酰化，硝基化以及氯代反应，得到了它的衍生物。结果：合成了（６～１２），（１６），（１８～２０）等１１个新化合物。结论：这些新化合物以ＨＬ６０，ＢＩＵ，ＫＢ细胞株的细胞毒为指标进行生物活性筛选，结果表明，８位取代基和５′羟基是影响腺苷类化合物细胞毒活性的重要药效基团。

腺苷A1受体激动剂预处理对兔心肌缺血再灌注损伤的延迟保护作用

【目的】探讨腺苷A1受体激动剂（2-氯环戊腺苷，CCPA）预处理对兔心肌缺血再灌注损伤的延迟保护作用。【方法】30只健康新西兰雄性大白兔随机分成3组：假手术组（C组）、缺血再灌注组（I／R组）、CC—PA组（P组），每组10只。C组仅行左冠脉套线而不阻断160min，I／R组行左冠脉阻断40min，再灌注120min，P组在静注CCPA 0．1mg／kg 24h后，处理同I／R组。各组分别于左冠前降支阻断前20min（T1）、左冠前降支阻断20min（T2）、左冠前降支阻断40min（T3）、心肌再灌注1h（T4）、心肌再灌注2h（T5）五个时点抽取颈内动脉血测定血清中肌钙蛋白Ⅰ（cTnI）含量。再灌注120min后，测心肌超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量和心梗面积，电镜下观察细胞超微结构变化。【结果】与I／R组比，P组cTnI和MDA降低（P〈0．05），SOD增高（P〈0．05），心肌梗死面积减少（P〈0．05），细胞结构损伤减轻。【结论】CCPA延迟预处理对兔心肌缺血再灌注损伤有保护作用。

GLP-1类似物的葡萄糖浓度依赖性降糖机制研究

目的探讨胰高糖素样肽-1(GLP-1)类似物(Exendin-4)对MIN6细胞的葡萄糖浓度依赖性降糖作用机制。方法检测GLP-1类似物(Exendin-4)在不同葡萄糖浓度下对体外培养的MIN6细胞的ATP水平、cAMP含量、腺苷酸环化酶活性和胰岛素分泌量的变化。结果在2.8 mmol/L葡萄糖培养条件下,Ex-endin-4使细胞三磷酸腺苷(ATP)水平无明显变化,环磷酸腺苷(cAMP)含量、腺苷酸环化酶活性和胰岛素分泌量无明显增加(P>0.05);在25 mmol/L葡萄糖培养条件下,Exendin-4使细胞ATP水平明显降低,cAMP含量、腺苷酸环化酶活性和胰岛素分泌量明显增加(P<0.05)。结论 GLP-1类似物(Exendin-4)具有葡萄糖浓度依赖的促胰岛素分泌作用,细胞内cAMP含量增加是其引起胰岛素释放的关键环节。

重组大肠杆菌表达的枯草芽孢杆菌腺苷磷酸化酶的应用研究

利用枯草芽孢杆菌嘌呤核苷磷酸化酶基因deoD在大肠杆菌BL21(DE3)中表达所得到的蛋白为酶液,催化核苷、2′-脱氧核苷与嘌呤及其类似物之间的反应。结果表明,嘌呤类核苷与嘧啶类核苷相比,前者达到反应平衡的时间较短、产物的得率(或底物的转化率)较高;腺苷磷酸化酶对核苷类的催化活性要比对脱氧核苷类的催化活性强;就碱基而言,对嘌呤和嘌呤类似物的催化活性基本相同。

腺苷A1受体新配体YZG-404的镇静催眠作用

目的研究新化合物YZG-404与腺苷A1受体(A1R)和腺苷A2A受体(A2AR)的亲和力及其镇静催眠作用。方法采用放射性配体受体竞争结合实验分别测定YZG-404与腺苷A1R和腺苷A2AR的亲和力;采用开阔场实验测定其对小鼠自发活动的影响;采用协同戊巴比妥钠睡眠实验评价其镇静催眠作用。结果 YZG-404对腺苷A1R亲和力较高,Ki值为98.8 nmol/L,而对腺苷A2AR的亲和力较低,Ki值约为9828.8 nmol/L。与溶剂对照组比较,YZG-404(1.25、2.5和5 mg/kg,ig)明显抑制小鼠的自发活动,抑制率分别为26.0%、59.7%和67.1%。另外,YZG-404(1.25、2.5和5 mg/kg,ig)可以明显延长戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间,延长率分别为49.7%、129.5%和126.0%,并缩短入睡潜伏期,最高缩短率为19.8%。YZG-404能提高阈下剂量戊巴比妥钠诱导小鼠入睡率,最高入睡率达80%,效果与阳性对照药地西泮相当。结论新化合物YZG-404与腺苷A1R亲和力强,并具有强效的镇静催眠作用。

腺苷脱氨酶活性与艾滋病

腺苷脱氨酶(Adenosine deaminase;EC3.5、4.4;ADA)是一种存在人体许多组织的催化腺苷脱氨和其他腺嘌呤核苷类似物转变为次黄苷的嘌呤酶,其生理作用似乎与淋巴样细胞有特殊关系.